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文档简介
第八章电泳分离技术、电泳概念电泳:是指在电场作用下,带电颗粒向带相反电荷的电极作定向移动的现象称为电泳。=、聚丙烯酰胺凝胺电泳(一)、电泳介质丙烯酰胺(单体)十甲叉双丙烯酰胺(交联剂)催化剂三维网状结构的凝胶T=(a+b)/m×100%C=b/(a+b)×100%a:丙烯酰胺的质量(g)b:甲叉双丙烯酰胺的质量(gm:缓冲液的终体积(mL)T:两个单体的总百分浓度C:与总浓度有关的交联百分浓度凝胶的机械强度和孔径大小等由T和C两个参数决定。(二)、分类根据凝胶孔径和缓冲体系的不同:v连续电泳不连续电泳根据样品的处理方式不同:vSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳v常规(非变性)电泳(三)不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳加样样迁移方向1、不连续PAGE电泳:用浓缩胶(上层胶)和分离胶(下层胶)两种不同浓度,不同ρH的凝胶灌制凝胶板,通过电荷效应,浓缩效应和分子筛效应,达到蛋白质高分辨率的分离。浓缩胶3.5%凝胶浓度分离胶(Tris-HCl,pH6.8)12%凝胶浓度(Tris-HCl,pH8.8)电泳缓冲液(Tis-glycine(甘氨酸),pH8.3)不同的pH,氯离子和甘氨酸将会在电泳中发挥作用圣2、样品分离原理(1)样品的浓缩效应(2)凝胶的分子筛效应(3)电荷效应圣(1)样品的浓缩效应电泳介质的四个不连续性,使样品在电泳开始时,得以浓缩,然后再被分离。①、凝胶层的不连续性浓缩胶:大孔胶浓缩胶分离胶:小孔胶样品在大孔与小孔凝胶的界面分离胶处浓缩,区带变窄②缓冲离子成分的不连续性上电极缓冲液:(Trs+Gy)浓缩胶(Tris+cl,)分离胶:不电极缓冲液pH:(
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