蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定

PAGE1 -PAGE2- -1-蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定摘要：蔬菜中的硝酸盐和亚硝酸盐是一种对人体有害的化学物质,其含量比其它植物都高,人体摄入它会引起多种疾病.本实验采用分光光度发分别对拜城县恰玛古，柯坪县恰玛古，伊宁市恰玛古，大白菜，黄萝卜，黄瓜中亚硝酸盐及硝酸盐含量进行测定。结果表明：（1）亚硝酸盐：六种蔬菜中亚硝酸盐含量有明显的差异，测定结果是：大白菜0.7919mg/g，黄萝卜0.6930mg/g，黄瓜0.5763mg/g，拜城恰玛古0.5528mg/g，伊宁恰玛古1.1294mg/g，柯坪恰玛古0.5174mg/g。（2）硝酸盐：大白菜1.6098mg/g，黄萝卜0.0598mg/g，黄瓜0.7421mg/g，拜城恰玛古0.2608mg/g，伊宁恰玛古2.5308mg/g，柯坪恰玛古0.0317mg/g，蔬菜中亚硝酸盐含量的回收率88.80%。关键词：硝酸盐；亚硝酸盐；蔬菜；测定方法； 前言：蔬菜尤其是叶菜类蔬菜,是一种易于富集硝酸盐的植物。人体摄入的硝酸盐81.2％来自蔬菜[1]。硝酸盐本身毒性不大,对人畜无直接的危害,但含量过高对人体可能造成危害,因为在微生物的作用下极易还原为亚硝酸盐。亚硝酸盐是一种有毒物质,可直接使动物中毒!造成亚铁血红蛋白症,严重可致死亡[2]。亚硝酸盐，一类无机化合物的总称。主要指亚硝酸钠.亚硝酸钠为白色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。外观及滋味都与食盐相似，并在工业、建筑业中广为使用，肉类制品中也允许作为发色剂限量使用。由亚硝酸盐引起食物中毒的机率较高。食入0.3～0.5克的亚硝酸盐即可引起中毒甚至死亡[3]。硝酸盐,亚硝酸盐广泛存在于人类环境中,其对人类健康和生态环境的危害,日益受到人们的普遍关注。硝酸盐在细菌的作用下可还原成亚硝酸盐,使血液的载氧能力下降,从而导致高铁血红蛋白症。联合国世界卫生组织和粮农组织[4]早在1973年就制定了食品中硝酸盐的限量标准,以ADI值为基础,提出蔬菜可食部分中硝酸盐含量的卫生标准为432mg/kg(鲜样),亚硝酸盐成人每人每日容许量为7.8mg。蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐含量的高低已成为衡量蔬菜安全与否的一项重要指标,因此快速准确地测定蔬菜中硝酸盐和亚硝酸盐的含量极为重要[5]。亚硝酸盐(NO2-)是氮循环的中间产物，不稳定,广泛存在于水体、土壤和各类食品中。根据水环境条件，可被氧化成硝酸盐，也可被还原为氨。亚硝酸盐可使人体正常的血红蛋白（低铁血红蛋白）氧化成为高铁血红蛋白，发生高铁血红蛋白症，失去血红蛋白在人体内输送氧的能力，导致出现组织缺氧症状。另外，在人的肠胃中，亚硝酸盐还可与仲胺类物质反应，生成具有致癌性的亚硝胺类物质。因此，亚硝酸盐成为水质、食品等的重要监测项目之一[6]。用分光光度法测定蔬菜中亚硝酸盐含量时，为了消除蛋白质对测定结果的干扰，往往通过沉淀的方法来去除蛋白质[7]。在GB《中华人民共和国国家标准—食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定（GB/T5009.33—1996）中的格里斯试剂比色法》中，“样品处理”的主要目的就是通过沉淀来去除蛋白质，获测定所需的澄清滤液[8]。样品处理时所加的氢氧化钠溶液，亚铁氰化钾，乙酸锌溶液和水浴加热的作用是使蛋白质变性而易沉淀[9]。本文根据测定亚硝酸盐的标准方法于540nm处测定生成的偶氮化合物的吸光度,从而建立了一种简单、快速、灵敏度较高的测定痕量亚硝酸盐的方法。1.1实验部分1.1.1实验原理弱碱性条件下,用饱和四硼酸钠、亚铁氰化钾、乙酸锌沉淀除去蛋白质,氢氧化铝悬浮液脱色,减压抽滤;在酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸酰胺起重氮化作用,再与萘乙二胺盐酸盐和对氨基苯磺酸反应,生成紫红色偶氮染料,于波长540nm处测量蔬菜中亚硝酸盐的含量。1.1.2仪器与试剂1.1.2.1实验仪器：搅汁机;恒温水浴锅;722型分光光度计;电子天平;冰箱供试蔬菜为：大白菜，黄萝卜，黄瓜，拜城恰玛古，伊宁恰玛古，柯坪恰玛古。1.1.2.2实验试剂主要试剂有10.6%亚铁氰化钾溶液；22%乙酸锌溶液；饱和四硼酸钠溶液；磺胺；萘乙二胺盐酸盐；盐酸；镉粒；氨缓冲溶液；活性碳；硝酸钾；亚硝酸钠标准使用液；1.1.3试剂的配制：从表2-1，图2-1可以看出亚硝酸盐标准液的最大吸收波长为540nm.最大吸收波长对应的吸光度为0.121。亚硝酸盐标准曲线的绘制：（表2-2）亚硝酸盐标准溶液的浓度及吸光度浓度(μg/mL)00.20.40.60.81吸光度(A)00.0890.2010.3290.4510.584（图2-2）亚硝酸盐标准液的标准曲线亚硝酸盐及硝酸盐含量的测定（表2-3）不同蔬菜中亚硝酸盐的含量(mg/g)吸光度浓度含量平均值相对平准偏差大白菜0.0510.11960.74720.79193.76%0.0570.12970.80780.0580.13140.8208黄萝卜0.0430.10600.66050.69303.18%0.0460.11110.69240.0490.11620.7261黄瓜0.0320.08740.54420.57634.79%0.0390.09930.61760.0340.09080.5670拜城恰玛古0.0340.09080.56710.55284.74%0.0350.09250.57780.0290.08230.5136伊宁恰玛古0.0920.18901.17951.12942.96%0.0870.18051.12650.0830.17381.0822柯坪恰玛古0.0280.08060.50360.0310.08570.53500.51742.26%0.0290.08230.5138（表2-4）不同蔬菜中硝酸盐的含量(mg/g)总吸光度总浓度总含量硝酸盐含量平均值相对平准偏差大白菜0.2170.40072.50361.75641.60987.29%0.1930.36002.24151.43380.2130.39392.46001.6391黄萝卜0.0490.11620.72370.06330.05987.85%0.0510.11960.74520.05280.0550.12640.78960.0635黄瓜0.1080.21611.34540.80120.74216.09%0.1030.20761.29190.67430.1050.21101.31770.7508拜城恰玛古0.0570.12970.81040.24330.26084.47%0.0610.13650.85280.27500.0540.12470.77760.2641伊宁恰玛古0.3310.59373.70512.52552.53080.14%0.3270.58693.66222.53570.3230.58023.61332.5311柯坪恰玛古0.0310.08570.53530.03170.03170.11%0.0340.09080.56670.03170.0320.08740.54550.0317亚硝酸盐回收试验：在蔬菜样品中添加标准物质后与样品的制备，样品含量测定步骤相同条件下做回收试验。（表2-5）：回收试验结果试样体积(ml)吸光度回收率%1样品夜200.5052亚硝酸盐标准液20.455120+20.88889.21%2标准液与样品液20+20.88588.59%320+20.88588.59%2.2.2不同蔬菜之间亚硝酸盐含量硝酸盐含量的比较图4.（图2-3）各中蔬菜中亚硝酸盐含量及硝酸盐含量的比较从（图2-3）可以看出，伊宁恰玛古中亚硝酸盐含量是最高1.1294(mg/g)，最低是柯坪恰玛古0.5174(mg/g)。硝酸盐含量之间差异也显著伊宁恰玛古中硝酸盐含量是最高2.5308(mg/g)，最低是柯坪恰玛古0.0317(mg/g)。3.讨论3.1亚硝酸盐含量结果讨论采用分光光度法对蔬菜中亚硝酸盐及硝酸盐的含量进行测试分析，方法简便，快速，准确，专一性好，试验结果得到各地区之间含量存在着显著性差异。蔬菜中的亚硝酸盐，硝酸盐主要来源是人类活动，如：农药，化肥，生活排污的会产生亚硝酸盐及硝酸盐的。土地污染最直接的危害是不利于植物生长，导致农作物减产乃至绝收，严重污染的土地可能寸草不生。不仅如此，有毒物质被植物吸收积累后，通过食物链又进入人体，并在人体内富集，极有可能使人中毒。亚硝酸盐对人、畜的危害：亚硝酸盐是氮循环的中间产物，其性质不稳定，它是一种公认的致癌性污染，亚硝酸盐可形成致癌物亚硝胺，危害人畜的生命健康。所以亚硝酸盐超标会对食物链造成影响，影响人体健康。4.总结根据实验测定的结果以及数据分析，能大致得出以下结论：（1）亚硝酸盐：六种蔬菜中亚硝酸盐含量有明显的差异，测定结果是：大白菜0.7919mg/g，黄萝卜0.6930mg/g，黄瓜0.5763mg/g，拜城恰玛古0.5528mg/g，伊宁恰玛古1.1294mg/g，柯坪恰玛古0.5174mg/g。（2）硝酸盐：大白菜1.6098mg/g，黄萝卜0.0598mg/g，黄瓜0.7421mg/g，拜城恰玛古0.2608mg/g，伊宁恰玛古2.5308mg/g，柯坪恰玛古0.0317mg/g，蔬菜中亚硝酸盐含量的回收率88.80%。这些有助于我们更深一步的了解含亚硝酸盐的蔬菜消费过多时造成的一些不良后果，亚硝酸盐含量消费过多时，体内又缺乏维生素C的情况下，有强烈的致癌作用，主要引起食管癌，胃癌，肝癌和大肠癌等。日常膳食中的亚硝酸盐不会对人体造成危害，只有过量摄入才能有毒性作用。以上试验结果更合理的提供蔬菜消费可靠实际的依据，这些还表明该方法操作简便快速,灵敏度高,选择性和重现性好,干扰少,是检测水果中亚硝酸盐的好方法。参考文献：[1]赵庆芳,曾小英,丁兰,等.东方百合组织培养和快速繁殖研究[J].西北师范大学学报(自然科学版),2003,39(1):66-68.[2]上海第一医院，等.食品毒理.北京:人民出版社,1978.204-205.[3]黄彩海,杨丽绢,陈花果.紫外分光光度法同时测定水样中硝酸盐和亚硝酸盐氮.中国环境监测,1988,4(15):15.[4]王红丹,线性回归-紫外光度法同时测定NO3-和NO2-.化工环保,1987,7(5):302.[5]吴仲可,徐允梁,顾荷英.分光光度法