细胞生物学实验指导

试验一、显微镜的构造与使用方法一、试验目的生疏显微镜的构造学会独立操作显微镜二、仪器和材料显微镜、擦镜纸、装片三、试验内容学生按编号把自己的显微镜取出，放在试验台上，在教师的指导下生疏显微镜各局部的构造及用途，然后进展操作练习。先用低倍镜进展对光联系，使视野光明而均匀。假设使用双筒目镜，还应学习目镜间距的调整。在转换高倍物镜观看，此时应留意它的视野亮度与低倍物镜有无区分？并思考通过哪几种方法调整使得高倍物镜的视野到达要求的亮度。取已制备好的装片进展观看：按低倍镜使用步骤和方法进展操作练习。留意要使观看到的像向前移动时，玻片标本应向那个方向移动？欲使观看到的像向右移动时，拨片标本应向那个方向移动？观看制备好切片：细胞核、中心体、胞间连丝、有丝分裂、减数分裂、高尔基体等。观看完毕后，按正规要求取下玻片，把显微镜收好。四、作业2-3中细胞构造试验二、FeulgenDNA〔一〕试验目的把握临时制片法。生疏Feulgen反响的原理及操作步骤。观看细胞中DNA的分布。〔二〕试验原理Feulgen1924年制造一种对DNA特异的组织化学染色反响，故称Feulgen反响。DNA经酸〔1mol/LHCl〕水解后，DNA分子中的嘌呤和脱氧核糖连接的配糖键被翻开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反响形成特异性的紫红色产物。该产物能特异地吸取550~570nm550~570nm光波的吸取值与DNA含量成正比关系，既符合化学计量学关系。此法既可定位用于细胞或组织化学染色反响，观看DNA的分布，又可用显微分光光度计和图像对细胞或组织中DNA的含量进展定量分析。紫红色的产生，是由于反响产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜色。比照组或实行不经盐酸处理，或预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反响。Feulgen反响对DNA染色稳定、颜色鲜亮、能定量，因此在细胞化学和组织化学中成为一个既古老、传统又经久不衰的DNA标记方法。〔三〕试验器具与药品试验器具恒温水浴锅、载玻片、盖玻片、染色缸、显微镜药品〔1〕1mol/LHCl8.5ml91.5ml。〔2〕Schiff0.5g100ml5min，使之充分5010ml1mol/LHCl250.5g偏重亚硫酸钠〔NaSO〕或偏重亚硫酸钾〔KSO

。在室温下静置24小时，其颜色呈褐色或淡黄色，22 5 22 5加活性炭0.5g，摇1min，过滤，滤液为无色。置棕色瓶密封，4℃保存。一般可以保存数月。〔3〕0.5%亮绿水溶液〔1~5倍使用。〔4〕Carnoy固定液：95%酒精:冰醋酸=3:1〔4〕亚硫酸氢钠溶液：10%NaSO3

5ml，1mol/LHCl5ml100ml，用时现配。〔5〕5%三氯醋酸〔6〕二甲苯试验材料四膜虫、酵母、洋葱根尖〔四〕试验方法临时制片的制备方法临时性的标本片是指在进展试验观看时，临时制备的不能长期保存的标本片。制备方法如下：取一张载玻片，用左手拇指和食指夹持载玻片的两端，右手的拇指和食指夹着一块清洁而松软的布，把载玻片放在两手指加着的布间，然后均匀地前后移动擦净载玻片的两面；盖玻片小而薄，擦时必需留神，把一张盖片平放在左手两指间夹着的布间，并轻轻捏住，右手指夹持盖玻片的边缘向一个方向转动进展擦拭，用力需轻而均匀〔假设盖玻片上有油或其它难以擦净的东西，可滴加医用酒精后再用布擦。把擦净的载玻片平放在桌上，用吸管留神吸取要观看的标本悬液，滴一小滴于载玻片的中心，然后用镊子轻轻夹住盖玻片的一端，将其对侧端先接触载玻片上悬液，渐渐地倾斜盖下防止产生气泡，再用吸水纸吸取多余的水分。如标本需要染色，可将染液滴在盖玻片的一侧〔不要滴在盖玻片上着色。假设使用染缸进展染色，则待细胞悬液干了之后，固定、染色在染缸中进展。试验步骤取少量四膜虫培育液涂于载玻片上，用牙签涂布开，空气中枯燥。取少量酵母培育液同上操作。Carnoy10~30min1在预热〔90℃〕15min。〔4〕1N盐酸〔60℃〕15min2不经盐酸处理。入Schiff401小时〔加罩，避光。取出载玻片马上用配制的亚硫酸氢钠溶液洗两次，每次2min。2min，重复一次。〔8〕0.1%10秒。取出后自来水略洗。空气中枯燥，显微镜下观看。如所观看到的切片较好，可作封片。先用50%无水乙醇＋50%二甲苯处理3min。2min。树胶封片。待干后可在显微镜油镜下观看。贴上标签，注明材料、反响名称、作者姓名及日期。染色结果处理处理结果观看试验组12试验组经Feulgen反响显示核构造细致、清楚，细胞核染成粉红色至紫红色，核仁不着色。经1DNA2由于DNA没有释放出醛基，细胞核显示出被亮绿染上的绿色。假设亮绿处理时间过长，则会造成细胞核区颜色过深。〔五〕留意事项载玻片和盖玻片上面可能有油，最好事先浸泡在70%酒精〔储存于冰箱〕中，待使用时取出以松软绸布擦净。供给的试验材料四膜虫和酵母可能浓度较低影响观看，可事先用离心机离心后弃局部上清后搅匀，到达浓缩目的涂片时最好在载玻片上端一角做好标记，以免试验时弄反正反面。涂片区不要超过载玻片2/31cm左右的圆。涂片完需待其完全枯燥后〔可置于温箱中使其快干，方可置carnoy上的细胞会大量脱落。在Schiff试剂中染色〔切记在避光处反响〕时，如室温过低会影响染色效果，可置于30度左右温箱中。亚硫酸氢钠溶液要现用现配，以防SO2的逸出而失效。亮绿染色时间不能过长，否则整个细胞包括细胞核区均会染色过深而看不出紫红色。〔六〕作业简图表示Feulgen反响的染色结果。对经过不同的处理后的染色结果观看后，比较其不同，进展分析。为什么到Feulgen染色的最终步骤时，要快速反复地用现配的亚硫酸氢钠溶液洗？试验三、植物细胞骨架的观看一、试验目的：初步把握在光镜下植物细胞骨架标本的制作方法。二、试验原理：用适当浓度的Tritonx-100处理植物细胞时，可将细胞内的蛋白质破坏，但却可以状构造。三、试验用品：

1、M缓冲液：50mM咪唑，0·5mM氯化镁，1mMEGTA[乙二醇双〔a-氨基乙苯〕醚四乙酸]，01mMEDT〔乙二胺四乙酸，1mMDTT〔二硫苏糖醇〕2、6mMPH6·5磷酸缓冲液〔5mMKCl〕3、1%Tritonx-100〔1液配制〕4、3%戊二醛5、0·2%考马斯亮兰R250，用少许无水酒精溶解，然后用12·5%三氯醋酸定溶，装入滴瓶备用。〔二〕用具：50ml烧杯、剪刀、镊子、手术刀、玻璃滴管、称量瓶〔或青霉素小瓶、显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸〔或卫生纸、温箱等。四、试验材料：颖、幼嫩的洋葱鳞茎内表皮五、方法步骤：1、用镊子撕取洋葱鳞茎的内表皮〔取材时留意不要用靠近边缘的内表皮0·5-1cm10ml，6mM，PH6·5的磷酸缓冲液中。1%Tritonx-1000·5-1〔28C温箱M3-55分钟。33%戊二醛固定一小时〔28oC温箱。46mM，PH6·53-510分钟。50·2%R25015min-0.5h〔在载玻片上进展。6、材料染色后用蒸馏水冲洗。7、制片，在高倍镜或油镜下观看，可见到与核联系的细胞骨架及靠近细胞壁的网状构造。六、留意事项：1、用Tritonx-100处理时，材料应浸泡入溶液2、染色时留意勿稀释药液七、作业：绘制洋葱鳞茎内表皮细胞的细胞骨架图。一试验目的：SDS-测定蛋白质分子量的原理；把握垂直板电泳的操作方法；SDS-测定蛋白质分子量及染色方法二.试验原理：SDS-是对蛋白质进展量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进展分别的。SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水局部相结合，破坏其折叠构造，并使其广泛存在于一个广SDS剂和去污剂后，电荷因素可被无视。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。三.试剂和器材：试剂：1.5x〔10ml〕:0.6ml1mol/LTris-HCl(pH6.8),5ml50%甘油，2ml10%SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml1%溴酚蓝，0.9ml4℃保存数周，或在－20℃保存数月。凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。过滤后置棕色瓶中，41个月。pH8.9分别胶缓冲液：Tris36.3g1mol/LHCl48ml80ml使其溶解，调pH8.9，100ml，4℃保存。pH6.7浓缩胶缓冲液：Tris5.98g1mol/LHCl48ml80ml使其溶解，调pH6.7，100ml，4℃保存。TEMED〔四乙基乙二胺〕原液6.10%过硫酸铵〔用重蒸水颖配制〕pH8.3Tris-Tris6.0g28.8g900mlpH8.3后，1000ml410倍。考马斯亮蓝G250100mg考马斯亮蓝G250200ml7.5ml70%250ml1小时，小孔滤纸过滤。器材：电泳仪，电泳槽，水浴锅，摇床。四.试验操作；〔一〕样品制备将蛋白质样品与5X20u＋5u在一个Eppendorf10℃加热5－10mi，取上清点样。〔二〕分别胶及浓缩胶的制备1将玻璃板、样品梳、Spacer用洗涤剂洗净，用ddH2O冲洗数次，再用乙醇擦拭，晾干；将两块洗净的玻璃板之间参加Spacer，依据Bio-RadMiniⅡ/Ⅲ说明书提示装好玻璃板；108.0ml，混匀；ddHO 3.0ml21.0mol/LTris-HClpH=8.8 2.1ml30%Acr-Bis 2.8ml10%SDS 80ul10%AP 56ulTEMED 6ul向玻璃板间灌制浓缩胶，马上覆一层重蒸水，大约20min后胶即可聚合；按如积配制6％浓缩胶3.0ml，混匀；ddHO 3.05ml20.5mol/LTris-HClpH=8.8 1.25ml30%Acr-Bis 0.4ml10%SDS 50ul10%AP 56ulTEMED 6ul将上层重蒸水倾去，滤纸吸干，灌制浓缩胶，插入样品梳；装好电泳系统，参加电极缓冲液，上样20μl;稳压200V，溴酚蓝刚跑出分别胶时，停顿电泳，约需45min～1hr.卸下胶板，剥离胶放入染色液中，室温染色1～2hr；参加脱色液，置于80rpm脱色摇床上,每20min更换一次脱色液〔10ml冰乙酸；45ml乙醇；45ml蒸馏水〕至完全脱净。五、计算分析计算相对迁移率：Rf=蛋白质样品距加样端距离〔cm〕/溴酚蓝距加样端距离×100%六、留意事项SDS与蛋白质的结合按质量成比例〔1.4gSDS/g蛋白质SDS结合量缺乏。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必需同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。并且SDS-10％误差，不行完全信任。有些蛋白质由亚基〔如血红蛋白〕或两条以上肽链〔α-胰凝乳蛋白酶〕组成的，它们在巯基乙醇和SDS的作用下解离成亚基或多条单肽链。因此，对于这一类蛋白质，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的亚基或是单条肽链的相对分子量。有的蛋白质〔如：电荷特别或构造特别的蛋白质；带有较大辅基的蛋白质〕不能承受该法测相对分子量。假设该电泳中消灭拖尾、染色带的背景不清楚等现象，可能是SDS不纯引起。试验五、口腔上皮细胞的活体观看活体染色是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，其目的是显示生活细胞内的某些构造，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活体染色技术可用来争论生活状态下的细胞形态构造和生理、病理状态。通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分别出局部细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种构造上而“电化学”特性。碱性染料的胶粒外表带阳离子，酸性染料的胶粒外表带有阴离子，而被染的局部本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性微小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是由于它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸取。詹纳斯绿B(JanusgreenB)和中性红(neutralred)粒体和液泡系的染色分别具有专一性。观看口腔活细胞内线粒体的形态、数量与分布；学习一些细胞器的超活染色技术。线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进展呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，内某些构造而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿B是线垃体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在四周的细胞质中染料被复原，成为无色状态。器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、解剖盘．载玻片、凹面载玻片、盖玻片、外表皿、吸管、牙签、吸水纸。试剂Ringer溶液：氯化钾0.25g氯化钙0.03g蒸馏水100ml1%、1/5000詹纳斯绿B溶液50mg詹纳斯绿B5mlRinger溶液中，稍加微热(30~40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，1%原液。取1%原液lml49mlRinger溶液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化力量。材料人口腔上皮细胞，小麦种子或黄豆幼根根尖。4．1人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色与观看37℃恒温水浴锅的金属板上↓21/5000詹纳斯绿B染液↓用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞↓刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中↓染色10~l5min(留意不行使染液枯燥，必要时可再加滴染液)↓盖上盖玻片,显微镜下观看试验报告〔1〕.绘口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布试验六、细胞免疫荧光测定,由于具有这一重要功能，所以叶绿体始终是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要争论对象。叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分别集中进展各种争论。观看叶绿体的自发荧光和次生荧光,并生疏荧光显微镜的使用方法。分别细胞器的常用方法是将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进展差速离心沉降速率取决于颗粒的大小、外形和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。叶绿体的分别应在等渗溶液(0.35mol/L0.4mol/L蔗糖溶液)中进展,以免渗透压的转变1000r/min2min,以去除其中的组织残渣和未被裂开的3000r/min5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有局部细胞核)。分别0~5℃的条件下进展；假设在室温下，要快速分别和观看。利用荧光显微镜对可发荧光的物质进展检测时，将受到很多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观看时应抓紧时间,有必要时马上拍照。另外，在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载片、盖片和无荧光油。器材主要设备:一般离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。小型器材:500ml2个,250ml1个,20支,10ml20支,5个，纱布假设干，无荧光载片和盖片各4片。材料颖菠菜。试剂0.35mol/L氯化钠溶液，0.01%吖啶橙(acridineorange)。叶绿体的分别与观看颖的嫩菠菜叶↓洗净擦干去除叶梗脉↓30150ml氯化钠溶液↓入组织捣碎机匀浆↓低速匀浆〔5000r/min〕3~5min〔裂开细胞〕↓匀浆液↓64ml1000r/min2min〔去除组织残渣和未被裂开的细胞〕↓取上清3000r/min5min↓保存沉淀〔即混有局部细胞核的叶绿体〕用氯化钠溶液悬浮↓光学显微镜下观看菠菜叶手切片观看颖菠菜叶↓刀片切出一斜面置于载玻片上↓1~2d氯化钠溶液↓盖上盖片显微镜下观看叶绿体的分别和观看一般光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。以Olympus荧光显微镜为例，在先用B(bule)激发滤片、B双色镜和O530(orange)阴断滤片的条件下，叶绿体发出火红色荧光。参加吖啶橙染色后，叶绿体可发出桔红色荧光，而其中混有的细胞核则发绿色荧光。菠菜叶手切片观看在一般光镜下可以看到三种细胞(1)表皮细胞:为边缘呈锯齿形的鳞片状细胞;(2)保卫细胞:为构成气孔的成对存在的肾形细胞；(3)叶肉细胞:为排列成栅状的长形和椭圆形细胞。叶绿体呈绿色橄榄形，在高倍镜下还可以看到绿色的基粒。,气孔发绿色荧光，两保卫细胞内的火红色叶绿体则围绕气孔排列成一圈。表皮细胞内的叶绿体数量要比叶肉细胞少。用吖啶橙染色后，叶绿体则发出桔红色荧光，细胞核可发出绿色荧光,气孔仍为绿色。6试验报告〔1〕.依据荧光观看结果，绘制菠菜叶的构造模式图。〔2〕.概述滤镜系统的选用原则。试验七、显微标本制作技术一、 概述显微标本制作技术是组织学、胚胎学、生理学及细胞学等学科争论观看细胞、组织的生理、病理形态变化的一种主要方法。大多数的生物材料，在自然状态下是不适合显微观看的，也无法看到其内部构造。由于材料较厚，光线不易透过，以致不易看清其构造，另外细胞内的各个构造，由于其折射率相差很小，即使光线可透过，也难以辨明。但在经过固定、脱水、透亮、包埋等手续后就可把材料切成较薄的片，再用不同的染色方法就可以显示不同细胞组织的形态及其中某些化学成份含量的变化，就可以在显微镜下清楚地看到其中不同的区域组分状态，切片也便于保存，所以是教学和科研中常用的方法。显微标本制作有很多不同的方法，一般可分为 非切片法与切片法两大类：非切片法有涂片、铺片、压片、磨片、整装片等；切片法又包括石蜡切片法、火棉胶切片法、冰冻切片法等。显微标本制作技术虽是生物学中很根本的操作技术，但由于生物材料的个体差异、化学试剂的多样性，因此操作技术相当细致而简单，方法也很多，每一步骤的失误都可导致整体的失败，因此需要急躁细致，不断总结阅历，才能得到较好的结果。二、 试验用品器械：电热温箱、显微镜、切片机、电热温台、天平、玻璃器皿、其它常用试剂：约翰森固定液：由福尔马林5毫升、丙酸5毫升、50% 酒精90毫升配制。该液用于固定植物根尖、茎尖，有较好的效果，通常固定 24小时，也可做保存液。常用脱水剂：酒精、正丁醇、叔丁醇、丙酮等。 常用透亮剂：二甲苯、甲苯、氯仿、丁香油等。常用粘贴剂：明胶粘贴剂：明胶1克、蒸馏水100毫升、石炭酸215毫升。蛋白粘贴剂：颖蛋白25毫升、甘油25毫升、石炭酸0.5克。包埋剂：石蜡、火棉胶、明胶等封固剂：阿拉伯树胶、加拿大树胶常用染剂：番红-固绿对染：固绿染液由0.5%95%酒精溶液配制，番红染液由1%的50%酒精溶液。制备植物石蜡切片常用固绿--番红对染，结果是木质化的细胞壁及细胞核染成红色，薄而且纤维素的细胞壁和胞质染成绿色。三、试验步骤切片法1、 切片法是必需依靠手或切片机将组织切成薄片来进展观看的方法。为了能清楚地观看到动、植物的组织构造及细胞形态，必需先经过一系列步骤将组织内渗入某些支持物质，使组织变硬以利于切成薄片，依据所用支持剂的种类不同，可分为徒手切片法、石蜡切片法、火棉胶切法、冰冻切片法等类型，切成薄片后还需要去蜡，染色、脱水、透亮等步骤，将其制成永久标本。2、 下边以石蜡切片为例，介绍显微标本制作方法。取材依据不同的试验目的，选择相应的材料，材料要求颖、准确、完整，材料要避开挤压、挫伤、枯槁。所采集材料应马上放入固定剂，并编号，注明采集时间、地点、名称、组织部位，所取组织块要大小适当，即要能说明问题，又要考虑固定剂的穿透力量。一般组织学取材稍大，细胞学取材稍小，植物组织取材稍小，动物组织取材要稍大。固定动、植物的任何组织部位，要制成切片，首先用化学试剂将其固定，固定的作用在于通过固定剂，在尽量短的时间内使原生质体停顿生命活动，并如同生前一样精细的保存其细胞构造，同时易于后步骤的染色所以良好的固定剂应当具备以下条件：快速渗入组织杀死原生质体，在短时间内，组织内外完全固定；尽可能避开使组织膨胀或收缩，并且软硬适宜于切片；增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别，同时增加媒染作用和染色力量。固定液同时是防腐液，使材料不致变质。脱水脱水是用一种即能与水又能与透亮液混合的液体来渐渐置换样品中游离的水。现承受的脱水剂一般是丙酮或乙醇来进展梯度脱水，脱水的时间，可依据组织的类型，大小而定。脱水的过程：一般是30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→80%→90%→100%→100%脱水应逐步而不应跨越太大的进展，否则将引起组织猛烈的收缩或变形，在经无水乙醇处理时，应保证试剂的纯度。透亮透亮是用一种即能与酒精又能与包埋介质混合的液体来置换样品中的酒精，从而为最终的包埋制造一个有利的条件。 现承受的透亮剂一般是二甲苯、甲苯、氯仿等。其过程为：1/3二甲苯+2/3乙醇混合液→1/2二甲苯+1/2乙醇混合液→2/3二甲苯+1/3→二甲苯→二甲苯二甲苯是使用最广泛的一种透亮剂，它具有渗透力强，溶解石蜡量大，又易挥发的优点，其缺点是易使组织收缩，变硬，变脆，因此透亮时间应依据组织块大小及质地酌情而定。渗蜡将完成透亮步骤的组织块浸入透亮剂与石蜡混合液中，不断提高石蜡的比例，直至用石蜡完全置换了组织块中的透亮剂，便于今后的包理与切片。 石蜡有液态与固态二种，渗蜡要在恒定温箱〔60°c〕中进展，以保证石蜡处于液态中。包理组织块经石蜡渗透后，其内部间隙已完全被石蜡占据，此时还需要用同种硬度的石蜡包理成蜡块以利于后边的切片，包理可用一样的器具，也可折叠一牛皮纸盒。将液态石蜡缓缓倒入纸盒中，再用镊子轻轻将浸好蜡的组织块夹入纸盒，浅埋在石蜡内，待石蜡冷却成固态即包埋完毕。至此，一块组织已完成前处理过程，可以切片，前边的步骤说明看来既无高深的理论，又无简单的技术，一切看似简洁，但一步做不到都会造成整个制片的前功尽弃。切片修块：切片前需修整蜡块，马上包埋好的一大块蜡块切开，使每一小块都含有一块组织，并将这组织四周的石蜡切除，将组织修成一小块蜡块并粘在大小适宜的硬木块上，以便于固定在切片机上。贴片：一手持毛笔，一手转动切片机，切片的蜡片连成一长条蜡带切下的蜡带放在一干净黑纸上，用小刀依据需要切成数段，分别贴在干净载玻片上。在恒温展片台上展平、烘干。染色切片可用不同方法，使其枯燥，然后进展染色。由于每一张载片上粘贴的是蜡带，因此必需先用二甲苯去除石蜡再用酒精去除二甲苯，再进入水中，才能染色，染色的方法很多，要依据每张标本要求显示的目的选择不同的染剂，最常用的是苏木精，伊红染色苏木精使细胞核是深紫色，伊红使细胞质显粉红色，以此显示清楚的细胞形态和核的大小，位置，染色后再依据制片的根本原理，使带水的载片经受脱水 →透亮步骤最终哟感树胶封片根本步骤如下：二甲苯×2〔脱蜡〕→酒精+二甲苯〔1:1〕→100%酒精×2→90% 酒精→80%→70%→50%→30%→水→苏木精染色(镜检)→水→50%→70%→90%→0.5%伊红(95%)→95%→100%×2→二甲苯:酒精(1:1)→×2树胶封片简便方法：先将各种材料切成片，要薄，不要用力的用镊子夹，放在载玻片上，在载玻片上滴一滴水，将薄片放入，如颜色格外淡，加碘酒染色，盖上盖玻片，用纸巾将水吸干，即可。四、试验结果观看染色结果，绘制细胞图试验八、离心技术与叶绿体的分别一、试验目的以分别叶绿体为例，把握离心机的操作技术；通过光镜鉴定叶绿体的纯度及了解叶绿体外形；二、离心技术概述离心技术〔centrifugaltechnique〕是依据颗粒在作匀速圆周运动时都会受到一个向外的力而进展起来的一种分别技术。〔一〕根本原理离心力和相对离心力离心力〔centrifugalforce，Fc〕是颗粒在肯定角度速度下作圆周运动受到一个向外的力。离心力〔Fc〕的大小取决于角速度与旋转半径：Fc=mω2r 〔1〕其中ω是旋转角速度，单位为弧度/秒；