2023年药典通则1105非无菌产品微生物限度检查

通则1105微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。本法不适用于活菌制剂的检查。向流空气区域、工作台面及环境应定期进展监测。剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。用中和剂或灭活剂的相容性。计数方法计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法〔Most-Probable-NumberMethod，简称MPN〕MPN物污染量很小的供试品，MPN法可能是更适合的方法。供试品检查时,应依据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方选方法的适用性须经确认。计数培育基适用性检查和供试品计数方法适用性试验供试品微生物计数中所使用的培育基应进展适用性检查。于该产品的微生物计数。性试验。计数培育基适用性检查计数方法适用性试验试验菌株试验菌液的制备计数培育基适用性检查计数方法适用性试验试验菌株试验菌液的制备霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌需氧菌总数计数 需氧菌总数计数总数计数 总数计数菌(Staphylococcusaureus)003)〕胰酪大豆胨琼脂培育基或胰酪大豆胨液体培育基，培育30～35℃18～24小时胰酪大豆胨琼脂培育基和胰酪大培育温度30～353天，接种100cfu胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培育基〔MPN法30～35℃，培育时间不超3100cfu铜绿假单胞菌〔Pseudomonasaeruginosa〕104〕胰酪大豆胨琼脂培育基或胰酪大豆胨液体培育基，培育30～35℃18～24小时胰酪大豆胨琼脂培育基和胰酪大培育温度30～353天，接种100cfu胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培育基〔MPN法30～35℃，培育时间不超3100cfu枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)30～35℃胰酪大豆胨琼脂培育基和胰酪大30～胰酪大豆胨琼脂培育基或胰酪大豆胨〔MPN法30～〔CMCC(B)63501〕

小时

353天，接种100cfu

35℃，培育时间不超3100cfu(Candidaalbicans)

胰酪大豆胨琼脂30～35℃，培育5

沙氏葡萄糖琼温度20～25℃，培育时间

胰酪大豆胨琼脂培育基〔MPN法不适35℃，培育时间不超

沙氏葡萄糖琼温度20～25℃，培育时间〔CMCC(F)98 温度20～25℃001〕 养时间2～3天

100cfu

种量不大于100cfu

100cfu

种量不大于100cfu沙氏葡萄糖琼脂培沙氏葡萄糖琼沙氏葡萄糖琼胰酪大豆胨琼脂胰酪大豆胨琼脂培养基或马铃薯葡萄养基〔MPN法不适糖琼脂培育基，培温度20～温度20～30～35℃，培育20～25℃，25℃，培育时间25℃，培育时间535℃，培育时间不超5～7接种量不大于5或直到获得丰富的种量不大于种量不大于100cfu100cfu孢子100cfu100cfu黑曲霉(Aspergillusniger)黑曲霉(Aspergillusniger)〔CMCC(F)98003〕菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5〔从菌种保藏中心获得的枯燥菌0代特性。计数培育基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表1。菌液制备按表1胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的颖培育物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%3～5ml含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌用含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶2小时内2～8℃242～8℃，在验证过的贮存期内使用。阴性比照菌生长。如阴性比照有菌生长，应进展偏差调查。培育基适用性检查培育基适用性检查。按表1100cfu的菌液至胰酪大豆胨液体培育基管或胰酪大豆胨琼脂培育基平板或沙氏葡萄糖琼脂培育基平板，置表1每一试验菌株平行制备2管或2基进展上述试验。被检固体培育基上的菌落平均数与比照培育基上的菌落平均数的比值应在0.5-2管与比照培育基管比较，试验菌应生长良好。计数方法适用性试验依据供试品的理化特性与生物学特性,实行适宜的方法制备供试液。供试液45培育基,不得超过1小时。建立其他适宜的方法。pH7.0pH7.21:10调整供试液pH6～810倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。⑵水不溶性非油脂类供试品pH7.0液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培育基制备成1:10供试液。分品分散均匀。假设需要，调整供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10⑶油脂类供试品并能使供试品乳化的无菌聚山梨酯80或其他无抑菌性的无菌外表活性剂充分混留神1∶10释液进一步10⑷需用特别方法制备供试液的供试品膜剂供试品 取供试品,剪碎,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培育基，浸泡，振摇，制成1∶10的供试液。假设需要，调整供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。肠溶及结肠溶制剂供试品取供试品，参加pH6.8〔用于肠溶制剂〕或pH7.6无菌磷酸盐缓冲液〔用于结肠溶制剂〕，置45℃水浴中,振摇,使溶解,制成1∶1010系列稀释。取供试品,置-20℃或其它适宜温度冷冻约1取出，快速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。供试品亦可承受其它适宜的方法取出。用无菌注射器从每一容器中吸出全部药液于无菌容器中混合，然后取样检查。贴膏剂供试品取供试品 取供试品,去掉防粘层将粘贴面朝上放置在无菌塑料器皿上，在粘贴面上掩盖一层适宜的无菌多孔材料〔如无菌纱布〕，避开贴膏剂粘贴在一起将处理后的贴膏剂放入盛有适宜体积并含有外表活性剂〔如聚山梨脂80〕30一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。按以下要求进展供试液的接种和稀释,制备微生物回收试验用供试液。所加1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最低稀释级的供试液进展计数方法适用性试验。试验组 好的供试液，参加试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。供试品比照组 取制备好的供试液,以稀释液代替菌液同试验组操作。菌液比照组 及灭活剂的相应稀释液替代供试液,按试验组操作参加试验菌液并进展微生物回收试验。假设因供试品抗菌活性或溶解性较差的缘由导致无法选择最低稀释级的供试或薄膜过滤处理后再参加试验菌悬液进展方法适用性试验。下述方法消退供试品的抑菌活性。⑴增加稀释液或培育基体积。⑵参加适宜的中和剂或灭活剂。中和剂或灭活剂〔表2〕可用于消退干扰物的抑菌活性，最好在稀释液或培养基灭菌前参加。假设使用中和剂或灭活剂，试验中应设中和剂或灭活剂比照组，中和剂或灭活剂比照组的菌落数与菌液比照组的菌落数的比值应在0.5～2范围内。干扰物可选用的中和剂或灭活方法戊二醛、汞制剂干扰物可选用的中和剂或灭活方法戊二醛、汞制剂亚硫酸氢钠酚类、乙醇、醛类、吸附物稀释法醛类甘氨酸季铵化合物、对羟基苯甲酸、双胍类化合物卵磷脂季铵化合物、碘、对羟基苯甲酸聚山梨醇酯水银巯基醋酸盐水银、汞化物、醛类硫代硫酸盐EDTA、喹喏酮类抗生素镁或钙离子磺胺类对氨基苯甲酸β-内酰胺类抗生素β-内酰胺酶⑶用薄膜过滤法。⑷ 上述几种方法的联合使用。的供试液进展供试品检查。1微生物的回收可承受平皿法、薄膜过滤法或MPN平皿法平皿法包括倾注法和涂布法。表1少制备2倾注法取照上述“供试液的制备”“接种和稀释”和“抗菌活性的去除或灭活”制备的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中,注入15～20ml温度不。假设使用直径较大的平皿，培育基的用量应相应增加。按表1规定条件培育、涂布法取15～20ml45℃的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培育基，注入直径90mm的无菌平皿，凝固，制成平板，承受适宜的方法使培育接种上述照“供试液的制备”“接种和稀释”和“抗菌活性的去除或灭活”制0.1ml1菌液比照组菌数。计算各试验组的平均菌落数。薄膜过滤法薄膜过滤法所承受的滤膜孔径应不大于0.45μm,直径一般时,应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品,其滤膜和滤器在使用前应充分枯燥。为发挥滤膜的最大过滤效率,应留意保持供试品溶液及冲洗液掩盖整个滤膜外表。供试液经薄膜过滤后,假设需要用冲洗液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为100ml。总冲洗量不得超过1000ml,以避开滤膜上的微生物受损伤。取照上述“供试液的制备”“接种和稀释”和“抗菌活性的去除或灭活”制备的供试液适量〔一般取相当于1g、1ml10cm2〕，的冲洗液冲洗滤膜。定供试品比照组及菌液比照组菌数。⑶MPN法MPN使用MPN取照上述“供试液的制备”“接种和稀释”和“抗菌活性的去除或灭活”制备的供试液至少331ml39～10ml胰酪大豆胨液体培育基中，同法测定菌液比照组菌数。必要时可在培育基中参加外表活性剂、中和剂或灭活剂。接种管置30～35℃培育3酪大豆胨琼脂培育基，在一样条件下培育1～2天，观看是否有微生物生长。依据微生物生长的管数从表3查被测供试品每1g或每1ml中需氧菌总数的最可能数。需氧菌总数最可能生长管数95%置信限需氧菌总数最可能生长管数95%置信限g或ml数MPN/gml下限上限0.10.010.001000＜309.400130.19.501030.1100116.11.2170206.21.2170309.43.5351003.60.2171017.21.217102114351107.41.320111114351201143512115538130165382009.21.535201144352022053821015438211205382122799422021540221289942223599423029994231369943002359430138910430264161813104391813117517199312120303603131603038032093183603211503038032221030400323290909903302404099033146090198033211002004000333＞1100或ml〕或ml〕或ml〕表内数字应相应降低10倍；如改用0.01g〔或ml〕、0.001g〔或ml〕和0.0001g〔或ml〕时，表内数字应相应增加10倍，其余类推。⒌结果推断试品比照组菌落数的值与菌液比照组菌落数的比值应在0.5～2MPN法时，试验组菌数应在菌液比照组菌数的95%置信限内。假设各试验菌的回收试验霉菌和酵母菌总数计数。要求,那么选择回收最接近要求的方法和试验条件进展供试品的检查。供试品检查检验量检验量即一次试验所用的供试品量〔g、ml或cm2〕。2检验。除另有规定外,一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。检验时,应从2取供试品,大蜜丸还不得少于4丸,膜剂还不得少于4片。供试品的检查母菌总数的测定。葡萄糖琼脂培育基用于测定霉菌和酵母菌总数。以稀释液代替供试液进展阴性比照试验，阴性比照试验应无菌生长。假设阴性比照有菌生长，应进展偏差调查。⒈平皿法性试验确认的方法进展供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培育基至少制备2个平板。培育和计数除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培育基平板在30～35℃培育3～520～25℃培育5～7,点计平板上生长的全部菌落数，计数并报告。菌落集中生长成片的平板不宜相差1菌数报告规章需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于100cfu1g1ml10cm2供试品中所含的微生物数，取两位有效数字报告。均菌落数小于1时，以﹤1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。于1g、1ml或10cm2供试品的供试液，假设供试品所含的菌数较多时，可取适宜稀基上培育。培育和计数100cfu。菌数报告规章以相当于1g、1ml10cm2供试品的菌落数报告菌数；假设滤膜上无菌落生长，以﹤1〔每张滤膜过滤1g、1ml10cm2供试品〕,或