畜禽大肠杆菌对七种常见抗菌药的敏感性试验

畜禽大肠杆菌对七种常见抗菌药的敏感性试验2010届动医专升本2班董卫超论文提要

一、前言二、材料与方法三、结果四、讨论一、前言

近期随着畜禽养殖业的快速发展，大肠杆菌病已成为危害养殖业的主要传染病之一。近年来，由于长期大量抗菌药物的滥用，造成大肠杆菌耐药菌株不断产生，尤其是兽医临床已出现多重耐药性、超强耐药的大肠杆菌，即同时对兽医临床常用抗菌药物：氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类和氟喹诺酮类等产生耐药性，导致常规药物的药效降低甚至消失，临床可供选择药物的余地越来越少，大肠杆菌病的防治难度日益增加，给养殖业造成了严重的损失

鉴于畜禽大肠杆菌耐药性的普遍产生，为了更好的指导临床用药及减少耐药菌株产生，故此，对河南部分地区的畜禽大杆菌进行简单药敏分析。二、材料与方法病料：采自河南省内的养殖场。培养基：血平板培养基、营养肉汤、麦糠凯琼脂、大肠杆菌显色培养基等。抗菌药物名称：阿米卡星、强力霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、克林沙星、加替沙星、SMM/TMP(5:1)。仪器：洁净工作台、LRH-250-Ⅱ微电脑控制生化培养箱、96孔V型反应板、BS224S型电子天平等。细菌的分离培养与保存

内脏病死动物血平板划线37℃培养24h接种入新鲜肉汤37℃培养24h肉汤培养基麦康凯划线培养4℃保存备用挑取单个菌落接种肉汤培养24h疑似大肠杆菌菌液

药液的配制用电子天平称取适量的各种药物无菌配制成浓度为1280μg/mL的药液5mL。

恩诺沙星

氟苯尼考

克林沙星少许NaOH+无菌蒸馏水少许NaOH+无菌蒸馏水N,N-二甲基甲酰胺+少许乙醇恩诺沙星药液氟苯尼考药液克林沙星药液菌液的配制

吸取5μL保存菌液接种于5mL新鲜肉汤中37℃过夜培养充分混匀，进行万倍稀释至105CFU/mL

吸取2μL菌液于平皿中同20mL新鲜肉汤最小抑菌浓度的测定第12列中，前4孔为阴性对照，后4孔为阳性对照。123456711812910ABCDEFGH第1列：加入各药液60μL。从后向前每孔依次加入60μL菌液至第一孔。保鲜膜覆盖后标记菌株，然后置37℃培养18~24h后，观察结果。与第一孔药液吹打混匀后，吸取60μL混合液至第二孔，吹打混匀，以此倍比稀释至第11孔。微量肉汤稀释法三、结果1细菌的鉴定观察结果2畜禽大肠杆菌对不同药物的MIC值3、畜禽大肠杆菌对各组药物的耐药率4、多重耐药谱统计1细菌的鉴定观察结果

观察所分离的细菌生长情况，在麦康凯培养基上成桃红色、扁平、圆形、隆起、光滑、湿润的菌落，为疑似大肠杆菌。另外在麦康凯培养基上还培养出桃红色和黄白色透明状两种菌落，将这两种菌落分别接种于大肠杆菌鉴别培养基上做鉴别培养，结果显示：在麦康凯培养基上显示桃红色的菌落经大肠杆菌显色培养基培养呈蓝绿色的，可鉴定为大肠杆菌，而在麦康凯培养基上显示黄白色透明状的菌落，在大肠杆菌显色培养基上显示无色，所以可能是其他菌种。将确定为大肠杆菌的4℃保存备用，进入本试验。

2、不同药物对大肠杆菌的MIC值细菌氟苯尼考多西环素阿米卡星SMM/TMP(5/1)恩诺沙星加替沙星克林沙星1320160<0.6251604051.252>640160<0.625>6406401053>640160<0.625>640160102.510640160<0.625>64040102.512640160<0.625>6402051.2514640160<0.625>64064052.519160201080102.51.2521640160320>64080101.252264016080>640202.51.252458020801051.25273206401.2564040402.52864080<0.625>6406402010296401601.25>640801053016080<0.625>6402051.2531640801.25>640640202.53364080640>640640202.53464016020>640320102.53、畜禽大肠杆菌对各组药物的耐药率MIC值测得结果1药物耐药浓度(μg/mL)耐药株数MIC范围(μg/mL)MIC50(μg/mL)MIC90(μg/mL)耐药率(%)多西环素≥161720~640160160100恩诺沙星≥41710~64080640100氟苯尼考≥8165~>640640>64094.1SMM/TMP≥5121480~>640>640>64082.4加替沙星≥8102.5~40102058.8阿米卡星≥643<0.625~6401.2532017.6克林沙星≥811.25~102.555.94、多重耐药谱统计四、讨论1