基因扩增(PCR)实验室作业指导书

PCR实验室作业指导书生效日期：2019 年8月10日**医院检验科基因扩增实验室文件号:AXRY-PCR-SOP版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科文件号:AXRY-PCR-SOP版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科主题内容目录第PAGE第2页共130页目 录序号主题内容文件编号页号临床基因扩增实验室标准操作规程1实验室消毒标准操作规程CSHS-PCR-SOP—00152可调移液器的使用和维护保养标准操作规程CSHS-PCR-SOP—00273YN-H18型全自动杂交仪操作及维护规程CSHS-PCR-SOP—003104TL988实时荧光定量PCR仪标准操作规程CSHS-PCR-SOP—004185NP-968核酸提取仪CSHS-PCR-SOP—005306标准型洁净工作台使用与维护CSHS-PCR-SOP—006327基因扩增热循环仪的使用和维护保养标准操作规程CSHS-PCR-SOP—007338净化传递窗的使用与维护CSHS-PCR-SOP—008489紫外线消毒车的使用与维护CSHS-PCR-SOP—0094910生物安全柜标准操作程序CSHS-PCR-SOP—0105011恒温金属浴使用和维护保养标准操作程序CSHS-PCR-SOP—0115112离心机操作维护保养标准操作程序CSHS-PCR-SOP—0125313临床标本采集与接收标准操作程序CSHS-PCR-SOP—0135514标本的唯一性标识编制程序CSHS-PCR-SOP—0145715临床标本的保存和安全处置标准操作程序CSHS-PCR-SOP—0155816B族链球菌（GBS）核酸检测实验标准操作规程CSHS-PCR-SOP—0165917EB病毒核酸检测实验标准操作规程CSHS-PCR-SOP—0176218丙型肝炎（HCV）核酸定量检测试剂盒标准操作规程CSHS-PCR-SOP—0186619DNA-RNA核酸提取试剂标准操作流程CSHS-PCR-SOP—0197120超敏乙型肝炎（HBV）核酸检测标准操作规程CSHS-PCR-SOP—0207421单纯疱疹病毒(HSV)II型核酸检测实验标准操作规程CSHS-PCR-SOP—0217722结核分枝杆菌复合群TB核酸检测实验标准操作规程CSHS-PCR-SOP—0228023解脲支原体（UU）核酸检测标准操程序CSHS-PCR-SOP—0238424淋球菌（NG）核酸检测标准操作规程CSHS-PCR-SOP—024862525沙眼衣原体（CT）核酸检测标准操作规程CSHS-PCR-SOP—02526基因扩增实验室各区标准操作程序CSHS-PCR-SOP—02627试剂的质检标准操作程序PCR仪样本上机放置标准操作规程CSHS-PCR-SOP—02728CSHS-PCR-SOP—02889929596第PAGE第4页共130页人民医院检验科主题内容 修订页

文件号:AXRY-PCR-SOP—001版本/修订号：1/0：20190810文件名称 文件 编号 数

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批准人 批准日期文件号:AXRY-PCR-SOP—001版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科主题内容文件号:AXRY-PCR-SOP—001版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科主题内容实验室消毒标准操作规程第PAGE第5页共130页实验室消毒标准操作规程1、目的：基因检测实验室生物安全管理的基本要求，防止疾病传播和交叉污染，保护环境，保障人体健康和安全。2、适用范围：基因检测实验室，包括所有使用过的标本、耗材、工作环境、实验台面、工作间、移液器等的清洁消毒工作。3、清洁消毒消毒液消毒实验室主要使用含氯消毒液与紫外灯进行消毒，消毒液配置方法如下：水：84消毒液种类 （氯浓度 用途40000-70000mg/L）500mg/L1000mg/L1000mg/L消毒液种类

79:139:139:1水：工业酒精（95%）

台面、仪器表面、传递窗等消毒实验室地面消毒EP材浸泡用途75%乙醇 210.53ml：789.47ml 移液器、紫外灯消毒消毒液分别在每个实验区进行配制，现配现用。（试剂准备区→样本制备区→扩增分析区，各区清洁工具均为专用，不可混用。进行清洁消毒时需佩戴手套。清洁方式为擦拭实验桌面及地板，应清洁至桌面及地面无明显异物及灰尘。500mg/L“84”液的卫生60紫外线消毒紫外线消毒适用于室内空气及物体表面的消毒；211紫外消毒须在室内无人状态下进行，移动紫外灯须距离消毒目标60-90cm内；20℃-40℃；完成紫外消毒后应在《紫外消毒记录表》记录紫外消毒时间及累计时间；3.2.675%乙醇对紫外灯表面进行清洁，并使用紫外强度检测卡对紫外灯强度

或使用累计时间超过1000h时需更换灯管。文件号:AXRY-PCR-SOP—002版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科主题内容文件号:AXRY-PCR-SOP—002版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科主题内容可调移液器的使用标准操作规程第PAGE第9页共130页可调移液器的使用标准操作程序1、目的：为规范可调移液器的使用，特制定此标准操作规程。2、适用范围：本制度适用于实验室的可调移液器。3、程序细则：行。移液器每年校准一次，由检验科派人送省计量局进行校准，对校准结果如实记录。操作过程选择量程量程内：即所需移取的体积必须在移液器的量程内；半量程：即使用同一移液器，在半量程以上相对于半量程以下要精确；就小不就大：即移取同一体积的液体，应选用最大量程较小的移液器，如要移取10-100ul设定容量正确的容量设定分为两个步骤，一是粗调，即通过容量调节器将容量值迅速调整造成的影响。当我们从大值调整到小值时，刚好就行；但从小值调整到大值时，设定所需要的100ul-1000ul300ul调至500ul，500ul刻度1/4500ul。装配吸头15℃-30℃即可；注：切记不可采取“反复撞击”吸头的方法来进行安装。长期这样操作，会导致移液否则移液器螺纹连接部分可能会松动；多道移液器装配吸头时，将移液器的第一道对准第一个吸头，倾斜插入，前后稍许摇动上紧，吸头插入后略超过O型环即可。预洗吸头在安装了新的吸头或增大了容量值以后应该把需要转移的液体吸取、排放两到三次，达到饱和，负压就会自动消失。吸液按下控制钮至第一档；1-5m（视吸头容量大小而定0.1-10ul1-2mm；20-200ul2-3mm；1-5ml3-5mm；平稳松开按钮，使控制钮缓慢滑回原位（液体越稠越慢；移液器（1000ul以下）移出液面前略等待1秒，直至液面稳定，不再上升；缓慢取出吸头，确保吸头外壁无液体。排液将吸头嘴抵住容器内壁；1-3（越稠越慢；将控制钮按至第二档同时，吸头嘴要慢慢离开液面；放开控制钮；按压弹射键弃掉吸头。吸、排液注意点45℃；吸头尖2-32-3慢吸慢放，控制好弹簧的伸缩速度；控制好吸排液体时的等待时间；完全脱离液面，以防止回吸；5mm，慢吸液体，达到预定33.3.7.2器活塞。使用完毕后移液器使用完毕后，把移液器量程调至最大量程，垂直放置在移液器架上。正向吸液与反向吸液正向吸液正向吸液是常用的吸液方式，吸液操作时将按钮按到第一档后，吸液，释放按钮，如：水、缓冲液、稀盐溶液、稀酸碱溶液。反向吸液液体时只要按到第一档即可；多吸入的液体可以补偿吸头内部的表面吸附；积移液。第PAGE第10页共130页人民医院检验科主题内容 操作及维护规程

文件号:AXRY-PCR-SOP—003版本/修订号：1/0：20190810

YN-H18型全自动杂交仪操作及维护规程安全正确使用YN-H18型全自动杂交仪，保证检验工作顺利进行，并确保操作人员的人身安全和本仪器得到正确使用和维护保养。适用范围适用YN-H18型全自动杂交仪的安全使用及维护保养。职责 YN-H18型全自动杂交仪使用人员按本规程操作，并对本仪器进行日常维护，并作使用登记。 YN-H18型全自动杂交仪保管人负责监督仪器操作安全维护是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。仪器管理员负责仪器的综合管理。安全规程20-25℃最为合适。市电输出稳定，仪器外壳必须有效地接地，防止滑落砸伤。仪器内部和上方不能放置易燃、易爆、易腐蚀和过热、过冷的物品。仪器运行时，禁止用手触碰活动零部件，或伸进仪器内部，防止夹伤。因，及时处理，做好故障情况记录。操作规程实验前准备准备要做的杂交样本个数，确认各种试剂的量，并加入各自对应的容器中。文件号:AXRY-PCR-SOP—003版本/修订号：1/0人民医院检验科YN-H18操作及维护规程文件号:AXRY-PCR-SOP—003版本/修订号：1/0人民医院检验科YN-H18操作及维护规程主题内容生效日期：20190810第PAGE第15页共130页号位放入杂交盒内，杂交盒放置顺序如图1示。仪器运行参数设置号位放入杂交盒内，杂交盒放置顺序如图1示。仪器运行参数设置通电开机运行，仪器三轴运动平台自动复位，且触摸屏显示亚能生物LOGO开机画面，2秒后进入工作画面。仪器运行后，实时显示各个区域的温度傎，显示温度包含有：反应区、B液保温、常温，如图示。点击操作界面“设置”按键进入参数设置画面。反应温度：指设定杂交过程所需的温度值，例：某产品的杂交温度为51度，反应温度就设定为“51”30～65℃。是指加入2ml的预热A液。反应盒（即杂交盒）个数：指设定杂交样本的个数（1～45），例：选择3是指做3个杂交样本。300～180。B液洗膜时间：指B液洗膜时间，系统默认设置参数为5分钟；可设置范围为0～60。POD孵育时间：指POD15分钟；可设置范围为0～60。AA50～60。C液洗膜时间：指C液洗膜时间，系统默认设置参数为2分钟；可设置范围为0～60。显色时间：指显色液显色时间，系统默认设置参数为15分钟；可设置范围为0～60。30～60。运行程序仪器进入预加热状态并按程序步骤开始运行。HPV反应温度（℃）：51℃反应温度（℃）：51℃（mL）：5反应盒个数（个）：实验样本数POD（min）：15A液洗膜时间（min）：5C液洗膜时间（min）：2杂交时间（min）：30洗膜时间（min）：10显色时间（min）：15清洗时间（min）：3561℃时，仪器开始自动向反应盒内A液。当仪器自动加注完所有样本，液体将预热1分钟后，仪器操作界面弹出对话框提示操作人员加入检测样本（PCR产物..嘀”两声声响。（PCR产物）之后，将硅橡胶膜片覆盖杂交盒上并用带孔杂交盒盖板扣在膜片上面。点击对话框“确定”按钮，仪器自动运行完成杂交、B液洗膜、自动配制孵育液、POD孵育、A液洗膜、C液洗膜。”的对话框并伴随有蜂鸣器的鸣叫声（提醒操作人员配置显色液止鸣叫，随后界面会弹出“请配显色液之后确定”对话框。置后点击对话框“请配显色液之后确定”对话框。3个样本所需的显示液仪器继续运行并加注显色液至反应盒内进行显色，直至显色过程结束。显色液”的对话框；系统将默认已配置好显色液，直接自动进入加显色液的实验过程。实验结束及清理显色过程结束后，仪器自动运行加注纯净水清洗反应盒内膜条。清洗结束后，仪鸣叫两声，提醒操作人员整个实验过程结束。揭开盖板及硅胶膜，取出完成显色的膜条并保存。关闭软件及仪器电源，实验结束。清理取出杂交盒，擦干杂交台铝板及凹槽中的液体；硅胶膜用84消毒片浸泡至少1小时，再用纯水冲洗晾干；用清水冲洗杂交盒盖板；用纯水清洗孵育和显色试剂瓶；用湿毛巾擦拭仪器平台表面，去除污迹及其他杂物。维护规程15cm10cm以上，确保可靠散热；每次实验操作完成后须进行清洗液路管道500ml左右洁净的玻璃烧杯，装进大概200ml纯水；A液、B液、C液、POD液、显色液的试剂瓶瓶盖都放到烧杯里面；每天实验操作完成后清洁仪器清洁之前请务必关掉仪器开关电源，准备一块干净的湿毛巾或抹布；清洁仪器外表的灰尘或污迹；到适当位置，清洁干净里面的液体，注意此过程要小心接触平台底部光电开关及电线；不允许将水或任何清洁溶液泼洒或喷射到设备上，或者流入仪器内部。1小时，硅胶膜使用一个月后必须更换新的；每月对所有瓶液用纯净水进行清洗；头处的结晶。每季度更换两个蠕液泵的U型管。每季度更换液路管道。每季度对杂交平台进行温控测试。每季度检查固定仪器的螺丝是否松动、仪器运行是否有异响。异常处理如果开机运行时显示屏显示异常，请按“复位”按钮，仪器便可正常工作；若无法开机、仪器不运行请依次按下列步骤进行检查：确定电源插座是否有供电；仪器电源开关是否已经打开，电源指示灯是否亮起，若没有打开，请打开电源开关；检查电源线与电源插座是否有松动，重新接好电源线；文件号:AXRY-PCR-SOP—003版本/修订号：1/0人民医院检验科YN-H18操作及维护规程文件号:AXRY-PCR-SOP—003版本/修订号：1/0人民医院检验科YN-H18操作及维护规程主题内容生效日期：20190810第PAGE第17页共130页（注意：本仪器使用的电源保险F3AL250V，其他型号的保险丝不可用；检查仪器数据线是否已连接或有松动，重新连接数据线；检查数据连接端口号是否与电脑端口号一致，请确认一致。校准规程校准条件下列情况需要进行校准：仪器进行大保养或更换重要零部件后。实验质控失控时。校准准备确认测温仪、移液器、计时器正常。确认仪器状态正常。校准程序、系数校准30400120；平台手502503010；400、B2、管路填10。四轴参数：列间距648、Z轴向上100、Z轴向下1200。温控参数：P450、I2、D1，温度设定51，温度系数14设置参数：反应温度51，单元液量5、反应盒个数1-45、杂交时间30、B液洗膜10、POD15、A5温度控制检测用仪器

、C2152。一次；检测步骤t0t1，加t=t1-t0≤15min。观察加温过程继电器上方风扇是否正常运行，仪器平台四周能否正常加温，使POD孵育阶段，平台能30℃以下。底部风扇能正常工作。杂交盒温度稳定性敏电阻探头所对应的样品孔位置可随意设定。开启仪器，进入杂交步骤，温度稳定51℃；513min24个数值。、机械位移针管能准确插入反应区对应的孔位，无卡盖板无碰撞。、液量控制检测用工具移液器（国家认可的技术监督或计量部门每年校准一次；检测步骤5mL。液体排空后使用移液器量取杂交盒内剩余液体量观测孵育盒子和显色盒子在运行结束后，瓶内液体都能排空。、检测结果第PAGE第18页共130页人民医院检验科主题内容 规程

文件号:AXRY-PCR-SOP—004版本/修订号：1/0：20190810

TL988实时荧光定量PCR仪标准操作规程TL988PCRTL988PCR验。适用范围：TL988PCR责任人：4：西安天隆科技有限公司生产企业许可证号：陕食药监械生产许20123142号医疗器械注册证编号：国械注准20173401384原理及适用范围：PCRTL988PCR标志核酸检测。此外，TL988实时荧光定量PCR仪也可应用于科研机构，它所提供的核酸以检测分析生命遗传物质为目的的科学研究。操作规程：开机：打开连接仪器的电脑，启动Window系统，打开TL988实时荧光定量PCR仪电源，仪器正常开机自检，自检结束后PCR按钮打开或者关闭样本仓。打开软件及默认仪器绑定：双击电脑桌面TL988实时荧光定量PCR仪软件图标“MedtlSyste“快速导航”界面）（根据仪器具体型号进行设置，设置完（1-1）文件号:AXRY-PCR-SOP—004版本/修订号：1/0人民医院检验科TL988PCR文件号:AXRY-PCR-SOP—004版本/修订号：1/0人民医院检验科TL988PCR规程主题内容生效日期：20190810第PAGE第19页共130页1-1PCR新建试验如图（1-2）图（1-2）新建实验命名新建文件创建及命名后，软件系统将自动进入主操作界面，如图（1-3）1-3PCR运行设置：新建空试验后需对试验的温度进行设置；段”下具体“步骤”的目标温度、恒温时间及是否采集荧光进行设置，设置完成后对界面右侧的试管类型、反应体系、热盖等进行设置后完成运行设置；如图（1-4、1-5）1-4运行温度设置界面1-5运行温度设置界面提醒：温度循环文件保存成功！如图（1-6、1-7）1-6温度设置保存界面1-7温度设置保存界面度循环文件名称，并点击<确定>打开。样本设置：点击“样本设置”进入样本孔位设置界面，根据仪器样本仓中样本管放（如下图）根据具体孔位所放置的样本类型选择，后在下面“荧光”复选框中选择所需荧光探显示荧光探针无所需探针，则可在每种荧光探针后下拉菜单中选择自己所需荧光探针；对定量试验需带标准品的样本可在样本类型选择成“标准”后进行“标准品设置3行标准品设置则可通过“自动设置”进行设置，点击“自动设置”后在弹出的窗口中对其实浓度、倍数进行及荧光等进行设置，后点“确定”保存；实验设置；光”界面、右上方“热血循环”界面、左下角的“按荧光显示”的样本排布界面及右下角（如图）上角的“仅显示选中”按钮选择后则显示样本排布界面所选中样本孔位的曲线图；量、熔解曲线、HRM、基因分型的试验，可根据本次试验类型选择具体试验类型，试验结束后默认为绝对定量试验，若做其他试验可在选择“分析”界面后，在软件主界面菜单栏中选择“新建分析”按钮，在弹出的窗口中选择对应的试验，则在“分析”界面下新生成所选试验类型的分析界面；在软件主界面上方过“分析设置”可进行阈值及基线设置，一般试验默认基线及阈值即可，若需调整则进入（如图）导出LIS：实验分析结束后点击主机面右上角“LIS”实验数据，出报告或结果。标准曲线的保存及载入功能：实验中的标准曲线进行定量时使用；中的“标准曲线”小界面可看到本次实验的标准曲线的信息，在该界面点击“保存标准曲（如图）在该界面，点击“载入标准曲线（如图）TL988PCR清洁仪器外壳（使用前将软布拧干，不能有滴水现象）清洁仪器外壳，必要（医用酒精或无水乙醇）清洁仪器外壳，使仪器外壳保持清洁，避免备故障。清洁仪器触摸屏摸屏，防止刮花触摸屏。清洁样本仓和样本模块关闭仪器，弹出样本舱，使用潮湿软布（使用前将软布拧干，不能有滴水现象）清洁样本舱，必要时使用温和的清洁剂（医用酒精或无水乙醇）清洁样本舱，定期清理样本模块反应孔，确保PCR待样本模块温度将至待机温度后再进行清洁，禁止实验刚结束就进行清洁；清洁完成后，第PAGE第29页共130页人民医院检验科主题内容 规程

文件号:AXRY-PCR-SOP—004版本/修订号：1/0：20190810避免引起电子设备故障。问题反馈常，请及时联系厂家售后工程师。详细仪器维护请参照仪器使用说明书维护部分。注意事项为保证仪器的正常使用，请严格遵操作规程；在把样品管放到PCR仪时，不要用手碰到离心管的盖及底部；编制者，及时进行修改；软件的操作过程中，若遇到疑问应及时请教其它操作人。文件号:AXRY-PCR-SOP—005版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科主题内容文件号:AXRY-PCR-SOP—005版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科主题内容NP-968第PAGE第30页共130页NP-968目的检测结果具有良好的溯源性、准确性和可靠性。范围适用于NP-968核酸提取仪，不适用于其他公司同类产品。原理利用磁珠表面基团吸附核酸，进行磁珠转移，将样本中的核酸提取和纯化出来。仪器性能仪器运行环境4.1.1 周围空间温度：10~40℃4.1.2 相对湿度：≤80%4.1.3 电源电压：220±10v4.1.4仪器应放置在水平坚固的平台上，与外界电源系统电压要匹配，并要求有良好的接地线,灰尘少，换气良好的环境，避免阳光直接照射，仪器附近没有发射高频的机械（离心机、放电装置等）。操作程序仪器开机、初始化程序打开仪器背面开关，开机后进行仪器自检，自检通过后方可进行标本检测。常规样本检测2，3准操作规程操作，进行加样。5.2.25.2.2标签，仪器自动进入程序，点击运行即可。板。提取仪的紫外灯打开，照射30min。关机程序关闭紫外灯、关闭软件、关闭仪器。维护和保养30钟以上。75%的酒精的纱布对实验舱内壁、磁棒、磁棒架进行擦拭，再用干燥的纱布擦干。开启紫外灯照射30分钟进行消毒。6.46.43077.1在使用对人体有危险或发生感染的样品时，请使用橡胶手套，不要直接接触。7.2在仪器上面和周围不可使用可燃性危险品、避免引起火灾和爆炸。7.3在电源开关处于on状态下接触线路板有触电危险。7.4仪器的操作、保养应按规定的程序进行。第PAGE第32页共130页安乡县人民医院检验科主题内容

文件号:AXRY-PCR-SOP—006版本/修订号：1/0：20190810标准型洁净工作台使用与维护目 的：正确地使用、维护保养洁净工作台。BBS-V800型洁净工作台。程序细则：12（5-3℃；湿度（<85；电源（220±10，50Hz±2Hz）3、使用前提前30分钟开机运行同时开启风机组和紫外灯，30分钟后关闭紫外灯后可开始加样操作4、新安装的或长期未使用的工作台，使用前用不产尘的工具仔细清洁5、工作台面上禁放不必要的物品，工作时应尽量避免作明显扰动气流的工作6、当需要调节风速时，用工作台操作面板上的轻触型开关进行调节7、能力83-62个月测量工作区风速并作必要的调整910、禁止在一分钟内反复开启电源开关，以免损坏电气元件11、当出现异常情况时向科主任反映并于厂家或供货商及时联系文件支持：SW-CJ-1F型洁净工作台使用说明书文件号:AXRY-PCR-SOP—007版本/修订号：1/0人民医院检验科基因扩增热循环仪的使用和维护保养标准操作规程主题内容文件号:AXRY-PCR-SOP—007版本/修订号：1/0人民医院检验科基因扩增热循环仪的使用和维护保养标准操作规程主题内容生效日期：20190810第PAGE第39页共130页基因扩增热循环仪的使用和维护保养标准操作规程1、目的：为规范基因扩增热循环仪的操作与维护工作，确保仪器正常运作和实验顺利进行，以保障工作人员的安全，特制定此标准操作规程。2、适用范围：本制度适用于实验室的基因扩增热循环仪。3、内容原理：DNADNA2n倍。操作指南开机打开仪器背面的电源开关，仪器将会自动进行自检，触摸显示屏显示软件开机画面；主界面成，如图所示：界面介绍及选项功能描述：系统状态：显示当前仪器的系统状态。初始化：仪器正在初始化过程中；实验中：实验正在进行；暂停：实验正处于暂停状态；故障：仪器发生硬件或软件故障，无法执行当前操作；仪器状态：显示仪器当前状态：仪器未连接到网络；：仪器已连接到网络；：仪器连接有USB设备；：热盖加热功能已启用；：仪器未连接到网络；：仪器已连接到网络；：仪器连接有USB设备；：热盖加热功能已启用；：热盖加热功能未启用；：热盖没有关闭；：热盖加热功能未启用；：热盖没有关闭；：仪器发生硬件或软件故障；操作区：由实验管理、运行设置、运行监控、通用设置四部分构成。＜运行实验＞：运行在实验管理标签中所选的实验文件。选定实验文件后，该按键＜运行实验＞：运行在实验管理标签中所选的实验文件。选定实验文件后，该按键＜＜＜＜暂停实验＞：暂停当前实验。该按键在系统状态为实验中时有效关机／重＜故障＞：该按键在正常系统下无效（灰色图标＜故障＞：该按键在正常系统下无效（灰色图标。如果仪器运行过程红色图标：仪器无法继续执行当前操作。红色图标：仪器无法继续执行当前操作。软件操作择不同项目进行操作实现完整工作流。实验管理：显示实验文件并提供相应的实验文件操作。运行监控：提供实验运行的实时状态信息、温度程序。通用设置：提供仪器的通用设置功能。实验管理显示区、实验文件信息窗口以及实验文件操作栏组成，如图所示。界面介绍及显示功能描述：实验文件显示区：显示系统中已保存的实验文件及文件夹，如图所示。实验文件显示区内显示了仪器系统中已保存的实验文件及文件夹相应图标。可以在实验文件显示区右上角轻触图标，该图标将转换为图标，实验文件显示区可以在实验文件显示区右上角轻触图标，该图标将转换为图标，实验文件显示区内的文件查看方式将由文件图标转换为文件详细信息列表。实验文件信息窗口：显示当前系统内所存储的实验文件数量，如图所示。USB…＞四个按键组成，如图所示。时无效;新建文件夹的三种方式为：新建文件夹:可以轻触<新建>按键,并在下拉菜单中选择<新建文件夹>创建一个新的文件新建实验:若系统内没有已保存的实验文件,或没有选中任何实验文件,可以轻触<新建>按键,并在下拉菜单中选择新建实验选项,,创建一个新的空实验文件;基于选择的实验新建实验:若某一实验文件已被选中,可以轻触<新建>按键,并在下拉菜单中选择基子选择的实验新建实验选项,创建一个与已选实验设置相同的新实验文件。以轻触<Enter>保存新的实验文件或文件夹名称,或轻触<关闭>放弃命名并退出屏幕键盘。提示:文件夹里不可以新建文件夹。＜重命名＞：对已选实验文件或文件夹重新命名，该按键在系统状态为实验中时无效。＜删除＞：删除已选实验文件或文件夹，该按键在系统状态为实验中时无效。＜USB…USB设备之间实验文件传输。＜导出实验＞:将仪器软件中的已选实验导出到USB设备。USB设备中的已选实验导入到仪器软件。运行设置可以在运行设置页面对新建实验的温度程序、反应体系及热盖温度进行设置，如图所示。提示：在实验管理页面创建新实验文件后，系统软件将自动进入运行设置页面；可进入运行设置页面查看、更改已选实验文件的相关设置。a.反应体系：可以轻触反应体系右侧的和按键对其进行设置。〇提示：反应体a.反应体系：可以轻触反应体系右侧的和按键对其进行设置。〇提示：反应体0ul-100ul。b.热盖：可以使用和按键对热盖温度进行设置，或轻触热盖复选框，确定是否使Block0Tubeb.热盖：可以使用和按键对热盖温度进行设置，或轻触热盖复选框，确定是否使用热盖加热功能。40110C.阶段设置框：属性栏及功能键描述如下。阶段：显示温度程序各阶段的阶段类型；＜上移＞：将所选阶段上移；＜＜上移＞：将所选阶段上移；＜添加＞：添加一个新阶段，或在所选阶段后添加一个阶段；＜删除＞：删除所选阶段；＜删除＞：删除所选阶段；＜下移＞：将所选阶段下移；＜编辑＞：可以在编辑栏轻触图标对相应步骤进行编辑；＜上移＞：将所选阶段上移；＜编辑＞：可以在编辑栏轻触图标对相应步骤进行编辑；＜上移＞：将所选阶段上移；＜添加＞：添加一个新阶段，或在所选阶段后添加一个阶段；＜删除＞：删除所选阶段；＜下移＞：将所选阶段下移；可以在阶段设置框内轻触图标，软件将自动弹出阶段类型选择窗口。如图所示：＜删除＞：删除所选阶段；＜下移＞：将所选阶段下移；可以在阶段设置框内轻触图标，软件将自动弹出阶段类型选择窗口。如图所示：23步法扩增、和冷却五个可供选择的预定义阶段。回到温度设置子标签。提示：实验温度程序最少包含一个有效阶段。第2进行更改。当前阶段的循环数进行设置，如图所示。轻触＜取消＞取消设置。第3/删除步骤在阶段设置框中选择任一阶段，右侧的步骤设置框中将显示已选阶段所包含的步骤；可以添加新的步骤，或选中任一步骤，将其删除或对其排序进行更改；提示：一个阶段的最少包含一个有效步骤。在步骤设置框中选中任一步骤，并轻触编辑栏内的图标，软件将自动弹出步骤编辑第4在步骤设置框中选中任一步骤，并轻触编辑栏内的图标，软件将自动弹出步骤编辑软件提供了标准、降落、梯度和长片段四种步骤模式选项，可以轻触各选项前的图标软件提供了标准、降落、梯度和长片段四种步骤模式选项，可以轻触各选项前的图标进行模式选择，已选中的图标将显示为蓝色。1）步骤编辑窗口默认选中的步骤模式为标准。温时间、目标速率输入框，如图所示。轻触＜确定＞确认设置，或轻触＜取消＞取消设置。提示：目标温度的设置范围0.0℃-100.0℃。提示：恒温时间的设置范围1s-60min。提示：目标速率的设置范围0.1℃/s-3.5℃/s。若将当前步骤设置为降落步骤模式，步骤编辑窗口将如图所示。需要为降落步骤的退火温度范围设定起始温度和目标温度，并确定每个循环的温度变侧的空白处，并在软件自动弹出的输入框中输入相应的参数值，如图所示。提示：降落步骤起始温度和目标温度的设置范围35.0℃-100.0℃。提示：温度变化的设置范围为0.1℃一5.0℃提示：起始循环的设置范围为1到本阶段的循环数。提示：其它参数设置与标准步骤模式相同。若将当前步骤设置为长片段步骤模式，步骤编辑窗口将如图所示。需要为长片段步骤的恒温时间范围设定目标时长和起始时长，并确定每个循环的时长提示：长片段步骤起始时长和目标时长的设置范围为15一60min。提示：时长变化值的设置范围为1s一10min.提示：起始循环的设置范围为1到本阶段的循环数。提示：其它参数设置与标准步骤模式相同。4）若将当前步骤设置为梯度步骤模式，步骤编辑窗口将如图所示。可以为已选梯度步骤设置中心温度和温度偏移量，系统软件将根据设置自动计算第112看，如图所示。提示：中心温度的设置范围为应在35.5℃一99.5℃之间。提示：温度偏移的设置范围为0.5℃一20℃。提示：所设置的中心温度±温度偏移温度范围为应在35.0℃-100℃之间。提示：其它参数设置与标准步骤模式相同。进入运行监控页面，如图所示。前实验的运行状态信息。l）运行状态栏以在运行状态栏实时查看当前实验的运行状态信息。2）运行监控图运行监控图显示了当前实验的温度程序，如图所示。下方的阶段方框显示了各阶段对应的阶段类型和循环数；上方的步骤方框显示了各步骤的编号，各个步骤由蓝色实线隔开。的恒温时长；显示热盖加热中。3.2.3.4通用设置标签由仪器、配置、服务三个子标签组成。1）仪器子标签：通用设置页面上默认选中的子标签为仪器，如图所示。设备序号：显示查看当前仪器设备出厂的唯一编号；对仪器设备的系统进行升级；告警信息：显示当前仪器自检或运行时出现的告警信息，可以轻触＜详细信息＞查看所有告警信息。示。可以使用和按键设置仪器显示的年份；可以使用和按键设置仪器显示的年份；可以使用和按键设置仪器显示的月份；可以在小时、分钟、秒钟设置框中使用和可以在小时、分钟、秒钟设置框中使用和按键设置仪器显示的时间；可以在日期格式设置框中，点击格式下拉菜单，选择仪器上显示年月日的格式，也可以点击2412小时制，选择仪器上显示时间的格式；界面。2）配置子标签：如图所示屏幕键盘输入新的仪器名称，如图所示。液晶亮度：可以使用和按键调整屏幕亮度。网络信息：显示当前仪器的网络地址信息，可以轻触＜编辑＞，软件将会自动弹出网络操作窗口，如图3一5一5所示。可以在此窗口中查看lP设置的各项参数，还可以液晶亮度：可以使用和按键调整屏幕亮度。屏幕触碰音：可以轻触＜打开＞和＜关闭＞确定是否开启屏幕触碰音。3）服务子标签：如图所示清除储存器：可以轻触＜清除＞，清除所有实验文件。调试模式：可以轻触＜进入调试模式＞并输入密码打开调试界面。基因扩增热循环仪的维护保养仪器的清洁本仪器在常规使用的情况下，不需要大量的维护。如果长时间使用本仪器，则需要定期禁止：切勿在通电时或仪器运行过程中对仪器进行清洁或维护。禁止：切勿将水或其他溶液倒入样本舱、样本模块或任仪器部件内部。仪器通电时，禁止：切勿在通电时或仪器运行过程中对仪器进行清洁或维护。禁止：切勿将水或其他溶液倒入样本舱、样本模块或任仪器部件内部。仪器通电时，注意：乙醇为易燃易挥发性液体。暴露接触会刺激眼睛、皮肤和呼吸道，并可能导致液体流入可能会导致电击！注意：乙醇为易燃易挥发性液体。暴露接触会刺激眼睛、皮肤和呼吸道，并可能导致套。生物危害：请视所有样本为潜在性生物危害的样本进行处理及操作，如果液体样本溢应等待样本模块温度降至室温，以免发生烫伤。生物危害：请视所有样本为潜在性生物危害的样本进行处理及操作，如果液体样本溢生物危害：切勿在的未采取任何安全防护措施的情况下，对任何有潜在性生物危害的员造成伤害。生物危害：切勿在的未采取任何安全防护措施的情况下，对任何有潜在性生物危害的样本进行处理及操作。清洁仪器外壳第1注意：请勿将清洁剂直接喷在在仪器上，这可能会引起电子设备的故障。注意：请避免使用强酸碱、75％以上的浓酒精、有机溶剂或烈性去污剂对仪器外壳注意：请勿将清洁剂直接喷在在仪器上，这可能会引起电子设备的故障。注意：请避免使用强酸碱、75％以上的浓酒精、有机溶剂或烈性去污剂对仪器外壳进行清洁，会破坏仪器表面涂层。清洁仪器触摸屏第1注意：不要将清洁剂直接喷在在仪器上，这可能会引起电子设备的故障。注意：不要使用研磨性清洁剂或粗糙的材料来清洁触摸屏，这可能会刮花触摸屏。2注意：不要将清洁剂直接喷在在仪器上，这可能会引起电子设备的故障。注意：不要使用研磨性清洁剂或粗糙的材料来清洁触摸屏，这可能会刮花触摸屏。清洁样本模块第1第23清洁时请使用蘸取温和清洁剂的棉签清洁锥孔。注意：不要将清洁剂直接喷在仪器上，这可能会引起电子设备的故障。可能损坏仪器。注意：不要将清洁剂直接喷在仪器上，这可能会引起电子设备的故障。仪器维护请定期检查本仪器的放置区域以确保空气流通，并且无其他物品干扰仪器周围的空气流动。保持供电稳定本仪器的正常运行需要稳定的电力供应，因此请定期检查本仪器的±10％的偏差。并确保电源插座的额定负载不小于仪器的要求。注意：切勿将开盖或盖子破损的反应耗材放入样本模块锥孔中，试剂可能会漏出并覆保持仪器清洁注意：切勿将开盖或盖子破损的反应耗材放入样本模块锥孔中，试剂可能会漏出并覆注意：长时间不使用本仪器时，请拔掉仪器电源插头并用软布或防尘袋覆盖仪器，盖在热盖、样本舱和样本模块的表面。注意：长时间不使用本仪器时，请拔掉仪器电源插头并用软布或防尘袋覆盖仪器，以防止灰尘进入。基因扩增热循环仪的注意事项仪器操作注意事项要在连接电源线的情况下更换元器件。勿跌、损仪器，小心取放。工作不正常时，请切断电源重新启动仪器。在实验操作过程中，热盖温度会高达105℃，注意烫伤。禁止在实验过程中随意打开上盖，以免影响实验结果。第PAGE第50页共130页人民医院检验科主题内容 标准操作规程

文件号:AXRY-PCR-SOP—007版本/修订号：1/0：20190810其他细节注意事项芯插头，这是一种安全装置，请配合使用此型号的三孔电源插座。（允许±10％的偏差。并确保电源插座的额定负载不小于仪器的要求。电源线本仪器通常应使用随机附带的电源线。如果电源线破损，必须更换。第PAGE第48页共130页安乡县人民医院检验科主题内容

文件号:AXRY-PCR-SOP—008版本/修订号：1/0：20190810净化传递窗的使用与维护操作规程目 递窗得到正确使用与维护。适用范围：本实验室传递窗1、按厂家提供的说明书正确安装；2、使用环境条件：温度（5-4℃；温度（＜85；电源（220V±10，50Hz±2Hz；3、对于新安装或长期未使用的传递窗在使用前必须用不产尘的工具仔细清洁；4、当传递货物时，打开传递窗传送口的门，将被传递货物放入传递窗内，并关门，传递窗另一边的操作人员打开传递窗传送口的门，从传递窗取出被传递的物品并关门；5、开门动作要轻，传递物品要轻拿轻放；6、不要同时打开传递窗两边的门，以免传递窗两边空气对流互扰；75%酒精擦拭紫外灯，免影响杀菌效果；8、检修前必须切断电源。第PAGE第49页共130页人民医院检验科

文件号:AXRY-PCR-SOP—009版本/修订号：1/0

紫外线消毒车的使用与维护操作规程生效日期：20190810紫外线消毒车的使用与维护操作规程目 室的紫外消毒车能得到正确使用与维护。适用范围：适用于本室的紫外消毒车。12500A°—2600A220V50Hz220VA+15%灯管调节角度0-135°。2、使用时先打开保护门，用手托住灯臂往上抬至需要位置，插上电源，打开带灯开关，根据需要设定时间。3、使用完毕将按纽摁到底，同时另一手托位灯臂慢慢将灯管放进灯箱内关上保护门，切断电源。4、定期用干布擦干净产品外壳，用纱布沾75%酒精擦拭灯管，以保持洁净。5、贮存环境应在相对温度不超过80%，无腐蚀性气体和通风良好的室内。第PAGE第50页共130页人民医院检验科主题内容 操作规程

文件号:AXRY-PCR-SOP—010版本/修订号：1/0：20190810生物安全柜的使用和维护保养标准操作规程：为规范生物安全柜的操作与维护工作，确保仪器正常运作和实验顺利进行，以保障工作人员的安全，特制定此标准操作规程。适用范围：本制度适用于实验室的生物安全柜。程序细则：1support”键打开电源4200mm，当窗高报警时，应将前窗高度降低switch”按键，打开日光灯，开始正常工作Disinfecg-switch”键，同时拉下前窗，使用紫外线Disinfecg-switch”键72000小时由生产厂家更换高效过滤膜相对洁净区，右侧为污染区，实验人员操作时动作不宜过大，以免改变柜内的气流文件支持：生物安全柜使用说明书文件号:AXRY-PCR-SOP—011版本/修订号：1/0人民医院检验科恒温金属浴使用和维护保养标准操作程序主题内容文件号:AXRY-PCR-SOP—011版本/修订号：1/0人民医院检验科恒温金属浴使用和维护保养标准操作程序主题内容生效日期：20190810第PAGE第51页共130页恒温金属浴使用和维护保养标准操作程序目 的：正确使用和维护干式恒温器。程序细则：干式恒温器的正确使用：打开电源开关，设定所需达到的温度及恒温时间。位闪烁。按“TEMP”键一次闪烁位移至百位，再按一次移至十位，再按一次移至个位以此类推。闪烁位的数值按“▲”或“▼”进行修改。按“TIME”键立即放开，此时显示窗显示的值为上次运行的时间设置值，同时最右位闪00:00时，表示时间运行值为∞，仪器持续恒温。3．温度、时间设置完成后，按“R/S”键立即放开，仪器开始运行，温度开始升高，同时伴随“嘀”的声音。此时，温度显示窗显示的为即时温度值，升温过程中，小数点会有规律地闪烁。当温度恒定后，小数点有规律地闪烁就停止，时间显示中“：”开始闪烁，同时恒温倒计时开始。计时结束，运行停止，蜂鸣器鸣叫报警，此时温度显示窗显示为模块即时温度，时间显示窗显示“OVE4TEMP”或“TIME”键可重新设置温度或时间；直接按“R/S”键，可按上次设置的温度时间参数开始运行程序。2秒钟后运行停止。再按此键一次，侧重新开始运行。干式恒温器的维护：分、导热良好、避免污染。支持文件：K30B干式恒温器使用说明书文件号:AXRY-PCR-SOP—012版本/修订号：1/0生效日期：20190810安乡县人民医院检验科主题内容文件号:AXRY-PCR-SOP—012版本/修订号：1/0生效日期：20190810安乡县人民医院检验科主题内容离心机操作维护保养标准操作程序第PAGE第53页共130页离心机操作维护保养标准操作程序目 的：正确使用、维护和保养微量高速离心机。型微量高速离心机。程序细则：使用与操作：转子和试管检查否则造成的后果由用户负责。安装转子将转子套入驱动轴上,加入垫片,将锁紧螺钉拧入驱动轴顶端的螺孔,用螺丝刀拧紧(产品出厂前转子已装好,使用前请检查锁紧螺钉是否已拧紧)。离心管加液及放置而产生振动和噪声。门盖的关闭,用手往上抬门盖,检查门盖是否已锁紧,门盖打不开,表示门盖已锁紧。设置转速、时间、设置转速：按[SPEED]键，当转速显示窗口数码管闪烁时，即进入转速设置状态，（最高转速为16000r/mi键确认。、设置时间：按[TIME]键，当时间显示窗口数码管闪烁时，即进入时间设置状态，（99分钟[ENTER]键确认。工作时间为倒计时显示。启动和停止运行(1)、启动：按[START]键启动离心机运行。运行指示灯亮.运行前应确认转子已被正确的固定在驱动轴上。并且离心室已清理，无杂物。（2、自动停止：运行时间倒计时到零离心机自动减速停止运行,停止指示灯亮。(3)[STOP]键离心机减速停止运行,停止指示灯亮.在运行中可以随时按[STOP]键停止离心机工作。离心管的取出开锁拉手向内压,打开门盖,取出离心管。卸转子当需要更换转子时,须卸下在用转子,用螺丝刀拧出锁紧螺钉,取下垫片后再取出转子即可.维护及保养1．转子从离心室取出后，及时用中性洗涤液清洁，用干净布料擦干，防止化学腐蚀，存护。转子安装和取出动作要轻，垂直向上取出转子，谨防转子跌落损伤驱动轴。滑脂保护。支持文件：TG16-W型微量高速离心机使用说明书文件号:AXRY-PCR-SOP—014版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科主题内容文件号:AXRY-PCR-SOP—014版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科主题内容临床标本的采集、运送、接收程序第PAGE第55页共130页临床标本的采集、运送、接收程序目的：规范临床待检标本的正确采集、送检和处理。适用范围：基因扩增检验实验室的所有临床检测标本程序：标本的采集集并送至实验室。标本采集要求2ml真空采集管采集血液标本，血标本采集后在2小时内送达实验室（HCV采用EDTA抗凝的血浆1.5ml的离心管中，编号。痰标本：用带盖的无菌一次性塑料杯收集清晨第一口痰标本送检（对于无痰或少痰的患者，45100g/LNaCl水溶液雾化吸入或改变体位以使痰液易于咳出；对于小儿可以轻压胸骨柄上方以诱导咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集标本）标本在室温下保存不能超过24小时。c）生殖道拭子：尿道或阴道分泌物由医生用专用取样拭子（灭菌，一次性）采集样本，及时送检。采集生殖道拭子标本，要求男性病人在采样前2小时内不能排尿，采样时，将棉拭子伸入男性尿道及女性宫颈口2～3cm，转动一周以获得上皮细胞。d）尿液：由病人自留尿液于无菌封闭的杯中送检。e）脑脊液和胸腹水：由临床医生采集后放入消毒的试管中及时送检。注意：所有上述用于临床标本采集的容器，均应使用前高压灭菌和密封。标本的运送标本采集后，密闭、标（贴）姓名，应尽可能快的送至检测实验室，如运送时间需2小时以上，必须用冰盒送至实验室。标本中如加入了适当的稳定剂，如用于RNA4mol/L异硫氰酸胍盐（GITC）的血清（浆）标本和用于DNA测定的EDTA抗凝血等，则可在室温下运送或邮寄。接收严格对各类样本的查对和双签制度，对病房各样本及时进行验收，查对，不符合要求的样本一律退回，并有书面记录。分类验证一般内容进入实验室的样本在进行编号、离心前，工作人员应再次认真查对姓名，住院号，病区床号，项目等。对不符合要求者应作记录，并及时通知采样科室，正确及时地补采样，以免延误病人的检测结果报告。按检测项目验证标本HBVEDTA-K2，不可使用肝素。标本为全血时应及时分离出血浆保存。HCV：同上，但标本为血清时，要在1小时内分离出血清用于检测。c）TB：晨起第一口深部痰(不能为唾液)、胸腹水、脑脊液、脓液或穿刺液。d）CT、UU、HPV：尿道或阴道分泌物。实验室人员对标本进行查验，出现下表中不合要求的情况时，应拒收标本，登记并告知相关科室。类别拒收原因1未正确使用抗凝剂的标本造成凝血的标本2严重溶血3严重脂血4采血量不足（血清＜200uL、全血＜1mL）5检测项目TB的标本是唾液而不是晨痰6标本容器破裂，标本被污染7标本的病人姓名、年龄、性别等与检验单不相符8RNA检测，采样时间超过2小时9其他可能严重影响检验结果的原因3．5．2．4拒收程序a）对拒收的不合格标本应在拒收标本记录本上登记。b）填写不合格标本处置单，并随同申请单送返送检科室。c）必要时电话告之相关科室医生或护士。本文涉及以下图表：接收标本登记本拒收标本登记本第PAGE第59页共130页人民医院检验科主题内容

文件号:AXRY-PCR-SOP—014版本/修订号：1/0：20190810标本的唯一性标识编制程序目的：保证标本编号的唯一性，也是准确发放报告的基础。适用范围：实验室开展的所有项目。程序：按检测日期分类标记根据标本送检的日期，每天的标本对应标记一种唯一的代号。如当天为201971日，则编20190701。50105号最后编号为日期编号加标本编号，例如：20190701012019年7月1日 1号标本2019 07 01 01特殊标本的编号如有特殊情况，应在标记前面增加特异字母区别开，如其它医院送来的样本。编号步骤a）对当天送来的标本，根据编号的基本原则编号。b）收集好每个样本相对应的条码单或检验申请单。做好标本的接收记录，每个标本的记录都应包括以下信息：接收时间、科室、送检医生、患者姓名、性别、年龄、标本类别、标本状态、送标本者、接收人、检验单号、标本唯一统编号等。处理好样品、点样后，将反应管放入扩增仪上开始扩增。e）结果分析，发放检验报告单。5.本文涉及以下图表：接收标本记录表第PAGE第59页共130页安乡县人民医院检验科主题内容

文件号:AXRY-PCR-SOP—015版本/修订号：1/0：20190810临床标本的保存标准操作程序1、目 的：临床标本正确保存，以便必要时复查。2、适应范围：基因扩增检验室的所有临床检测标本。3、程序细则：处理前的标本保存（HB4（24h内（血浆保存于-20℃下。HCV1200µl-2RN。TB4℃下，长期保存则于-20℃下。（24h内）4℃下，长期保存则需在-20℃下。报告发出后的标本保存：提取的核酸标本当天检测可置4℃保存，如当天不检测应置-20℃保存。报告发出后第二天丢弃。-201个星期，以备复查。超1个星期保存期的标本由室负责人酌情处理，一般按生物传染性物品交医院统一处理。血清/特殊标本的处理：对暂不检测的项目和规定时间外收到的零散样本，要随时登记和交班，以免漏检，遗情动态考察的病人标本一律置于-20℃下长期保存，使用时再按需取出检测。5.本文涉及以下图表：文件号:AXRY-PCR-SOP—016版本/修订号：1/0人民医院检验科B（GBS）核酸检测实验标准文件号:AXRY-PCR-SOP—016版本/修订号：1/0人民医院检验科B（GBS）核酸检测实验标准操作规程主题内容生效日期：20190810第PAGE第60页共130页B族链球菌（GBS）核酸检测实验标准操作规程目的：保证B族链球菌（GBS）检测结果准确、可靠。适用范围：B族链球菌（GBS）的荧光定量检测。生产企业：苏州天隆生物科技有限公司生产企业许可证号：苏食药监械生产许2014-0001号原理：本试剂盒选用B族链球菌保守基因片段设计特异引物及特异Taqman探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNAPCR延伸反应过程中，Taq5’端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离3’端荧光淬灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，实现在全封闭反应体系中对BBNCBI网站进行BLAST比对分析，证实这段序列在NCBI的核酸库中是无法找到的，不会互相干扰，根据的监控，可有效监控假阴性的发生。试剂主要成分：核酸提取液、GBS反应混合液、Taq酶、GBS阳性对照、阴性对照。试剂储存：避光保存于-20℃，试剂有效期12个月，避免反复冻溶。标本要求：标本类型：妊娠34-37周孕妇的生殖道分泌物样本及直肠分泌物样本。标本采集：样本采集具体方法请参考《微生物标本采集手册》一书。所需设备：实时荧光PCR仪、台式高速离心机、混匀器、冰箱4℃、-2℃、生物安工作台、离心管等。程序步骤:10.1样本处理【样本处理区】1ml无菌生理盐水(冻存标本使用前在室温融解并充分混匀)，充分震荡摇50μl核酸提取液()，混匀10sec，10010min，12000rpm10minPCR扩增用。50μl50μl100℃水浴或干浴10min。12000rpm10min，备用。10.2.试剂配制【试剂准备区】n[n=测试数+对照数（2）]，每测试反应体系配制如下：组分组分GBS反应混合液35.2μlTaq酶0.8μl总体积体积36μln36μlPCR薄壁管中，然后转移到样本处理区。10.3加样【样本处理区】36μl阴性对照品、4μl样品处理上清液，盖紧反应管，转移至PCR检测区。10.4.PCR扩增及荧光检测【PCR扩增区】将各反应管按一定顺序放入荧光定量PCR仪上，按以下程序进行PCR扩增：步步循环数温 度（℃）时 骤1124095946003:0000:1500:30（收集荧光）检测荧光选择：检测样本（FA，内标（HEX/VI）11、检验结果的解释：阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品的最高点。阳性对照Ct值应小于38，阴性次实验视为无效，应检查仪器、试剂、扩增条件等方面的误差。为阴性Ct值，如果内标VIC通道Ct值＜40的标本为阴性标本，内标Ct值无数据则怀疑有假阴性的情况，应当重复试验。产品性能指标：外观：试剂盒包装完好，盛装各试剂的冻存管及离心管无破损，标签完好。8份阴性参考品，检验结果均应为阴性，符合率（-/-）为8/8。8份阳性参考品，检验结果均应为阳性，符合率（+/+）为8/8。检测结果符合率应≥17/20。数值的变异系数（CV,%）≤5%。注意事项：有关实验室管理规范严格按照质量手册执行本试剂盒仅用于体外检测。本试剂盒的所有操作应严格按照相关标准操作程序进行。实验室严格分区操作：-准备扩增所需试剂；-待检测样本和对照品的处理；PCR扩增区-PCR扩增检测。各区物品均为专用，不得交换使用，避免污染，每次实验完后立即清洁工作台。使用不含荧光物质的一次性手套、一次性专用离心管、自卸式移液枪和带滤芯吸头。质泄露污染仪器。盖。扩增完毕请立即取出反应管，密闭在专用塑料袋中，放于指定地点，等待同一处理。1000mg/L品一同灭菌后丢弃。PCR反应混合液应避光低温保存。不同批号的试剂请勿混用，并请在有效期范围内使用。14、实验室解释：B族链球菌（GBS）感染的辅助诊断以及治疗提供参考依据。文件号:AXRY-PCR-SOP—017版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科EB文件号:AXRY-PCR-SOP—017版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科EB病毒核酸检验标准操作规程主题内容第PAGE第63页共130页EB病毒核酸检验标准操作规程目的：保证EB病毒DNA检测结果准确、可靠。适用范围：EB病毒DNA的荧光定量检测。生产企业：苏州天隆生物科技有限公司生产企业许可证号：苏食药监械生产许2014-0001号5.产品标准编号：20153402134原理：本试剂盒选用EB病毒保守的基因片段设计特异引物及特异Taqman探针，该探针DNA模版发生特异性结合，再PCR延伸反应过程中，Taq5’端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从3’端荧光猝灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从EB病毒核酸的自动化检测。试剂盒中使用内质控体系，能够有效地防止假阴性结果的发生。试剂主要成分：核酸提取液、EB反应混合液、Taq酶、EB临界阳性对照、HBV阳性1#—4#备注：定量标准品具体标值参见试剂盒内指示，不同批号试剂盒中各组分不可互换。试剂储存：避光保存于-20℃，试剂有效期12个月，避免反复冻溶。标本要求：标本：全血。3-5EDTA抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5~10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀。48-20℃±5℃下保存不超过3个-70℃下长期保存，但应避免反复冻融。所需设备：TL988型实时荧光、台式高速离心机、混匀器、冰箱（4℃、-2℃、生灯、净化工作台、离心管等程序步骤:：（在试剂准备区进行）取出试剂，室温放置，待其温度平衡至室温，震荡混匀后2000rpm10sec。计算需准备反应试剂人分数【n=样本数+对照数（3）+定量标准品数（4配制：试剂试剂用量35.4ulTaq酶0.6ul36ul量PCR反应管中，转移至样本处理区。（在样本处理区进行）45ml1×的待用红细胞裂解液（一盒只需配备一次）500ul1000ul1.5ml5分钟5分钟，弃上清（4）500ul15分钟。5分钟，弃上清，上清尽量弃干净50ulEBDNA分钟50ul对照+50ul提取液，混匀)10PCR模板备用PCR（在扩增与分析区进行）PCR扩增。调用温度设置：95℃→3分钟，915秒、6030秒，40个循环，检测荧光选择：检测样本(FAM),最后运行反应程序。检验结果的解释：阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品的最高点。阈值范围一般为0.001-0.1CtCt值应在Ctr︱≥0.98，在阈值以上的荧光曲线应当是具有明显的S型曲线，否则该次实验视为无效，应检查仪器、试剂、扩增条件等方面的误差。阴性样本Ct值无数据且内标Ct值＜40。检测样本HBVDNA≥500IU/ml500IU/ml≤HBVDNA≤1.0×108IU/mlHBVDNA>1.0×108IU/ml时，应做适当稀释，使其落入有效范围内。500IU/ml，且内标Ct值＜40，低于本试剂盒检测下限，建议重复500IU/ml，可报告阳性结果；如果重复测定值仍500IU/ml，结果仅供参考；若检测过程中内标测定无数值，应当排查原因，重复对该样本检测。产品性能指标：根据临床研究结果我们确定如下性能指标：外观：试剂盒包装完好，盛装各试剂的冻存管或离心管无破损，标签完好。8份阴性参考品N1~N8，检验结果均应为阴性，符合率(-/-)8/8。阳性参考品符合率：8份阳性参考品P1~P(+/+为8/8。线性:1.0×103copies/ml～1.0×108copies/ml范围内线性参考品相关系数︱r︱≥0.98。4份定量标准品，其定量检测的线性相关系数︱r︱≥0.98。53次定量检测，其结果的均值应在L1-L5规定浓度范围内。500copies/ml的检测限参考品L2522次检验结果应为阳性，检出结果符合率≥22/25210次，浓度检出值对数值的变异系数(CV,%)≤5%。18mM0.8mg/mlEDTA抗凝剂干扰物，检测结果的浓度值的对数值F，两者相对偏B不超过±0.5个对数数量级。本试剂盒与人巨细胞病毒(HCMV)、单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSVII)、人类白细胞抗B27(HLA-B27)样本无交叉反应。注意事项：有关实验室管理规范请严格按照质量手册执行试剂盒仅用于体外检测。试剂盒的所有操作应严格按照说明书进行。-准备扩增所需试剂；样本处理区-待检测样本和对照PCR扩增区-PCR扩增检测。各区物品均为专用，不得交换使用，避免污染，每次实验完后立即清洁工作台。使用不含荧光物质的一次性手套、一次性专用离心管、自卸式移液枪和带滤芯吸头。泄露污染仪器。扩增完毕请立即取出反应管，密闭在专用塑料袋中，放于指定地点，等待统一处理。1000mg/L品一同灭菌后丢弃。PCR反应混合液应避光低温保存。不同批号的试剂请勿混用，并请在有效期范围内使用实验室解释：为EB病毒感染的辅助诊断以及治疗提供参考依据。文件号:AXRY-PCR-SOP—018版本/修订号：1/0人民医院检验科标准操作规程文件号:AXRY-PCR-SOP—018版本/修订号：1/0人民医院检验科标准操作规程主题内容生效日期：20190810第PAGE第67页共130页1

丙型肝炎（HCV）核酸定量检测试剂盒标准操作规程规范丙型肝炎（HCV）核酸定量检测试剂盒（PCR）操作流程，准确进行丙型肝炎核酸的定量检测。2应用范围：（HCV）核酸定量检测试剂盒（PCR）NP968（陕西食药监械（准）20101400095）及其配套试剂盒-核酸提取试剂盒（磁珠法（陕西食药监械（准）字20111400125）进行的丙肝病毒RNA3责任人：4生产企业许可证号：苏食药监械生产许2014-0001号医疗器械注册证编号：国械注准20153400378YZB/国0708-20158本试剂盒选用丙型肝炎病毒（HCV）保守的基因片段设计特异引物及特异Taqman测技术来检测扩增产物。由于Taqman探针能与引物扩增区域中间的HCV片段模板发生特PCR，Taq5’端荧光基团从探针上切割3’端荧光猝灭基团的屏蔽，即能接受光刺激HCV-RNA试剂盒中使用内质控体系，能够有效地防止假阴性结果的发生；核酸提取过程中，利用磁珠吸附原理，通过特制的磁棒吸附、转移和释放磁珠，实现磁珠9HCVHCVHCVHCV1#—4#、HCV10避光保存于-20℃~-30℃，试剂有效期12个月，避免反复冻溶超过3次。标本要求：标本类型：血清。1ml，置于灭菌的一次性试管中室温自然2000-4000rpm200.2ml送检。血清标本-20℃~-30℃保存，不宜反复冻融；（贴）姓名，应尽可能快的送至标本接收处，采用泡沫箱加冰袋密封进行运输。所需设备：PCRNP968（4℃-20℃、净化工作台、离心管等程序步骤：（在试剂准备区进行）n=样本数+对照数3+定量标准品数4系配制如下：试剂试剂HCVHCVHCV用量19ul0.6ul0.4ul20ulPCR4（在样本处理区进行）（陕西食药监械（准）20101400095）（磁珠法（陕西食药监械（准）字1400125）进行提取；从核酸提取试剂盒（磁珠法（陕西食药监械（准）字20111400125）123备用，按照对应说明书每支核酸提人民医院检验科

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丙型肝炎（HCV）核酸定量检测试剂盒生效日期：20190810标准操作规程310解后置于-205次，且室温放置不超过6小时；1，颠倒混匀数次使磁珠重悬，去掉真空（也可使用孔板离心机，500rpm×1min进行离心96孔板的第1、7列中分别加入20µl2，2ulHCV200µl的样本（包括临床血清/血浆样本、阴性对照品、临界性对照品、阳性对照品、4个定量标准品、质控等；NP968型全自动核酸提取仪按程序进行自动化提取：自动化程序结束后，将第6、12列的洗脱液转移至干净的无核酸酶离心管中。PCR反应混合液的PCR20μ心数秒，通过传递窗转移至基因扩增室。PCR（在扩增与分析区进行）PCRPCR调用温度设置：检测荧光选择：检测样本(FAM)、内标（HEX/VIC）,最后运行反应程序。14检验结果的解释：检测荧光选择：检测样本(FAM)、内标（HEX/VIC）,最后运行反应程序。14检验结果的解释：0.001-0.1Ct27-32Ct数据且内标Ct值＜40。标准曲线线性相关系数︱r︱≥0.98，在阈值以上的荧光曲线应当第69页共130页1142℃30min2195℃10min95℃10sec3555℃30sec72℃1min4409560℃℃530secsec文件号:AXRY-PCR-SOP—018版本/修订号：1/0人民医院检验科标准操作规程文件号:AXRY-PCR-SOP—018版本/修订号：1/0人民医院检验科标准操作规程主题内容生效日期：20190810第PAGE第71页共130页S误差。Ct值无数据且内标Ct值＜40。检测样本HCVRNA≥30IU/ml均判定为阳性，其中：检测样本测定值在50IU/ml≤HCVRNA≤1.0×108IU/ml范围内，可直接报告定量结果。检测样本HCVRNA>1.0×108IU/ml时，应做适当稀释，使其落入有效范围内。检测样本测定值介于30IU/ml≤HCVRNA≤50IU/ml，病毒载量过低，仅作定性判定，需谨慎跟踪。30IU/ml，且内标Ct＜40，低于本试剂盒检测下限，建议重复30IU/ml，可报告阳性结果；如果重复测定值仍小本检测。产品性能指标：根据临床研究结果我们确定如下性能指标：本试剂盒对国家标准品的定量结果，符合国家标准品所给定的参考值。30IU/ml，50IU/ml。精密度：临界阳性样本连续重复25次检测均被检出，且其浓度对数值的CV≤5%。线性：根据性能评估实验，确定本试剂盒线性范围在50IU/mlHCVRNA1.0×108IU/ml，其线性相关系数︱r︱≥0.98。亚型检测能力：本试剂盒对HCV1、1a、1b、2、3、2a、2b、亚型的WHO能准确检出。分析特异性：本试剂盒与乙型肝炎病毒HBV、戊型肝炎病毒HEV型（E、人巨细胞病毒HCMV、甲型肝炎病毒HAV1（HSV-12（HSV-2、结核分枝杆菌（TB应；18mM18mM170mMIgG0.5mg/mlSPSS差异显著性分析，结果表明二者无显著差异。注意事项：有关实验室管理规范请严格按照质量手册执行。本试剂盒仅用于体外检测，不可用于血源筛查。试剂盒内校准品、质控品或其他可能含有人源物质的组分，虽乙型肝炎表面抗原（HbsA、人类免疫缺陷病毒抗体（-HIV1/2、丙型肝炎抗体（-HCV）传染源对待。本试剂盒的所有操作应严格按照相关标准操作程序进行。实验室严格分区操作：-PCR各区物品均为专用，不得交换使用，避免污染，每次实验完后立即清洁工作台。使用不含荧光物质的一次性手套、一次性专用离心管、自卸式移液枪和带滤芯吸头。质泄露污染仪器。盖。扩增完毕请立即取出反应管，密闭在专用塑料袋中，放于指定地点，等待同一处理。品一同灭菌后丢弃。500mg/L的次氯酸钠、75%酒精或紫外灯进行消毒。PCR不同批号的试剂请勿混用，并请在有效期范围内使用。实验室解释：为丙型肝炎病毒（HCV）感染的辅助诊断以及治疗提供参考依据。文件号:AXRY-PCR-SOP—019版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科主题内容文件号:AXRY-PCR-SOP—019版本/修订号：1/0生效日期：20190810人民医院检验科主题内容DNA-RNA第PAGE第72页共130页DNA-RNA量处理。适用范围：用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。其处理后的产物用于临床体外检测使用。：苏州天隆生物科技有限公司生产企业许可证号：20140002号产品注册号：20140007号原理：核酸提取过程中，利用磁珠吸附原理，通过特制的磁棒吸附、转移和释放磁珠，实现磁珠/组成主要成分组件规格及数量组成主要成分组件规格及数量20T/盒（DT6）20T/盒（预封装）40T/盒（预封装）64T/盒（预封装）预封装试剂盐酸胍、超顺磁珠、乙二胺四乙酸、三羟甲基氨基甲烷蛋白酶K（干粉）三羟甲基氨基甲烷1T/条×20条5T/板×4板10T/板×4板16T/板×4板蛋白酶K蛋白酶K稀释液10mg/支×110mg/支×1支0.5ml/支×10.5ml/支×1支21mg/支×1支1ml/支×1支28mg/支×1支1.4ml/支×1支20T/盒（预封装）规格预封装试剂孔位说明有效工作孔位：A~E排，1~6列；1A~6A为1组提取，其余排相似。禁用孔位：F~H排，7~12列；这些为空白孔位，未添加试剂，无法完成检测。40T/盒（预封装）规格预封装试剂孔位说明有效工作孔位：A~E排；1A~6A为1组提取，7A~12A为一组提取，其余排相似。禁用孔位：F~H排；