食品微生物检验技术W4302-2-微课件

微生物检验技术沙门氏菌检验—国标解读主讲老师：王凤军1微生物检验技术沙门氏菌检验—国标解读主讲老师：王凤军1食品微生物检验技术W4302-2-微课件微生物检验技术沙门氏菌检验—国标解读主讲老师：王凤军微生物检验技术沙门氏菌检验—国标解读主讲老师：王凤军标准版本1目录页CONTENTSPAGE主要修订内容2标准范围3标准流程4标准版本1目录页CONTENTSPAGE主要修订内容2标准1标准版本沙门氏菌检验—国标解读1标准版本沙门氏菌检验—国标解读一、标准版本换版依据：1）沙门氏菌污染的食物种类、季节及场所发生了重大变化。2）随着检测技术的发展，对于沙门菌的快速检测方法层出不穷，有些方法已通过国际权威机构认证（如AOAC）成为国际标准方法GB4789.4-2010标准版本一、标准版本换版依据：1）沙门氏菌污染的食物种类、季节及场所2主要修订内容沙门氏菌检验—国标解读2主要修订内容沙门氏菌检验—国标解读——修订说明修改了HE琼脂和三糖铁琼脂的配方；删除了2008版国标中一些培养基、试剂盒及设备的商品名，如科玛嘉和VITEK；删除了表2沙门氏菌在三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果的说明。二、修订内容与GB/T4789.4-2008相比，主要变化如下：——修改了标准的中英文名称；——修改了标准的范围；——修改了培养基和试剂；——修改了设备和材料;——修改了附录A。——修订说明二、修订内容与GB/T4789.4-20083标准范围沙门氏菌检验—国标解读3标准范围沙门氏菌检验—国标解读本标准规定了食品中沙门氏菌(Salmonella)的检验方法。本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。

三、标准范围本标准规定了食品中沙门氏菌(Salmonella)的检验方法4标准检测流程沙门氏菌检验—国标解读1前增菌2增菌3分离4生化试验5血清学鉴定6结果与报告4标准检测流程沙门氏菌检验—国标解读1前增菌2增菌3分离4生3前增菌

增菌2四、标准检测流程1分离3前增菌增菌2四、标准检测流程1分离45生化试验血清学鉴定45生化试验血清学鉴定136结果与报告综合生化试验和血清学鉴定结果，报告25g（mL）样品中检出或未检出沙门氏菌。6结果与报告综合生化试验和血清学鉴定结果，报告25g（m14四、标准检测流程

无菌取样品25g(mL)于36℃±1℃培养8-18h+1、前增菌放入盛有225mL缓冲蛋白胨水（BPW）的灭菌均质杯或均质袋中充分均质。四、标准检测流程无菌取样品25g(mL)于36℃±1移取前增菌培养物1mL，转种于10mLTTB内，同时，另取1mL，转种于10mLSC内。将接种后的TTB和SC分别置于42℃和36℃培养18h～24h。2、增菌四、标准检测流程移取前增菌培养物1mL，将接种后的TTB和SC分别置于

挑取增菌液分别划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板。

置于36℃培养，除BS琼脂平板需培养40h～48h外，其余平板均为18h～24h。

为了最大可能的检出沙门氏菌，必须使用两种或以上选择性分离培养基。3、分离培养四、标准检测流程挑取增菌液分别划线接种于一个BS琼脂平板为了3、分离培养-BS琼脂黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。四、标准检测流程3、分离培养-BS琼脂黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周3、分离培养-XLD琼脂菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。

菌名菌落特征甲型副伤寒沙门氏菌粉红色菌落，无黑心鼠副伤寒沙门氏菌粉红色菌落，有黑心大肠埃希氏菌黄色菌落，有胆酸盐沉淀四、标准检测流程3、分离培养-XLD琼脂菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，菌3、分离培养-HE琼脂蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。四、标准检测流程3、分离培养-HE琼脂蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎质控菌株名称菌落特征沙门氏菌、伤寒沙门氏菌紫红色大肠杆菌蓝色变形杆菌无色3、分离培养-显色培养基按照显色培养基的说明书进行判定。在法国科玛嘉显色培养基上：四、标准检测流程质控菌株名称菌落特征沙门氏菌、伤寒沙门氏菌紫红色大肠杆菌蓝色菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。

蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。按照显色培养基的说明进行判定。沙门氏菌种类复杂，在分离培养基上的菌落形态不唯一凡是符合表1中描述的典型菌落均进行后期生化鉴定3、分离培养四、标准检测流程菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可菌落呈粉36℃±1℃培养18～24h，必要时可延长至48h。

4、生化试验自选择性琼脂平板上TSI赖氨酸脱羧酶营养琼脂平板赖氨酸脱羧酶TSI下一步生化鉴定或备查四、标准检测流程36℃±1℃培养18～24h，必要时可延长至482、不要忘记接种营养琼脂平板留存菌株用于下一步生化鉴定，或必要时复查1、赖氨酸脱羧酶试验时必须设置对照，并在试验管和对照管中都加入液体石蜡封盖，阻止空气的氧化作用4、生化试验四、标准检测流程2、不要忘记接种营养琼脂平板留存菌株用于下一步生化鉴定，或必

沙门氏菌属在TSI和赖氨酸脱羧酶试验内的反应结果按照标准中表2进行判定。

结合TSI和赖氨酸脱羧酶试验的结果，可筛掉大部分非沙门氏菌。表2沙门氏菌属在TSI和赖氨酸脱羧酶内的反应结果4、生化试验四、标准检测流程沙门氏菌属在TSI和赖氨酸脱羧酶试验内的反应结果按照

从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种至:

供做靛基质实验的蛋白胨水或色氨酸肉汤、

尿素酶、

氰化钾试验管及其对照管。也可在接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试剂的同时，直接接种。同时接种接种后置于36℃培养18h～24h，必要时可延长至48h。4、生化试验四、标准检测流程从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种至:同时接种接种后置于3反应序号A1：表3沙门氏菌属生化反应初步鉴别表典型反应判定为沙门氏菌属沙门氏菌阴性如果后三项有两项以上不符合如果五项全符合4、生化试验四、标准检测流程反应序号A1：表3沙门氏菌属生化反应初步鉴别表典型反应判如果后三项中有一项不符合，按表4

可判定为沙门氏菌。表4沙门氏菌属生化反应初步鉴别表4、生化试验四、标准检测流程如果后三项中有一项不符合，按表4可判定为沙门氏菌。表4沙反应序号A2：靛基质阳性时，补做甘露醇和山梨醇试验，靛基质阳性变体甘露醇山梨醇沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性4、生化试验但需要结合血清学鉴定结果进行判定四、标准检测流程反应序号A2：靛基质阳性时，靛基质阳性变体甘露醇山梨醇沙门反应序号A3：H2S阴性时补做ONPG试验。阴性阳性H2S阴性ONPG试验ONPG阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。4、生化试验四、标准检测流程反应序号A3：H2S阴性时阴性阳性H2S阴性ONPG试验必要时按标准中表5进行沙门氏菌属生化群的鉴别。表5进行沙门氏菌生化群的鉴别4、生化试验四、标准检测流程必要时按标准中表5进行沙门氏菌属生化群的鉴别。表5进如选择系统生化做生化试验，NA上可疑菌落生化鉴定试剂盒全自动微生物鉴定系统可根据初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，4、生化试验——系统生化使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。四、标准检测流程如选择系统生化做生化试验，NA上可疑菌落生化鉴定试剂盒全自kit生化套管干制生化鉴定鉴定试剂条API20E生化鉴定试剂盒4、生化试验——系统生化四、标准检测流程kit生化套管全自动微生物生化鉴定系统system4、生化试验——系统生化四、标准检测流程全自动微生物生化鉴定系统system4、生化试验——系统生化5、血清学鉴定生化实验符合要求O抗原H抗原四、标准检测流程5、血清学鉴定生化实验符合要求O抗原H抗原四、标准检测流程5、血清学鉴定O抗凝集成块H抗絮状或绒毛状凝集血清学试验必须基于生化试验的结果，不能单纯以血清学实验结果来报告最终结果四、标准检测流程5、血清学鉴定O抗凝集成块H抗絮状或绒毛状凝集血清学试验必须血清分型的作用：诊断病情——如食物中毒控制动物和食品——如腹泻流行病学监测，流行病暴发溯源——伤寒必要时进行沙门氏菌菌群的鉴别——血清学分型5、血清学鉴定血清学分型为选做试验项目四、标准检测流程血清分型的作用：必要时进行沙门氏菌菌群的鉴别——血清学分型56、结果报告生化试验血清学鉴定报告25g（mL）样品中检出或未检出四、标准检测流程6、结果报告生化试验血清学鉴定报告25g（mL）样品中检出1、沙门氏菌的选择性增菌使用