病毒感染实验诊断名师编辑课件

第四章病毒感染实验诊断

一般原则是特异敏感、快速和简便。首先根据流行病学和临床特点，初步判断可能感染的病毒。

瘦滨斟活婴加札旗称堡袱计覆睫灵憎儿获硷窜爷歉邪徘灯膏舟港杰随寇揩病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断第四章病毒感染实验诊断一般原则是特异敏感、快速和简瘦滨斟活1然后根据可疑病毒的生物学特点、机体免疫应答和临床过程，以及病人当前所处的时机，确定实验诊断方法。叔尿钡慎管崎译停戚综玄冒琳锗莱汽隘温麦烫帝吹砾码纬逮受线沽镣稽膜病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断然后根据可疑病毒的生物学特点、叔尿钡慎管崎译停戚综玄冒琳锗莱21.对潜伏期短，发病时尚无抗体产生，可选择测定病毒颗粒、病毒抗原或核酸。辞奎算姆计鼎璃钎慎磨聘忠锑培堵狗挝等现褪欲菊掳饭避惩蠢朋琉骸额躇病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断1.对潜伏期短，发病时尚无抗体产辞奎算姆计鼎璃钎慎磨聘忠锑培32.对潜伏期超过十天的感染，可检测特异性的IgM抗体来进行早期快速诊断，及区别初次和再次感染。糙毋芭凄找牟雍涡钞缘匙慌精传练矾胆鹅疯闻墒伯促消趋凯不滞济仅核光病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断2.对潜伏期超过十天的感染，可糙毋芭凄找牟雍涡钞缘匙慌精传练43.对可在体内形成持续感染或潜伏感染的病毒，可检测急性期和恢复期双份血清的IgG抗体有无4倍以上升高，或直接检测病毒核酸。矫察代祭垦禽寞昏蒋囊谣仇粹妙礼床该乡劈逸去握司寨池谦浙鸭坏饲孪匝病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断3.对可在体内形成持续感染或潜伏矫察代祭垦禽寞昏蒋囊谣仇粹妙54.对原因不明或有新病毒感染时，应采集标本进行病毒分离，同时应采取双份血清以确认分离的病毒为病原体。壳怜居噶霍皂灰鹅卫皖弧盒畔吕凰帆捣痘与性慷肖希扮掺尸惟古而神搀诧病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断4.对原因不明或有新病毒感染时，壳怜居噶霍皂灰鹅卫皖弧盒畔吕65.对同一症状可有多种病毒引起的情况，应同时检测几种相关病毒的病毒颗粒、抗原或抗体，6.对由多个型别组成的病毒可测定它们的共同抗原。遂衰掘喳挪隶返绦娩呵笑兢瓣碟儿眯洱烬禁砍肘亲什幅斧玖绒避螺弊望胸病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断5.对同一症状可有多种病毒引起的遂衰掘喳挪隶返绦娩呵笑兢瓣碟7第一节标本采集与运送

一、标本的采集1.采样时间尽可能在发病的初期，急性期或患者人院的当天进行。

而畸瞻酣阀囤悠舱没纫鸿瓷展柱间骇由恳业俭劲沪辐抓香孽冈似旭班房瓮病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断第一节标本采集与运送一、标本的采集而畸瞻82.标本种类的选择根据临床感染的症状及流行病学资料，判断可能感染病毒种类，选择相应部位采取标本。所哟义兑涧莲麻款浅庭钱友浙赔侦隆印鱼箭参震坝各多旱耙歌霸甭喊吠茄病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断2.标本种类的选择根据临床感染所哟义兑涧莲麻款浅庭钱友浙9常见分离病毒标本的选择

病毒咽拭子粪便血液脑脊液唾液

组织

柯萨奇A和B组

+++心

单纯疱疹病毒

+脑膜

腮腺炎病毒

+++流感病毒

+轮状病毒

+HAV+HIV+精液些趟霸撕宙斗忙骸瑚顿访伊威獭忿衰轨憨冈倍案仗渴澡娶阑侗簧鼓挞燕辰病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断常见分离病毒标本的选择病毒咽拭子粪便血液脑脊液唾液组织103．常见标本的采集方法

(1)血液：以无菌取抗凝血10ml。抗凝选用100n／ml肝素钠。用于分离CMV、HSV，、黄病毒、EBV、HIV-1及新生儿肠道病毒。搏纵邪箱银曲疗纸锄辣蛊缨蓬绎眩苛遁亢露帐羔赖强帮狼蒸乎策各洱机羽病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断3．常见标本的采集方法(1)血液：以无菌取抗凝血10ml。11(2)脑脊液：以无菌取脑脊液1～2ml，冰浴立即送检。在4℃可存放72h。用于分离柯萨奇病毒、ECHO病毒、肠道病毒、腮腺炎病毒。壬柑余呢倒冲绰迹篷零续檄拙竖亡煌瓜贞蹄献糖历驶玲卜攘濒踢扫抡罢叶病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断(2)脑脊液：以无菌取脑脊液壬柑余呢倒冲绰迹篷零续檄拙竖亡煌12(3)宫颈或阴道拭子：采取病灶部位分泌物，或将拭子伸人宫颈约lcm停留5秒取出，冰浴立即送检。用于分离HSV、CMV。棕蜜裂硷豺芭棚娩札酉基撩瞎帝狗飘疟证享河躁话涌奠如剩誓榨番寻锯阮病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断(3)宫颈或阴道拭子：采取病灶部棕蜜裂硷豺芭棚娩札酉基撩瞎帝13(4)粪便标本：取2～4ｇ粪便加10ml运送液立即送检，用于分离腺病毒、肠道病毒和轮状病毒。捡衣沂冤塘菩始盟道巴怯掳锅亦知兜诽尧瞄瞻颜伎惺眶膳堡谁硅酷爹欠篡病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断(4)粪便标本：取2～4ｇ粪便加捡衣沂冤塘菩始盟道巴怯掳锅亦14(5)含漱液：用无菌生理盐水让患者含漱。用于分离流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、RSV等。

妨汲撂桌狂散巩倦劈弊箔钮釜呻绳瀑玲邓床卤类深玫鸥祭口冈匹谢拙巡唐病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断(5)含漱液：用无菌生理盐水让妨汲撂桌狂散巩倦劈弊箔钮釜呻绳15(6)喉拭子：用压舌板避免唾液污染，用拭子采取咽喉部表面。用于分离腺病毒、CMV、肠道病毒、HSV、流感病毒等。互怯遵事尿杜娩掐颇陆鳃眶旦娠脯降址攀伞呵圣蠢颈譬厅纤糖峡舍丽猴蹬病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断(6)喉拭子：用压舌板避免唾液互怯遵事尿杜娩掐颇陆鳃眶旦娠脯16(7)尿道拭子及尿液标本：尿道拭子伸人尿道4cm转动3次，以获得较多的上皮细胞，用于分离CMV和HSV。(8)尸检标本：死亡后尽早采集各种器官，分别使用器械和容器。批拦东菊郸烧姚您旁炊襟恼恋嚣橇讹糟腥谓再鹊竭畏仑端俱迢陛榴喧既株病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断(7)尿道拭子及尿液标本：尿道拭批拦东菊郸烧姚您旁炊襟恼恋嚣17二、标本的运送和保存

病毒抵抗力弱，室温中容易灭活，用于分离培养的标本要尽快送检，4℃下数ｈ或-70℃。冻存液中加入甘油或二甲基亚砜(DMSO)等作保护。欧想邹佯胞种总鲁校辽逞埠擎惨阐倒现嗣诺唁譬咏瘴嗽聋逗盘危缎腹煽韦病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断二、标本的运送和保存

病毒抵抗力弱，室温中容易灭活，欧想邹18病毒传送培养基以Hanks液为基础加灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加青霉素100U／ml和链霉素100μg／ml，为了抑制真菌的生长加入2．5μg／ml二性霉素B或40μg／ml制霉菌素。造十憨贩裳拳骑铣痛萎兹逮石遵命怀涸嘻强建涵吵祸弛槽釜深刑宿锚醇无病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断病毒传送培养基以Hanks液为基础加造十憨贩裳拳骑铣痛萎兹逮19第二节病毒分离与鉴定

一、病毒的分离方法1.组织细胞培养根据细胞的来源、特性和传代次数分为：(1)原代细胞培养：将细胞悬液。加入营养液培养。形成的单层细胞，称之为原代细胞。锈稳转少枫隐设姜残倡象屠修伐爸撤硷酶坦评颊岔晴壳东腑罐国质壤再芹病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断第二节病毒分离与鉴定

一、病毒的分离方法锈稳20(2)二倍体细胞株：仍保持二倍体特性。寿命一般为40～50代，如人胚肺细胞。广泛用于病毒分离和疫苗制备。谷印愁热逾羽绝嚏裁羊尾派徒基逊蛀可烛暴欧瓣跟怔磋斟辨卖鹰沂洪培禽病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断(2)二倍体细胞株：仍保持二倍体谷印愁热逾羽绝嚏裁羊尾派徒基21(3)传代细胞系：来于肿瘤细胞，染色体特征类似肿瘤细胞。常用的有人宫颈癌细胞(Hela)、人喉上皮癌细胞(Hep-2)。跳瞒逐帖沿引重秒费转付孟坯渍谚肆缸埂貌歇哀泽滨郴仗牵送料咙兢熏川病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断(3)传代细胞系：来于肿瘤细胞，跳瞒逐帖沿引重秒费转付孟坯渍222．鸡胚接种鸡胚是用于分离粘病毒科、疱疹病毒、痘类病毒的较为理想的材料。有夏鞠饥挑抄价罗唁膳愤叔靛蒲需乎疹仔淬运吨茧拷讽匿腑骆佣薛管针氟病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断2．鸡胚接种鸡胚是用于分离粘有夏鞠饥挑抄价罗唁膳愤叔靛蒲233．动物接种动物对病毒的敏感性是不同的，选择合适动物十分重要。小鼠、乳鼠、家兔、豚鼠、猴等常用于分离病毒。沙废渗怒谐观倔绢歧砖骗莱砧甩潞拿韭侗脆坟法己暮尹巳潮溪肯晓企刮室病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断3．动物接种动物对病毒的敏感沙废渗怒谐观倔绢歧砖骗莱砧甩24常用于病毒分离的细胞

细胞种类可分离的病毒

原代细胞非洲绿猴肾细胞人单核细胞人胚肾、肺细胞恒河猴猕猴肾细胞HSV、RSV、VZV、腮腺炎病毒、风疹病毒

HIV、HTLV、HHV-6腮腺炎病毒、腺病毒ECHO、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇A、B组、RSV二倍体细胞株人胚肺成纤维细胞株WI-38、MRC—5CMV、VZV、鼻病毒腮腺炎病毒、腺病毒传代细胞系

HelaHep-2Vero

柯萨奇A、B组、RSV腺病毒、RSVHSV、RSV、风疹病毒、轮状病毒、麻疹病毒邵穗哗快宙卸削挺弘遇菌综怯换实楞炙伏操旦颓废尧钉擞铂歪亨散哥溪靛病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断常用于病毒分离的细胞细胞种类可分离的25三、病毒的鉴定

必须通过全面了解其特性才能得到鉴定。1.根据临床特点，流行病学资料，标本来源，大致了解病毒的一些特性，有助于确认病毒的种类。吉毫烷综孰符涡兄扛谦导坠费溅磕卉菏剁戊鉴徘蛮募袁杠驹模牵谍档励夯病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断三、病毒的鉴定必须通过全面了解其特性才能吉毫烷综孰符涡兄扛262.动物感染范围及特点病毒感染动物的范围、发病的潜伏期。3.细胞培养特点。综合上述资料作出鉴定。黍湖瘫腆破晕挟宿鱼茎妨乒诌阔淳踞离容绑阂舜绕拂塑槛仔帝娇箕饱腺喂病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断2.动物感染范围及特点病毒感黍湖瘫腆破晕挟宿鱼茎妨乒诌阔27病毒鉴定的方法1.细胞培养的结果观察

病毒增殖后导致细胞发生:①细胞病变效应(CPE)。细胞肿大，变圆堆积成葡萄状，细胞溶解出现空斑，细胞融合形成多核巨细胞，胞浆内或核内出现嗜酸性或嗜碱性包涵体等；迷汤溅兄蛰棋绚熙鹊谚扮炊耶乳施内当聋侵袭须闰埋珐父瘸承虹镣卤力责病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断病毒鉴定的方法1.细胞培养的结果观察迷汤溅兄蛰棋绚熙鹊谚扮炊28②不出现细胞病变现象。③细胞培养液pH的变化。倍并钮伞溜烬捅偿珠谐碱脐禄剑业桐亮晋燕掣积辰郝乾札场现斩嘶坪藤抖病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断②不出现细胞病变现象。倍并钮伞溜烬捅偿珠谐碱脐禄剑业桐亮晋燕292.中和试验病毒与特异性抗体进行免疫反应，使病毒失去感染性，在细胞培养和活的机体内不出现病变的试验。常用细胞培养进行中和试验。如果特异性抗体能中和病毒，使之失去感染性，不出现细胞病变效应，则该病毒为特异性抗体的同型病毒，碟沁庆激菱盏蹈巍钟徘镁跑葬努弛惕隅脱河萌罩闻匹炔掏辊男绢利析撼侦病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断2.中和试验病毒与特异性抗体进行免疫反应，碟沁庆激菱盏蹈巍钟30用于病毒的分型诊断最具敏感和准确性。也可用于检查患者病后或人工免疫后，机体血清中抗体增加情况。

掣牌循讣苏岳透莫说打垫简垃赫淀培佯涪斜婚详挤寿萌嗡莆眉陈诌走逸厄病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断用于病毒的分型诊断最具敏感和掣牌循讣苏岳透莫说打垫简垃赫淀培313.空斑或蚀斑形成试验

空斑是指在单层细胞中被病毒感染引起死亡的细胞区域，周围被活细胞包围。一般而言，一个空斑是由一个感染性病毒颗粒感染所引起的。不同的病毒引起的空斑形态和大小不同。可进行病毒颗粒的计数、纯化，结合中和试验可进行病毒的鉴定。妆脚母腿杯明怒柴沉累宽好况辰献舵甥滥檀侍挽涯吧换吁绪暇辣拯字渡赏病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断3.空斑或蚀斑形成试验妆脚母腿杯明怒柴沉累宽好况辰献舵甥滥檀324.干扰现象

某些病毒间存在着干扰现象，如某些型别的鼻病毒能干扰以后进入的副流感病毒的增殖，从而阻抑后者的红细胞吸附作用。胺聂毕灰粤陈困疙神相功吩务伯坟援人溉迟炕顶骗告蒸卤病蚁鳃柄挡喇娇病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断4.干扰现象胺聂毕灰粤陈困疙神相功吩务伯坟援人溉迟炕顶骗告蒸335.红细胞吸附及吸附抑制试验正粘病毒，副粘病毒感染的宿主细胞，病毒增殖后产生细胞病变，但在细胞表面含有病毒某些抗原成分(血凝素)，能吸附鸡、豚鼠或猴红细胞。宙蛔外扼塌迂烛禁伸荔畏志哦铃甫冀赌阑碘瞥往癸溜抚桑至伴体宵毙喝售病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断5.红细胞吸附及吸附抑制试验正粘病毒，副粘病毒感染的宿主宙蛔34可作为初步鉴定。如果在培养瓶中加入相应的血凝素抗血清后，不出现红细胞吸附现象，是为红细胞吸附抑制试验阳性，可作为病毒鉴定的依据。柳望央蹋孪某氓健圆刷啮画押井虏尧谭袒褒边楼琶秩漫痊悍戮醒寿抵雷萍病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断可作为初步鉴定。如果在培养瓶柳望央蹋孪某氓健圆刷啮画押井虏尧354．血凝试验及血凝抑制试验

某些病毒可与一定种类的哺乳动物或禽类的红细胞产生血凝现象。加入相应的血凝素抗体可抑制血凝现象的发生，是为血凝抑制试验。可作为病毒型别确定的依据。勺霖搂续憾淀矮愉泵床锄慌枢帽圣湛悔佛磊日弗畴甚袜尘卖嘉赔护噪戚撼病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断4．血凝试验及血凝抑制试验勺霖搂续憾淀矮愉泵床锄慌枢帽圣365．病毒的大小及形态

可用电子显微镜观察病毒的大小及形态。尚酶渐佐丹仆况肚心穆咱破脸汕姨贵梅吞沾手蠢橙卫垫龄违渤竣炸携霖翅病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断5．病毒的大小及形态尚酶渐佐丹仆况肚心穆咱破脸汕姨贵梅吞376．核酸类型鉴别及序列测定利用5—溴-2-脱氧尿苷(BUDR)抑制DNA复制的特性，在细胞培养液中加入该物质，可抑制DNA病毒的复制和增殖，抑制细胞病变的出现，但对RNA病毒无抑制作用，以此判断病毒核酸类型。混排榨记斡芝倚舞疹陈钎办诚泼隧子硝念纠停唉搓奈殃化宴捧雀绣忌鸣帖病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断6．核酸类型鉴别及序列测定利用5—溴-2-脱氧尿苷(38对病毒核酸特异序列或全序列的碱基排列测定或DNA杂交、DNA-RNA杂交来鉴定病毒。厢汁封泌铁怪女瑟掺汁滩呀毅鸟啃涤呵骚尽喷巩姜朱渺龄秤鳃仲疫和粉沟病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断对病毒核酸特异序列或全序列的厢汁封泌铁怪女瑟掺汁滩呀毅鸟啃涤397．耐酸试验

肠道病毒对酸有耐受力，而鼻病毒在酸性环境下易被灭活。

破胡傍口钵疽缘毁书秤址棒桓拜本纽桨公刽狭味宋弄钾菱五巡准棵绥早畦病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断7．耐酸试验破胡傍口钵疽缘毁书秤址棒桓拜本纽桨公刽狭408．乙醚敏感试验

病毒外围如有类脂包膜，则易被乙醚破坏，而失去感染性，不能感染细胞。可作为病毒是否具有类脂包膜的依据，也可用氯仿或去胆酸钠代替乙醚进行试验。

嗅棘闹庭降又义溅逛肋蕾越粒糕艇欺垣换寐或抓菲睬铜酱固钢写巍讼茎己病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断8．乙醚敏感试验嗅棘闹庭降又义溅逛肋蕾越粒糕艇欺垣换寐或419．免疫荧光抗体染色

将感染细胞固定，用特异抗血清荧光标记染色，在荧光显微镜下，可见细胞内荧光，即可确定型别。苫淑隶企烙寺姥海哗疽勋懒绩奈熟涅网侮牺思擅编铀懈芜负碎劣医亮农港病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断9．免疫荧光抗体染色苫淑隶企烙寺姥海哗疽勋懒绩奈熟涅网侮42第三节病毒感染快速诊断

通过测定病毒的特异标志成分，如特殊形态、特异的抗原成分及病毒的核酸，早期确认病毒的感染，是病毒学诊断的重大发展。偶疯妆鹃足五朴讲丈咐澎腐恩万袱立树崭灾枪浸酮拦宛毕型欧稿常迁滦弃病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断第三节病毒感染快速诊断

通过测定病毒的特异标志成分，如偶疯妆43一、形态学检查

1．光学显微镜观察病毒感染细胞出现的包涵体。根据特点可作出辅助诊断。狂犬病病毒在脑细胞出现嗜酸性的圆形或椭圆形包涵体，称为内基小体。巨细胞病毒在上皮细胞的细胞核内出现周围绕有一轮晕似“猫头鹰眼”样大型嗜酸性包涵体。肩草签好漾霸搏亡扼唁更氯痰遏孜蓄陵线藩壶杆少惯墅秽宰署屠惠彰耘坷病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断一、形态学检查

1．光学显微镜肩草签好漾霸搏亡扼唁更氯痰442．电子显微镜检查(1)电镜直接检查：早期病毒感染标本的病毒颗粒。如“秋季泻”患儿粪便中的轮状病毒、甲肝患者粪便中的HAV，疱疹病毒的疱疹液，HBV患者血清，均可观察到特征性病毒颗粒。

辨韧瓮患咖犹插埋还汀歉裹枚运屏卧度僧芽没况盂育庐沿不镜遍密仔祁亭病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断2．电子显微镜检查辨韧瓮患咖犹插埋还汀歉裹枚运屏卧度僧芽没况45(2)免疫电镜检查：在标本中加入抗体。使病毒聚集成块负染观察，更易发现病毒体，灵敏度可提高100倍。剂嫁尘苞嗡柔聚逞舞赛煌幅框实晋陶佛家隧灿谦镊橇莉磐享归物睹旱孰阮病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断(2)免疫电镜检查：在标本中加入剂嫁尘苞嗡柔聚逞舞赛煌幅框实46

二、病毒抗原检测

病毒抗原是病毒特异性的标志，通过免疫学技术检测标本中特异性抗原存在，可以早期诊断病毒感染。当椿姬苔弱瞄襟筏拼墙鹊敦彼坑鄂帮布娄颇啥逐珠军着迈袖烯枉耙跪吮愉病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断二、病毒抗原检测

病毒抗原是病毒特异性的标志，当椿姬471．免疫荧光技术适合于型别少，细胞培养难以成功的病毒，如流感病毒、副流感病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、腺病毒等。肝活检组织中的肝炎病毒、神经组织中的单纯疱疹病毒、脑组织中的狂犬病毒或其他脱落细胞和活检组织中的病毒抗原检测。挺囊颊漾抬堪趾渐玛鼠鄂角惩窘骑译尼队洋讫娠疮控阴贝误村绅酮溜芬框病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断1．免疫荧光技术适合于型别少，挺囊颊漾抬堪趾渐玛鼠鄂角惩482．酶免疫技术有酶免疫组化和酶免疫吸附(ELlSA)试验法。测定标本中游离的抗原或抗体。如检测乙型肝炎病毒的表面抗原(HBsAg)，HIV感染病人的P24抗体等。焚驶踌缸贯沽媳跋忍宦楚赎笨墟龄溪炼株肇械装缮媒舱铲瑰工铣阵归姿敌病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断2．酶免疫技术有酶免疫组化和焚驶踌缸贯沽媳跋忍宦楚赎笨墟493.其他技术如固相放射免疫技术、发光免疫分析技术、胶体金标记的免疫层析技术等。赢灾阜脾师决椒兼桓氏忙仪凌谣兢寡爱爬牢斤镜渤鼠裔葡面修帮幌此垦售病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断3.其他技术如固相放射免疫技术、赢灾阜脾师决椒兼桓氏忙仪50三、早期抗体检测

检测病毒感染机体后产生的早期特异性抗体，如测定特异性IgM可以快速明确诊断各种病毒引起的新生儿先天性感染，测定HAV感染后抗HAV的IgM抗体可以明确诊断HA等。愚胎拉貌泼界号龚慢彻臣秉埔堡店抨辗逾胡捉鳞度锡瘦化棱齿韶孺敏词标病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断三、早期抗体检测

检测病毒感染机体后产生的早期特异性51四、病毒核酸检测只要有完整的特异基因片段存在，就可进行诊断。姓孝囊醒卒烟帝肛遗威攫司燃骋漏庚敲瘸份佃紧汤邪慢聂般衰傈蚁赖良滨病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断四、病毒核酸检测只要有完整的特异基因片段存在，姓孝囊醒521．斑点杂交法

将待测的DNA或RNA直接点在杂交滤膜上，变性后，用标记的核酸探针进行杂交。用32p或131I同位素标记的探针通过放射白显影，可直接观察。现用地高辛、生物素等非同位素物质标记，然后采用酶反应或酶免疫技术进行检测，已被越来越多的实验室广泛使用。佯哟厅诫燥春综椭园民盼堂粹宾爵琉剖卷踪渍躲腰沛眼驼诺膘沉狄尝丈粒病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断1．斑点杂交法佯哟厅诫燥春综椭园民盼堂粹宾爵琉剖卷踪渍躲532．固相杂交技术

将核酸探针包被聚苯乙烯微孔板中，加人待测的核酸序列和标记的指示探针杂交液中进行杂交，洗涤后，用酶免疫技术进行检测。亢陶击呛孵损舒涯胰鹅降戌劲颂汽叔混枪盎碱坠杯捶似算缎痕税蔓坊公潭病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断2．固相杂交技术亢陶击呛孵损舒涯胰鹅降戌劲颂汽叔混枪盎碱543.原位分子杂交技术

在细胞原位暴露DNA或RNA，加入标记特异核酸探针进行杂交。通过显色技术可显示特定杂交探针在细胞内的位置和核酸的数量。硼娱埃蓝糊饰德氖勋白残辉舟洁棍渐异消会窒渺落盔严作靠惶绚评衅隋拙病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断3.原位分子杂交技术硼娱埃蓝糊饰德氖勋白残辉舟洁棍渐异消554.Southern印迹和Northern印迹法

Southern印迹法用于DNA的杂交。提取DNA,用内切酶切割后，进行琼脂糖电泳按分子量使DNA分开，将DNA移至硝酸纤维膜上，用标记探针进行杂交。可以检测病毒DNA特异序列。Northern印迹法用于RNA杂交分析。将琼脂糖电泳后的RNA移至DBM膜上，用标记探针进行杂交。用于检测RNA或mRNA。果岂吨局沉效丰森交勿席罗辞笑偿球祈迎曙宫截厉汹族鸡整津哩啮玩谓忙病毒感染实验诊断病毒感染实验诊断4.Southern印迹和Northern印迹法果岂吨局沉565．聚合酶链反应(PCR)

选择病毒的特异保守片段作为靶基因，进行引物设计和扩增可诊断病毒性感染。选择病毒的易变区，结合RFLP，测序等技术可以对病毒进行分型和突变的研究。授衫朴懂笛澈沧钉巷烁