骨髓细胞形态学检验课件

骨髓细胞形态学检验南昌大学一附院检验科吕小林骨髓细胞形态学检验南昌大学一附院检验科吕小林骨髓细胞学检测方法骨髓细胞形态学检查组织化学检查病理学检查细胞遗传学检查免疫学检查造血细胞培养骨髓细胞学检测方法骨髓细胞形态学检查骨髓细胞学检测骨髓细胞学检测的临床应用骨髓细胞学检测的方法和内容血细胞发育过程中形态演变的一般规律血细胞的正常形态学特征血细胞的细胞化学染色细胞免疫分型细胞遗传性分析骨髓细胞学检测骨髓细胞学检测的临床应用一骨髓细胞学检测的临床应用是诊断造血系统疾病最常用的基本方法骨髓细胞学检测的临床应用骨髓细胞学检查的适应证与禁忌证一骨髓细胞学检测的临床应用是诊断造血系统疾病最常用的基本方骨髓细胞学检测的临床应用诊断造血系统疾病

AML、ALL、CML、CLL、MM、AA、Gaucherdisease等。辅助诊断某些疾病

MDS、MPD、IDA、PLT等。提高某些疾病的诊断率

mp、黑热病原虫、红斑狼疮细胞等。骨髓细胞学检测的临床应用诊断造血系统疾病骨髓细胞学检查的适应证与禁忌证适应证外周血细胞成分及形态异常不明显原因发热、肝脾淋巴结肿大骨痛、骨质破坏、肾功能异常、黄疸等化疗后疗效观察其它：微生物、寄生虫等禁忌证血友病、晚期妊娠等骨髓细胞学检查的适应证与禁忌证适应证二骨髓细胞学检测的方法和内容肉眼观察低倍镜下检查油镜下检查骨髓象的分析与报告二骨髓细胞学检测的方法和内容肉眼观察肉眼观察（检查方法）血膜颜色厚薄骨髓小粒肉眼观察（检查方法）血膜颜色低倍镜下检查（检查方法）评价骨髓的取材、涂片、染色是否良好估计骨髓有核细胞增生程度计数巨核细胞数目特殊细胞与其它低倍镜下检查（检查方法）评价骨髓的取材、涂片、染色是否良好骨髓涂片骨髓涂片骨髓有核细胞增生程度

增生程度粒红比有核细胞数/HP常见病例增生极度活跃1：1>100急、慢性白血病增生明显活跃1：1050-100急、慢性白血病，增生性贫血增生活跃1：2020-50正常骨髓象，增生性贫血增生减低1：505-10AA增生极度减低1：200<5AA骨髓有核细胞增生程度

增生程度粒红比有核细胞数/HP常见病例骨髓有核细胞增生程度骨髓有核细胞增生程度巨核细胞计数巨核细胞计数特殊细胞与其它特殊细胞与其它油镜检查数目：200-500有核细胞分类：各系、各阶段细胞分析：数量、形态、增生程度等油镜检查数目：200-500有核细胞骨髓象分析与报告描述取材、染色增生程度粒系特点红系特点淋系特点巨系特点诊断结论骨髓象分析与报告描述三血细胞发育过程中形态演变的一般规律

细胞体积细胞质：量、染色、颗粒细胞核：大小、染色质、核仁、核膜核浆比三血细胞发育过程中形态演变的一般规律细胞体积四血细胞的正常形态学特征四血细胞的正常形态学特征血细胞的形态学特征（红系）（1）原红（normoblast）：15—22um（2）早幼红（basophilicnormoblast）：φ11-20um（3）中幼红（polychromaticnormoblast）：φ8-18um（4）晚幼红（ortho-chromaticnurmblast）：φ7-12um（5）网织红（RC）：φ7.4um（6）成熟RBC（RBC）：φ7.4um血细胞的形态学特征（红系）（1）原红（normoblast）红系形态特点红系形态特点血细胞的形态学特征（粒系一）（1）原粒细胞（myeloblast）：φ11-18um（2）早幼粒（promyelocyte）：φ12-22um（3）中幼粒（myelocyte）①中性中幼粒（neutrophilicmyelocyte）：φ10-18um②嗜酸性中幼粒（eosinophilicmyelocyte）：φ15-20um③嗜硷性中幼粒（basophilicmyelocyte）：φ10-15um血细胞的形态学特征（粒系一）（1）原粒细胞（myelobla血细胞的形态学特征（粒系二）4）晚幼粒细胞（metamyelocyte）：φ10-16um①中性②嗜酸③嗜硷（5）杆状核粒细胞（stabgranulocyte、bandgranulocyte）①中性②嗜酸③嗜硷（6）分叶核粒细胞（segmentedgranulocyte）①中性②嗜酸③嗜硷血细胞的形态学特征（粒系二）4）晚幼粒细胞（metamyel粒系形态特点一粒系形态特点一粒系形态特点二粒系形态特点二粒系形态特点三粒系形态特点三血细胞的形态学特征（淋系）（1）原淋巴细胞（Lymphoblast）：φ10-18um（2）幼淋巴细胞（prolymphocyte）：φ10-16um（3）淋巴细胞（lymphocyte）①大淋巴细胞②小淋巴细胞血细胞的形态学特征（淋系）（1）原淋巴细胞（Lymphobl淋系形态特点淋系形态特点血细胞的形态学特征（浆细胞）（1）原浆细胞（plasmablast）：φ15-20um（2）幼浆细胞（proplasmacyte）：φ12-16um（3）浆细胞（plasmacyte）：φ8-20um血细胞的形态学特征（浆细胞）（1）原浆细胞（plasmabl浆细胞形态特点浆细胞形态特点血细胞的形态学特征（单核细胞）（1）原单核细胞（monoblast）：φ15-25um（2）幼单核细胞（promonocyte）：φ15-25um，核可见凹陷，切迹，扭曲或折叠（3）单核细胞（macrophage）：φ12-20um：核呈肾形，马蹄形，笔架形及“S”形。（4）吞噬细胞（macrophage）：单核细胞→组织细胞→巨噬细胞或吞噬细胞血细胞的形态学特征（单核细胞）（1）原单核细胞（monobl单核细胞形态特点单核细胞形态特点血细胞的形态学特征（巨核细胞）（1）原巨核细胞（megakaryoblast）：φ15-30um（2）幼巨核细胞（promegakaryocyte）：φ30-50um（3）颗粒型巨核细胞（granularmegakaryocyte）：φ50-70um（4）产板巨（thronbocytogenousmegakaryocyte）。（5）巨核细胞裸核（nakednucleus）血细胞的形态学特征（巨核细胞）（1）原巨核细胞（megaka巨核细胞形态特点巨核细胞形态特点血细胞的形态学特征（其它细胞）（1）网状细胞（3）纤维细胞（2）内皮细胞（4）组织嗜硷（5）成骨细胞（6）破骨细胞血细胞的形态学特征（其它细胞）（1）网状细胞骨髓中其它细胞骨髓中其它细胞五血细胞的细胞化学染色POX染色NAP染色ACP染色AS-DNCE染色α-NAE染色PAS染色Fe染色五血细胞的细胞化学染色POX染色细胞化学染色一POX1、原理：细胞中的POX（peroxidase）→H2O2→O2→氧化联苯胺呈蓝色+亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色颗粒。2、结果：（1）阴性：无颗粒（2）弱阳性：细小颗粒分散（3）强阳性：颗粒粗大而密集3、意义：（1）急粒：强阳性（2）急单；弱阳性（3）急淋：阴性细胞化学染色一POX1、原理：细胞中的POX（peroxiPOX结果判读POX结果判读细胞化学染色二NAP1、原理：NAP（neutrophilalkalinephosphatase）的显示方法有偶氮偶联法：NAP（PH9.4-9.6）→α-磷酸茶酚钠→α-茶酚+重氮盐→形成灰黑色沉淀（定位于酶活性处）。细胞化学染色二NAP1、原理：NAP（neutrophilNAP结果判读NAP结果判读细胞化学染色二NAP2、结果：（1）5级分类0级→阴性1级→+2级→++3分→+++4分→4（+）（2）阳性率报告：计数100NC中阳性细胞分率。（3）积分报告：100NC细胞的累积分数细胞化学染色二NAP2、结果：细胞化学染色二NAP3、参考区间：NAP：阳性率：10-40%积分：40-80分4、临床意义：（1）感染性疾病的诊断：鉴别细菌或病毒感染（2）CML和类白血病鉴别（3）AA与PNH鉴别细胞化学染色二NAP3、参考区间：NAP：阳性率：10-4细胞化学染色三ACP1、原理：ACP（acidphosphatase）：ACP（PH5.0）——β甘油磷酸钠——磷酸钠+硝酸铅——磷酸铅沉淀+硫化铵反应——棕黑色硫化铅沉淀。2、结果：胞质内出现棕黑色颗粒为阳性反应。细胞化学染色三ACP1、原理：ACP（acidphosp细胞化学染色三ACP细胞化学染色三ACP细胞化学染色三ACP3、意义：（1）多毛细胞白血病（hairycellleukemia，HCE）诊断：HCL为阳性不被L-酒酶抑制（2）T-B淋巴细胞鉴别：T阳性，B阴性（3）协助鉴别Gaucher病与Niemann-Pick病：Caucher阳性，Niemann-Pick阴性（4）单核细胞、组织细胞、网状细胞、巨核细胞ACP阴性。细胞化学染色三ACP3、意义：细胞化学染色四CE1、原理：

AS-D（SE）——氯化醋酸AS-D萘酚——AS-D+重氮盐GBC偶联——红色沉淀定位于胞浆中2、结果：粒系——阳性或强阳性反应

单核——阴性或弱阴性反应

淋巴、嗜酸细胞、浆细胞——阴性反应3、意义：

（1）急粒——阳性或强阳性

（2）急单、急淋——阴性反应细胞化学染色四CE1、原理：细胞化学染色四CE细胞化学染色四CE细胞化学染色五NAE1、原理：α-NAE——α-醋酸萘酚——α-萘酚+重氮盐染料偶联——黑色沉淀定位于胞浆中。2、结果：1、单核细胞——阳性（灰黑色沉淀）2、粒细胞——弱阳性3、淋巴细胞——阴性3、意义：

1、急单——强阳性反应2、急粒——弱阳性反应细胞化学染色五NAE1、原理：α-NAE——α-醋酸萘酚—细胞化学染色五NAE细胞化学染色五NAE细胞化学染色六PAS1、原理：过典酸（糖原）——醛基+无色品红——紫红色化合物2、结果：（1）阳性：颗粒状、小块状或弥漫均匀（红色强阳性、弱阳性和阴性）（2）原粒阴性，早幼粒以下阶段阳性反应程度渐增强（3）单核弱阳性，淋巴细胞阴性（4）红系：阴性（5）巨核：阳性细胞化学染色六PAS1、原理：过典酸（糖原）——醛基+无色细胞化学染色六PAS3、意义：

1、红血病与巨幼贫鉴别：前者幼红细胞阳性，后者幼红细胞阴性2、白血病：急粒：阴性或弱阳性

急淋：原幼淋阳性呈粗颗粒状或块状

急单：呈弥漫均匀或细颗粒状3、其它：Gaucher细胞——阴性Niemann--Pick——阴性细胞化学染色六PAS3、意义：细胞化学染色六PAS细胞化学染色六PAS细胞化学染色七Fe1、原理：Fe3++亚铁氰化钾——铁氰化铁沉淀（普鲁土蓝）2、结果：（1）细胞外铁：1+—4+（2）细胞内铁：①含有铁颗粒的幼红细胞——铁粒幼红细胞②油镜下计数100个幼红细胞计算其阳性率③I、II、Ⅲ、Ⅳ和环状铁粒幼细胞细胞化学染色七Fe1、原理：Fe3++亚铁氰化钾——铁氰化细胞化学染色七Fe3、参考值：（1）细胞外铁：1+—2+，大多为2+（2）细胞内铁：20—90%4、意义：（1）缺铁性贫血诊断（2）非缺铁性贫血：如AA、铁粒幼细胞性贫血、溶贫、巨幼贫、内外铁增加

（3）MDS-RARS：环状铁粒幼细胞＞15%细胞化学染色七Fe3、参考值：细胞化学染色七Fe细胞化学染色七Fe细胞化学染色七Fe细胞化学染色七Fe六细胞免疫分型免疫荧光法免疫酶染色法六细胞免疫分型免疫荧光法细胞免疫分型

1、免疫荧光法（immmeofluoresencetechnique）（1）原理：①荧光标记的单抗+细胞表面分化抗原结合——产生荧光②用荧光显微镜和流式细胞仪检测③直接荧光法、间接荧光法（2）参考值：有荧光——阳性细胞

无荧光——阴性细胞细胞免疫分型1、免疫荧光法（immmeofluores细胞免疫分型2、免疫酶染色法：（1）APAAP法（碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法）：一抗+CD抗原+AKP标记二抗——底物显色（2）PAP法（过氧化物酶抗过氧化物酶法）一抗+CD抗原+POX标记抗体——底物显色（3）ABC法（亲和素—生物素—酶复合物）法：一抗+CD抗原+生物素标记二抗——HRP标记亲和素+底物细胞免疫分型2、免疫酶染色法：细胞免疫分型细胞免疫分型细胞免疫分型临床应用1、有助于识别不同系列的细胞：2、识别不同的淋巴细胞：3、用于T淋巴细胞亚群检测：4、用于识别不同分化阶段的细胞：5