羟苯磺酸钙对糖尿病大鼠血肌酐的影响及机制

羟苯磺酸钙对糖尿病大鼠血肌酐的影响及机制

肌腱是人体肌肉酸的代谢产物。正常人的肌肉代谢主要通过肾脏排出。血清肌酐的清除是评价肾功能的一个重要指标。近年来我院临床资料证实羟本磺酸钙有降低血肌酐、尿素氮、尿酸等作用，特别是降低血肌酐作用尤其显著。其具体机制国内外尚未见报道，为阐明羟本磺酸钙对肌酐的作用机制，本组在糖尿病大鼠中进行了羟本磺酸钙对血肌酐的实验研究。现报告如下：1材料和方法1.1实验浓度羟苯磺酸钙由西安利君制药提供，用蒸馏水稀释至实验浓度。链脲佐菌素（STZ）购自美国Sigma公司，以0.1mol/L,pH4.2枸椽酸缓冲液溶解新鲜配制。1.2单笼饲养，自由饮水40只雄性SD大鼠，体重200～250g（华中科技大学同济医学院动物中心提供）。大鼠饲养7d后随机分为，正常对照组（A组，6只），正常给药组（B组，6只）及实验组。实验组经过高糖、高脂饮食28d后，分两次小剂量腹腔注射STZ(30mg/kg）。第二次给药72h后将血糖≥16.7mmol/L，尿糖强阳性，胰岛素敏感指数（INS）下降选定为2型糖尿病实验动物，再将其随机分为2组，糖尿病对照组（C组，6只）、羟苯磺酸钙治疗组（D组，6只）。D组以羟苯磺酸钙每日100mg/kg灌胃，A、C组同时灌服蒸馏水。动物单笼饲养，自由进食、饮水。给药24周后收取24h尿液，麻醉后下腔静脉取血，摘取双侧肾脏，称重，取部分皮质固定于4.0%的多聚甲醛，部分固定于3.7%戊二醛液。1.3血尿胱之比较血糖用美国强生公司血糖仪测定，全自动生化分析仪测定血肌酐（Scr）、尿肌酐（Ucr）。计算内生肌酐清除率（Ccr）,Ccr=Ucr×尿量/Scr，并校正体重，尿蛋白采用双缩脲法。1.4肾病理分析1.4.1组织学分析方法新鲜的肾脏去除包膜后，以10.0%中性福尔马林固定24h，常规石蜡包埋切片，行HE,PASM,Masson染色，由专职病理医生读片分析。PASM切片用于形态学定量分析，每片随机选取10个正切的肾小球，用多功能真彩色病理图像分析系统进行分析，测定肾小球直径和系膜区密度（系膜区面积/肾小球面积）。电镜标本采用断面宽度法测定肾小球基底膜（GBM）厚度。每组随机取30条GBM，每条随机取10个点测量厚度，以平均值表示该组GBM厚度。1.4.2免疫组化按试剂盒操作步骤，行免疫组化染色。PKC,TGF-β1.5质谱分析技术采用美国菲根LCQDeltaXT质子谱分析仪，抽取血透病人透析后废水（病人未使用羟苯磺酸钙），加入羟苯磺酸钙原粉，由专业技术人员分析质谱情况。1.6统计分析所有实验数据以2结果2.1一般情况下C和D组大鼠实验期间均出现多饮、多食、多尿及糖尿，明显高于A和B组。2.2各组尿素氮的比较C和D组上述指标较A和B组明显升高，C和D组间血肌酐差异非常显著（P<0.01）、尿素氮差异显著（P<0.05）,D组较C组明显降低。C组和D组间的尿蛋白、血管紧张素II、尿量、肾重/体重、肌酐清除率无差异。A和B组间上述指标无显著差异。见表1。2.3苯磺酸钙对pmc、tgf-h的影响C和D组PKC,TGF-β2.4病理改变PASM染色光镜显示D组系膜区较C组明显缩小（P<0.05）。电镜观察到D组基底膜增厚较同期C组减轻（P<0.01）。见表3。2.5从分子量和比一个世界在分子量为301,691,545,559和579处形成峰值，且继续敲击，691,545,559和579可分解，都在301处形成一峰值。经分析，分子量为301处是肌酐和羟苯磺酸基团结合物。但尿素氮和羟苯磺酸基团没有形成峰值。3糖尿病大鼠肾损害是否同步问题本实验采用分次STZ腹腔注射加上高糖、高脂饮食建立2型糖尿病大鼠模型，大鼠血糖、尿蛋白水平、相对肾重明显升高，表明本研究建立的DM模型肾脏病变与大多数文献报道的大鼠DN的表现较为吻合如前所述，肌酐是人体内肌肉酸的代谢产物，肌酸生成后由血液循环带到肌肉组织从Ccr来看，实验组较正常对照组高，表明DM大鼠肾脏损害处于高滤过期。但糖尿病羟苯磺酸钙治疗组较糖尿病对照组无差异，由此也可说明羟苯磺酸钙降低血肌酐水平不是通过高滤过作用引起的。从病理结果来看，本实验结果显示，2型DM大鼠24周后尿素氮、肌酐、尿蛋白、肾重/体重比增加、肾小球基底膜增厚，以肾小球系膜区为主的细胞外基质积聚，说明本型已出现DN的典型病理改通过质子谱分析仪的检测可以得知，羟苯磺酸钙分子结构为，它离解成2个基团，肌酐可以和1个基团结合生成一种新的物质，这种新的物质结合较牢固，它还可以继续与其它中小分子结合。羟苯磺酸钙和肌酐的结合势必导致血肌酐水平有一定程度下降。基团和尿素氮没有结合，这也说明羟苯磺酸钙降低肌酐作用较降低尿素氮作用更明