葡萄球菌属检验

元谋县人民医院检验科微生物室葡萄壬球菌属检验标准操作规程文件编号：生效日期：2011-11-01文件版本：第一版文件页码：1/3概述葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。标本类型血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。鉴定3.1形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。3.2培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。3.3生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。3.4鉴别要点3.4.1本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。3.4.2与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。3.4.3与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。3.4.4凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。表1凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验菌名凝固酶触酶溶血硝酸盐海藻糖半乳糖苷酶金黄色葡萄球菌金黄色亚种+++++-金黄色葡萄球菌厌氧亚种+-+---施氏葡萄球菌聚集亚种++++-ND中间葡萄球菌++d+++海豚葡萄球菌++++-NDS.lutrae++++++猪葡萄球菌d+-++-注：“+”为90%以上菌株为阳性，“-”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND”为无资料。3.5操作步骤3.5.1涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。3.5.2触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。3.5.3凝固酶试验参见《凝固酶试验标准操作规程》。3.5.4鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSIM100-S20最新版本文件。质量控制元谋县人民医院检验科微生物室葡萄壬球菌属检验标准操作规程文件编号：生效日期：2011-11-01文件版本：第一版文件页码：2/3参见《质量管理程序》。检验结果解释与分析6.1由于葡萄球菌分布广泛，从临床标本中分离到金黄色葡萄球菌时，将其定为致病菌时应慎重。应根据凝固酶试验进一步确认。对可疑菌株的鉴定，最好利用商品化的鉴定系统根据生化图谱进行确定。表皮葡萄球菌分离自导管相关血流感染时，通常视为致病菌。溶血性葡萄球菌从泌尿感染病人分离得到时，尤其是细菌量较大或作为优势菌时，通常被视为致病菌。6.2甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）对多种广谱强效抗菌药物呈多重耐药性。如果检测出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株则报告耐所有青霉素、头抱菌素、碳青霉烯类和p-内酰胺药/阡内酰胺酶抑制剂类抗生素，对氨基糖苷类和大环内酯类抗生素常协同耐药。若葡萄球菌属对四环素敏感，则对多西环素和米诺环素敏感。某些菌对四环素中介或耐药，而对多西环素和米诺环素敏感。临床感染葡萄球菌的病人用喹诺酮类治疗3-4日后，原来敏感的葡萄球菌易产生耐药。所以对这类葡萄球菌需多次反复进行药敏试验。大环内酯类耐药葡萄球菌包括固有耐药和诱导耐药。所以临床试验室须进行“D”试验以检测克林霉素诱导性耐药，根据“D”试验结果来报告克林霉素的耐药性。临床意义葡萄球菌属在自然界分布很广。存在于空气、水、尘埃及皮肤上的葡萄球菌大多数无致病性。金黄色葡萄球菌主要引起局部组织的化脓性感染（疖、痈和创伤感染）、菌血症、心内膜炎等全身感染等，也可引起骨髓炎、化脓性关节炎、肺炎和深部脓肿等。腐生葡萄球菌引起尿道感染、前列腺炎、外伤和菌血症等。溶血葡萄球菌引起心内膜炎、菌血症、腹膜炎、尿道感染、外伤、骨折和关节炎等。MRSA的治疗：轻度感染可选用SMZ-TMP和喹诺酮类，严重全身感染选用万古霉素或其他糖肽类药物。鉴定流程元谋县人民医院检验科微生物室葡萄壬球菌属检验标准操作规程文件编号：生效日期：2011-11-01文件版本：第一版文件页码：3/3参考文献[1]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南.2008⑵周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006Mu