第二章基因工程工具酶

第二章基因工程工具酶分类：限制性内切酶（RestrictionEndonuclease）RNaseA1.水解酶类核酸酶RNaseT1RNaseHDNaseⅠS1核酸外切酶（Exonuclease）

大肠杆菌DNA聚合酶（DNAPolⅠ)大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（KlenowFragment|）

2.DNA聚合酶类嗜热DNA聚合酶（Taq酶）DNA连接酶(Ligase)反转录酶（ReverseTranscriptase)

小牛肠碱性磷酸酶(CIP)3.修饰酶类细菌碱性磷酸酶(BAP)T4噬菌体多核苷酸激酶

（T4PhagePolynucleotideKinase)鼠源禽源（一）限制性核酸内切酶的发现（二）限制性核酸内切酶的分类（三）限制性核酸内切酶的命名（四）II型限制性核酸内切酶的基本特性（五）限制性核酸内切酶的消化反应条件一、限制性核酸内切酶由燃寄刻主帖控迁制铜的限掉制和修培饰现岭象椅-旁-篇-2难0普世位纪龙6阳0纠年尿代美，厌L庆i捕n驰n突和家A织r蓄b笼e骄r缠发刺现(B)蛋(膜K毅)大驻肠邀杆冰菌假B大串肠寨杆慈菌砖KE毕O胆P围=欠1E习O秤P垫=或1E何O盏P州=笼1溜0-4E之O煎P英=逆1关0-4E或O保P成待斑盛率e隔f裂f廉i候c录i婆e托n晌c谨y锈o叹f踢p普l修a瞧t细i冰n元g外外源屑D约N辛A自暮身漫D挣N死A（柳一骡）清核钉酸掏限尽制初性残核铁酸锐内主切睁酶块的床发记现限歪制和修点饰现割象限膊制郊—器修油饰灭的串酶磨学膨系软统(B)(B)酶监切折位芳点不宗被见修梢饰噬华菌蛛体肉D幕N趣A被载切备割酶缩慧切画位丑点被妹修总饰基菊因陪组瓜D项N便A不直被床切弊割E朝.庭c天o胶l侍iB版含斧有补E愤c懒o鸽B食核亩酸枕酶宏和条E逢c参o垂B估甲仍基客化态酶当吴λ推(刺k鸟)顾噬绳菌怠体武侵只染E称.裕c冰o耻l袍iB艘时彼，喇由仁于骡其絮D骆N狭A日中帮有摔E氧c婆o郑B姐核岔酸执酶覆特赢异彩识秃别询的污碱遥基境序气列膊，仆被卸降津解佣掉锣。枯而E口.据c吓o陷l磁iB遵的周D造N塔A免中课虽糠然废也算存洒在环这益种糊特偶异准序魂列征，掠但削可婶在贵E揭c变o揪B犹甲年基越化寸酶合的茫作在用救下盒，叶催打化款S温-拍腺萍苷犬甲子硫究氨扮酸早（铃S脂A东M详）钢将傻甲仪基眼转搏移么给俯限如制瓣酶惰识俩别寺序源列穗的杜特胃定郑碱笑基裳，躲使浪之雹甲飞基巴化蹦。挑E渠c污o姨B吧核向酸竞酶且不到能奖识疗别帜已限甲裕基铲化柿的赖序揭列爆。1项9此6敌2贪年贺瑞洒士询的事W数.崇A鱼r惠b答e火r肺（钻阿澡尔耗伯裙）胆提锤出康细垄菌沫的赵限制常修掌饰违系察统泪。颤1久9辫6独8定年清发沈现低Ⅰ捆型的内帐切雅酶都;1及9畅6忘8持年士美舱国症的耳H键.鱼O跟.惭S捕m州i湖t吊h戴发雁现当Ⅱ调型市内援切阻酶盐;1翅9痒7歼0方年唯美露国辩的魂O窜.躺N落a谦t舅h衬a族n纸s者（葛内如申症斯待）辨用表Ⅱ政型钞酶唉制锦备拘了省肿肆瘤斥基漫因叹;1勤9圾7怕8殃年笼三页人重共鼠获饼诺叛贝淹尔罗生贵理苏与蛛医餐学近奖秤。从缝此火，桂相侧关诊研群究婶展石开碎。顺目领前已耍纯逢化隶出3抛0俭0冬0种桌限锐制浅性墙内观切金酶减中，其稀中交有3案0见%是爷在N朴E绣B发包现艺的。概录念愧:限杜制辣性歪核他酸识内扁切匆酶（r储e狸s妙t雾r涉i贺c发t滔i午o兼n咬e耍n雀d漫o胡n无u糖c递l岩e桃a吼s蚂e）一紫类雨能瓶够耳识嘱别姨双但链拣D浇N粉A政分汽子斥中沙的谁某雁种辜特谎定拍核睬苷挥酸坦序夺列她，才并壶由督此饥切喊割镰D梯N职A姜双夜链舱结膊构马的纠核谷酸联内杠切街酶卷。票切转开腾的县是蜜3洒,抚5柴-熄磷好酸跑二浊酯畏键戒。（许二身）手限湿制狡性己核防酸剧内罢切巷酶捆的拌类订型接及伸其衡主殖要料特斯性特另性1预.置限线制点修跪饰遭活刊性2躁.璃内形切残酶爹的鞠蛋迫白质湖结填构3朵.踏限泡制先辅次助求因牌子4妹.岩切宏割甚位云点5榜.璃特坚异紫性炒切亏割6腰.把基扒因妥克嗓隆狭中I境型双座功第能州的需酶3响种升不单同搏亚意基A旱T芒P感、训M非g2尸+和贵S队-拔腺失苷含甲痰硫赠氨趟酸距狐特奴异甚性逝位洪点访5脱‘眯端勤至原少纳1杨0忠0烧0锈b裂p不贸是竟（虚随串机里）无台用I肝I增型限统制蒙酶弊和悼修哪饰贝酶演分列开单功一容成司分M降g2号+位会于败识渗别乡丰位炸点扒上是非选常高有碍用I通I阿I兔型双叫功槐能标酶2展种睛亚发基A蛛T策P圈、腥M总g2拼+和英S脑-迹腺悠苷狭甲晚硫裹氨好酸特氧异画性凝位绝点刚3丽‘醋端疑2充4砍-序2疗6呼b炭p由处是用凝处含不懂大（匹三叫）报限就制艺性岔核乖酸廊内技切暴酶飞的宗命赖名1胖、寄票主艺菌杂属届名刚的亮第箭一肆个它字威母信和芹种宇名庙的疼头票两郑个汉字命母炊组拦成泊3耀个逮斜昆体字究母历的学略世语冰表掀示南酶建来侵源抢的菜菌愤种授名直称睡，少如肌大抬肠迅杆客菌E拔s购c废h躁e财r萍i扇c考h鼠i飞ac朝o千l脚i表距示竞为E粮c咳o,志流珍感秋嗜溉血楚菌H据a龄e旨m货o银p金h释i稀l卡u关s歼i即n崭f的l塔u误e哗n高z稻a万e表各示器为H撤i贤n；2主、用我一股个叨正判体对字亚母糟表虎示单菌期株今的勾类尤型脊，州比亭如E致c所oR、H程i豆nd；3逼、如蓄果肿一谦种尸特锦殊殿的对寄每主竹菌怪株伶具码有喘几对个星不卸同绑的础限育制驳修拔饰梳体其系血，趟则用后罗孔马排数去字桨标牛出葛，陷比启如E俗c恨oRI、H而i却ndI谜I歪I。E俱c蒜o葵RⅠ（蛋酶柿名此称伴）尖:Es炕c当h边e肃r抢i踢c寇h邮i症aC州ol观iRn孩i崖sⅠ属俱名爱种日名脸株狭系缸编民号（翅四畜）侮I啦I嫁型告限浊制轮性堵核赤酸膊内用切房诚酶袄的边基班本旨特调点1尖、线识斜别蔬位标点际的玻特君异谦性每宵种自酶咽都糕有墨其腔特垫定岗的语D非N报A予识刑别位眼点代，厨通击常厦是器由顶4界～显8卷个屡核嚷苷零酸炭组求成蜘的熟特浊定详序见列枪（纹靶啊序袭列烤）秩。2仗、房诚识壮别卷序咱列劝的覆对恰称理性靶兰序等列鬼通薪常像具扬有钟双助重保旋凶转仇对罚称的椅结吴构吧，费即佛双腰链盒的次核沃苷剃酸窜顺揉序具呈贺回妥文歉结核构碎。3还、哄切猛割笑位龄点恳的揭规是范惭性交窜错砍切因或涝对姐称第切伶（樱可炕形赛成目粘性性汇末小端圆或打平华末期端尿的剧D耍N黑A辰分丽子调）横。能撇识懒别趴外苍源地D申N蜜A窜并谎将隐其犬水归解监的歪内爽切申核款酸仓酶圾，层是氧细随菌筒对艳外命源令D捉N铃A吨的苹防训御撕机腰制落。几鹊种廊I脾I午型停限红制轮性料核凑酸柄内省切汇酶钳的熄酶先切伪位恰点PstIProvindenciastuartii164

CTGCAGGACGTCHaemophilusinfluenzaeRd

与蛇I俭I肤型揉核嗓酸朴内垃切乏酶早有冈关浴的材几缝个昼概嚷念粘箭性付末糖端c扎o乖h揪e锡s仓i俭v优e所e会n厨d魔s是捡指D信N池A分稀子僻在您限碑制蹦酶钥的缴作土用椅之管下黄形屯成凝的诞具盗有意互蜘补码碱档基秘的闲单上链玩延披伸证末搞端昏结驾构舰，称它否们轧能堤够欧通轨过厉互余补秀碱似基付间辜的键配霸对蛋而虎重雄新音环趁化猾起愚来傲。平夸末顾端王B喉l务u询n布t跑e思n震d在钟识吴别薄序草列夺对挺称胜处烟同蜓时驴切情开D罚N任A分立子肯两奋条怨链扣，衔产靠生幕的创平跑齐妹末锻端忍结舍构需。爆则述不门易袋于妄重验新呢环角化晓。同轨裂庄酶沾i乡丰s首o孝s比c督h斤i童z耽o针m戴e渣r镜s能喜识帆别嫁和己切喘割左同禁样蝇的紧核差苷舒酸江靶我序指列钉的帝不使同扫来究源具的浑内演切乱酶头。吴不泪同幅同配裂咬酶般对带位罩点洗的嫁甲博基梳化喘敏惊感别性从有幅差功别球。同躁尾膨酶塌i惹s剃o舰c啦a妄u万d僵a禽m烫e塌r身s识竖别开的属靶娇序奥列舌不宾同怜，筒但拉能步产振生将相脊同可粘沃性侍末嫌端到的善一梢类懒限春制推性帝核舌酸如内滋切刺酶颗。市如B土a铁mH大I宰、B我c众lI宫、B狱g骆lI炭I蜻和X劈燕h洁oI是膨一序组西同点尾昂酶泉。平星齐刻末袭端带捞5锅’买－嫂P粮端柳的接黏组性椒末猪端带组3薯’笛－强O慕H流和城5胞’悠－香P吉端池的与平峡末件端例钞如H言p饶aⅡ那和M辉s喘pⅠ午是飞同弱裂稼酶猪，兰识煮别岂顺乏序织都磨是欠5效’顿…镜…蹄C晒|欧C扯G耽G棍…架…清3山’片3裂’功…嘱…奖G竞G执C妹|毁C舞…哈…神5概’如伍果准其勤中傍有绞5研’纽奉-眉甲笋基声胞土嘧删啶如，H灾p禽aⅡ嚷不下能祝够牲切加割件，墙M宇s阻p巧I娃能解切芬割战。同蕉裂激酶陡切馒割绝D酒N黄A允时逼，功产易生啊相苗同议的怕粘矮末旺端材，资故形被窃切撞割炕得崖D愚N蛇A认可污重赵组游并麦且咳重积组低后邮产葵生绕两逼种则情眼况礼A嫩.密B旁,瓜如贯图岁：M抛o拴b叶I应B渴a滨m迈H略I泻B疼g中l锅I街I5饮’狗…镜N单G嚷A响T座C键N纸…颤3跃’猪5两’轿N毒…爸G信G召A万T驾C筐C酷…霜N卧3咬’幸5座’宵N沾…层A陆G赚A框T毕C隐T衫…裙N焦3候’3咐’尽…耻N吊C关T荡A法G门N远…源5趟’熟3节’姐N叫…西C飘C蒜T惠A门G伪G狡…孟N极5样’卫3散’洒N吴…中T拴C材A心A修G吉A牌…台N症5德’5违’受…腊N捡G这A妄T犹C氏C堤…旦N遇3潮’怠5医’乓N拉…痛G拔G添A冲T昨C乡丰T松…鸽N饶3异’3主’刊…另N乡丰C啊T酿A出G跪G范…翅N冒5屑’贩3萌’控N授…贤C迈C私T搁A鸟G脂A事…创N时5部’5蔽’葬N黎…奶G驳A偿T循C若C悬…即N倘3伏’钻5邪’辨…眼N踢G疾C竟A槐T祸C倚T翻…澡N闭…脏3跑’C继T酿A榜G乌G魔…事N舒5甩’吼C逃G肿T求A超G程A册…磁N皇…揪5介’A移:盯可反被析M膛o母b培I皆识迷别断切仆割壳，租但卖不效被勿B府:件重步组症D幕N危A热,粘-狱不朗能佩被新上识述蝇酶经识偷别B蚊a仙m朽H嫩I揪识碑别精切帜割脉。沈与星切臣割攀。注屿意限坛制鄙性亭内羊切传酶卫对些外多源梁D间N中A西的披作获用即无绑种件属芳特绍一捷性牙：乏对舅不江同乒的渗外迁援拨D荒N斥A盒,丙只吃要映有剃酶做的椒识轨别抗顺唐序印即粘可篮切救割袋D归N贯A娃产登生吉相淹同柔的高粘旅末蚂端向或霜平范截区末油端献，木据得此烫可柔进篇行缴D肆N凤A荷的搂重无组亿。在爱A及情悼况严下租产船生堡的届重五组程体味只痛能恰被榜一轰种淘酶舌消僵化典，自减事少沫了掠可煮逆竭反内应文，怕提撇高馆了情重星组修率攀。阅转率化迟后炭还侦可及以弃用棉可箱消稀化近的绵那嫁种傻酶锻(许M玻o妇b购Ⅰ昆)灯进把行拦酶衡切灾鉴挨定弱。在暑B凡情乞况这下搜，场产耳生粒重绳组诵体兆。膨不洁能赛再用被剥两问种疲酶德识肆别平，态消就除影了钢可陶逆否反称应助，脏效维率过更俱高忧。筐但川转牵化些后及不拨能垄再爬用基这稼两惕种毯酶鸦鉴捎定预。疫通娃常抄选苍A条的法情茶况问。4医.不卵具做有如甲陵基筝化饥功基能I投I低型半限侵制赛性逝核挠酸碎内能切直酶施的带甲感基忽化瓜修酱饰梳作途用肾由遥相叠应嚼的劳甲乖基盛化免酶脾承线担灯。5虾.桐对层单俱链爷D沸N球A决的包切蛾割切根割隐效金率辩较喷低占。酶援活巾单棍位一尿个好限阿制帽酶近单范位（护U曾）指雀：在献理饶想溪的尝反买应帝条矛件霉（饱适牛宜图的俭缓你冲威液撕和邀反致应蓄温石度胖，玩通案常商为冒3饶7苏℃翠）脂下崇，要1左h逐内中茎完旧全狠降弄解版1雄嚷g甘扯D召N志A蔽所叼需睛要仁的灰酶坑量物。（孔五重）秘限纪制景性渔核泄酸税内奖切贼酶竿的唉消肺化阀反呜应酶脂切债反碰应楼的筑基州本穿步艰骤＋－电翠泳紫渡外疯分甚析3帝7恰℃良1草h加春反芹应避液C烤KMB苦u复f飘f朱e收r月(寺1筑0×)纷2作.猛0Ld尺d雪H2O约1彻6均.箭5LD益N倍A毁0潮.颂2划~棍1穴.锄0gE缴n倚z桌y占m泻e六1沟～竖2标UV凝o芳l锄u毙m忘e狼2耍0约.搏0L1陶.倚0隙k晕b1榴.归0逝k惹b0腔.疗4斗k密b0绑.刘5塘k骑b0蛾.眨6忌k蓬bC屋KMTT①反陕应体则系②微混别匀③廉最绑适偷温洞度既,伪酶然量侍,伐时邮间市,壶反咸应岗终征止④予电戏泳笋鉴定定螺结宗果在伯“掘非揪最币适蒸的起”考反估应犬条捉件伞下马,国有院些文核舞酸超内坦切政限沈制行酶歇识量别弄序莫列脊的米特拖异献性夹便乒会半发李生席“沉松愤动续”挡，奸从胶其俩“件正黎确窗”写识每别晨序宝列仅以很外村的辜其家它候位仔点贫切腾割顽D厘N芽A肥分蛙子夜，微这衫种甘现棕象偿叫返星抄号后活抬性扣，智用雅*巾表摔示醋。限拿制治性浅内灿切奋酶蠢的东第刃二懒活英力（夹S羡e催c烧o挖n阶d驱a文r倘y锅a顿c幸t绑i枕v拿i鸟t唯y宁，六又往称誉星包号禁活迟力在）指升改糊变栗了庭酶郊的吃反僵应呆条牢件熄，取使起酶湖原厌有柱的摧识矿别盏特榜异烟性素的小降淹低恋。例臭如仙：日E却c瞒o忌R诉I块的瘦典你型堪特您异伟性禾是绸核黎苷估酸表序适列姐G膜A愁A竖T买T耕C诊，睛当霞改稳变旨此节酶末的有反魔应蓄条燃件夹时篮，竞他昼的谢特款异阔性滑由毛原歪来米的何6虏核午苷鸭酸眠降劈燕低悦为足四章核倡苷粪酸宵A悔A线T驳T诉。星赢号臂活道力村的生产档生去可理为针酶窃提示供底新屑的挑序迫列疲特随异持性忍，献这扑些歇活酿性停在谎某舰些膊情帆况萄下明可来能运是屯有肥用菜的颤，湿但择是咸很极少钳导悉致漂第妄二昼识售别猫位悄点从的嗓完麦全别或奖同汗等脂的圣切厉割辽，贵因厘此消为歌了蹈避意免妖星塌活制力沙的惊出爸现黑，织所膨有东限私制刺性旗酶着切旨反贝应解均条应宁在稀标则准蹈条菊件属下蛋，耻通蜡常斜反编应籍条莲件掘通旋过反缓暗冲梅液昌控挖制殿。（献六嘱）刺影票响云限淋制烟性谁核烟酸职内伙切亲酶酿活套性乳的至因营素影绢响润酶简活存性姓的箭因喂素彩很敏多蛛，呢最绍重旋要搁的王有污：⑴酶阀纯纽奉度⑵D寺N怜A享的泊纯网度⑶D燃N花A疲的你甲仪基两化溜程锦度⑷酶纯切克反炕应桨的阿温昨度塔与德时访间⑸D现N吼A上的酸分盏子碎结箩构⑹限除制连性锯核刮酸繁内机切漂酶引的弃缓棵冲涛液（托1文）丑酶盘纯强度引坦起喊某陶些州酶虽活齿力骨变还化皆的艰因刺素辅较查多兽，俘包刑括妄甘贼油私的闭浓历度捷，婚离彻子弱的油浓敞度独，戴P冈H翻值亏，首有怪机宽溶底剂宁的赶存符在票，衰二策价夏阳初离胆子令过鸭高大的呼酶芳和提D稻N练A拳浓港度席的仁比泳例贸。（吨2定）签D涝N膏A贼纯唇度铂滑，去酚糟，查氯育仿途，印酒献精胖，触E圆D然T柏A抄，潜S敌D糊S刊，角盐卫离意子管等蕉均刊影挡响可酶狱活盾性莫。纯语度笋不次高靠，诞含自有肤蛋祥白焦，输特否别幕是催D觉N尿a给s驱e就加察入狠B崭u回f君f捆e很r结时吐因临有也M夸g2坦+，万而浓激慎活狱降丢解宇D瞒N工A毅样斯品涝，烛而限无罗特渔异炭带竹。解有决涛办栋法腰：扩误大帝反宜应片体则积址2稿0L轧—当5姓0L延贤长师酶兆作哈用泳时朝间面1剑h榴—片数稻小枯时增镰加铸酶宣用左量晌1偏u才—伶1扒0部u（仿3蝇）D到N吗A暴甲容基狱化俯程穷度甲恨基闯化顺程蜘度阿高弦不脸被热大先多爹数提限故制串性映内消切述酶耍切咸割泪，悼解造决旬办牛法智是少：选乖用同无控甲腹基疏化斜酶馆的墨突召变范菌朋株旱；使纹用脑对惑甲徐基睡化饥酶妇碱舟基苗无铺切奖割文能叨力历的叫酶罢（翻对庆哺窄乳约动贱物钩D勤N参A健）责。（娱4灵）连酶兽切惩反幅应搜的芹温念度上与往时怒间所管有时限秧制示性曲内玻切云酶陶均伸应普在发标唱准敬条迁件技下线进忆行称，汤大嚼多吵数聚最框适君反脚应贯温据度羞是醋3怀7段℃滑，健少吵数柄耐绿热琴T种a特q悄Ⅰ光是滚6眠5缩慧℃套；圾S费m港a拾Ⅰ搬是卷2铜5葵℃竹（馅3义0悔℃）。雨反扮应浅时讨间倚与斥酶伙量据有区关备。（认5仔）怕D亏N跟A浸分赠子玻的唉构准型不狱同但构爬型篮的少影鸭响律很哭大早：薯消张化件超感螺窝旋垦环鲜状秤D省N向A篇用粱的鹿酶禾量倒大肝于奴线谢性债D遍N狭A不桨同阶位谎点畏切则割柜能舌力慈不机同（亚6逐）芳限游制惭性涛核冶酸筋内楚切求酶翁的汪反幅应事缓搬冲迎液M保g炎2员+强，指T诞r准i帮s宗-殃H桑C涌l遭，贿N筐a荒C迎l员或居K探C扛lß犯-鹿巯斧基霉乙星醇运或孙二赔硫停苏令糖侵醇锄(拘D体T橡T疲)忠(贫防摩止推酶捕氧酒化骡,根以蹈保耐持达活询性挣)B破S敢A激（具牛镜血那清万白劫蛋兵白期）牵稳誉定云酶该蛋创白块。（亚七骨）其州它不水健解捆核树酸亿的毅酶1午.溜水滋解散R肉N寒A贪的亮核肠酸殖酶晓(鹅R疑n砌a绑s瞒e轿)洲:氏种能类辱很砖多其介丽绍腿五川种酶哨名辞称吐来关源心最碗适山P拌H享作滥用诊特虚点牵反铁应顷式正应拢用R息N菜a绘s踢e气A椅胰结脏欺7饮.留9困切吴嘧属啶选产剩生有A敏p貌U赤p棕C额p汇N偏p危R渐N毒A吹测亭序3反’粪p怖嘧递啶狮核星苷酸彻或枕以傅其萍结尖A柔p温U退p舱+与C剃p霉+半N重p尾滥的芒寡暖核椅苷窜酸R北N检a研s迁e问T1米和曲割霉洗4趋.腿5弄切盾G源产饶生砍3借’品G耀p肢G自p彩G获p宵A坛p彼C渣p作G尝p拖同基上或民以侍其抄为申结修尾的耕寡舅核闸苷更酸肯G被p塞+剃G眨p卫+筹A释p祖C捡p尿G惯pR梯N拣a聋s驰e寒U2黑衰曲钱霉裤4陕.维5喜切畜A黑产瘦生殖3仁‘族A灯P躬G额p冈A版p右C艺p违A昼p竹A闪p炼同腾上或响以食其抹结洞尾测的寡给核处苷胸酸醋片出段究G虾p图A翅p弃+侵C阀p乎A王p到+悄A卷pR经N万a尖s彩e财p互h酷y归头探绒地孢御菌阵不梳切花C台产诉生炉3昆’偷A拌p闯,望G条p记A吵p关C矛p裕U翅p追G茂p席同青上3颠’想G寒p笔,苗3鄙’论U陵p闪或辜以霉其为怀结吼尾役片严段俱G柳p昆A光p蜓C砖p岁U椅p惩G宪pR导N溜a弦s湾e姻H板大舒肠友杆足菌槐水鉴解炒D舱N众A康-凤R捐N达A才杂游交分膜子尖中肺的句R饱N某A2矛核扬酸律酶怀S来问自取稻新谷诞曲寸霉高煎度嘉特疼异凉性固于董单稼链练核续酸菜的梢内枝切裤酶露：应可衫催誉化皇单间链前R擦N粥A钳或溪D搜N索A案，毙降草解巷成晋5抄’副单严核如苷观酸饱。颈同叉时叫也坑可煌作夸用彩于纯双蹈链愤核测酸助分估子刚的远单着链桐区若（乌小努到竟一零个插碱矛基牧）凝。作腾用希：测烤定裹杂惰交润分稍子盼（贸D链N芽A避-愉D而N锅A跨)集或粪(很R且N壁A蓄-惨D牲N纽奉A舒)旧的垫杂任交货程酒度便，校即腊使鲁是偿一仔对占碱掩基示没窝杂唯交鹊也挪能及检男测秘到贝。c辛D隔N晒A脚合爆成唤时戒去荡掉恶第禾一豪连务与歼第绢二姻连锈的恒发川夹宪结圈构测爹定漫D私N滥A塘上缩慧内战含塘子凡的宅位云置（一虑）D禽N齐A逃连泡接杂酶辛的衫概层念脏与肚作缎用航机锐制（二普）连处接尼酶失种因类伯及焦特艇性潜的牢比省较（三绕）D版N坦A艳连勉接悲酶伶作葡用目的鉴特左点（四榴）厕D钉N东A览连火接爽酶浪的壤反晃应返条道件（五谈）影驻响讨连井接混反亦应垦的寺因慌素谜D值N辜A性连竭接贯的粉策羞略（六攻）望T虎4轻D就N慢A艺连巷接卖酶搬对阻目斑的婶D淡N牵A孩片咐段永和载莫体劈燕连称接持的吨一逐般挑方辆案二咳、荒D贿N籍A挠连勤接亩酶耕及贯其封应碌用D蹲N照A澡重处组姿的川核城心铸技痒术合：毕D菠N义A斩片责段许之演间灵的丑体距外群连秃接—滥—雅连炊接我酶主。（夏一筹）去D绍N哑A猎连机接锄酶欧的洪概扁念姻与魔作近用亚机贷制环警形贡D钢N搂A戴分孔子衔的架发废现断使移科他学蝴家嗽相孩信得一久定犹有房诚一简种宣能赌连画接共这忘种再切满口挠的果酶悦存非在护。首尾个造D振N捆A撒连两接迷酶泳(征l源i愁g援a额s顾e须)跪——1辜9贪6拔7膝年弦，大践肠叶杆趣菌惰D牲N村A兴连助接迫酶，是埋大槽肠净杆毛菌蹈基疲因旬编恰码。1谊9陕7腊0映年冷，缺发庸现吵了T些4课D柿N读A释连狸接猴酶，由堪大悬肠咬杆傲菌黎T剩4者噬屠菌知体锋基栋因邀编缠码伯的狂。概辟念砌：糟D津N搞A网连隆接姨酶脏（源L爸i边g疼a世s但e肝）能蛙够孔催屡化坚两纹条顿D圆N发A倍链恭之熊间奶形辫成管磷逝酸费二价酯拍键姐的骨酶课。D寄N疲A板连谎接袋酶精的乎催系化选反暑应D象N突A孕l要i堂g串a品s甩e披+收N仓A仰D拴+锤/越A逗T方P↓酶睛-查A辩M句P哑复遍合造物↓雷+薄D侧N堵AA宇M殖P获-夺D级N蜜A↓相虾邻俘3欺’脸-红O立H束对侨活皇化稠的镰磷毁原答子饶发电生痕亲拢核妥攻睁击↓座→坡A耐M旨P3烘’宗,猴5词’奥-察磷另酸烧二影酯蹦键D盛N订A归连塑接蒜酶浓连劣接雹的级作经用嫩机烛制（谣二贯）所连昏接统酶扣种鼠类川及惊特包性相的拥比驾较最霸常泰用（路三理）挖D乳N屑A沫连裳接研酶鼠作价用旗的水特漠点A葱.连或接争的两碎条称链必洋须覆分伯别帅具茫有伍自鼻由撑3摄’阵-怀O蓬H管和鲜5它’疑-腥P等，焦而规且背这燃两射个云基魔团富彼会此相牺邻；B胳.他在至羟酸基表和趟磷独酸百基仓团溪间炭形族成宋磷肃酸忙二涝酯斑键郑是淡一鬼种昂耗州能召过著程滑。E拼.雕c草o叨l瞒iD集N每A帅连贞接凉酶－给连众接诸具祝互域补锋碱贪基孤黏季性叉末范端好(狂最摇初占研哗究着表箱明祖）阵，瓶现怕在淋研乎究猜可证连捡接邻平可末处端钞；选需萍N迫A究D+辅沸助尤因仰子洲，雕活妻性蠢低能，座不吐常愧用汉。T锻4拴D喂N雄A贞连雕接形酶－党连挠接构具免互少补玩碱西基届黏乏性酬末链端受和娇平砖末询端崖，需负A博T蚂P及辅勇助份因仗子义，撇活逢性金高怖，诱常停用竭。是糠双疗链瓶－因秩此椒不秒能淋将璃两介条此单晴链柴连概接陪起袄来束或与使兽单摊链鹅环陕化寻起谁来怒。O隐H拳P悠×叼×是典相犬邻周的甩－因和此光不末能健封陵闭尊g今a笋p渗，下只持能引封穷闭饺n耀i缠c杯k雨.g毛a话p扫N普ON妙i休c政k响O占K（闹四制）诊T摊4坐D庙N冶A饥连肝接毫酶修连袍接捏反钞应馆的何条拥件连势接扎酶巴反旬应渗体恭系体系T载体粘末端平末端10×Buffer1μL1/2μL1/2μLvector50ng3-30fmol15-60fmolInsertfragment100ng9-90fmol45-180fmolLigase0.5μL0.5/1μL0.5/1μLAddddH2Otototal10μL10/20μL10/20μL反应温度4℃/16℃4-8℃/RT15-20℃反应时间1h-过夜4h-过夜/3h4h-过夜酶的灭活75℃15min连测接泉液荒灭驱活晨后减最稳好毒立千即蚁转概化北或寻储位存琴于况4药-谦8鼻℃体，游时另间抢不雹要轻太模长暂，污会槐降窄低自转娘化寨率溪。D疾N朽A半末奔端纠的她浓氏度较项高粪浓非度鱼的自D废N棕A哗，沙利宏于旬分茫子勺间珍连椒接绕，旨形胡成写线众性采二辉聚荒体粉或落多卷聚评体血分铜子怎。温枕度鱼（枕通票常周在免4春-饼1任6慌℃案）A过T刘P窗的啦浓蕉度(1闭0或μ差m姑o装l餐／散L词—催1m怪o隆l／虾L)连总接纽奉酶钳浓德度猛（一么般馋平晶末途端朗大勿约劫需再1直～库2亮U堆，源粘告末鹿端龄仅陈需渡0数.筹1挪U）反穷应报时护间喂（阅通说常魔连叔接践过泪夜纪）插邻入鸡片馒段尿和呀载链体虏片纸段顶的炼摩扒尔逃比强（1∶1～5∶1）（梢五炕）影瞒响恳连涛接五反惹应推的烈因感素（数六谷）私T停4仆D阅N抢A昏连蚀接览酶剧对斗目店的鸽D滤N诱A茄片勇段钓和吼载陪体勿连立接逝的棋一遗般近方妄案1手．煌连肢接那反难应准一番般被在俩灭朱菌匹的焦0坡.暖2阶-傍0涛.蒜5坝m尾l登离匹心摘管庸中洲进窄行掌。2弓．窜1抵0柿μ体l持体朗积拆反课应染体倾系默中京：牌取闲载倦体汇5版0怎-使1透0浴0分n爱g产，盘加遥入离一垒定朴比直例顾的导外鸭源太D仔N易A快分闹子霞（盛一晃般事线贡性每载忆体扩D口N挑A拐分艰子准与段外应源爪D呢N喷A梦分冷子派摩诱尔五数维为宫1级∶五1葵～敞5雅∶农1返）等，薄补律足恳d弓d现H尊2使O亚至晕8愁μ收l步。3婚．虾轻堡轻柔混晚匀剑，匪稍役加缩慧离争心沃，吸5想6绕℃坦水焰浴某5决m桂i栗n麻后狂，冒迅充速梳转桑入白冰污浴伟。4服．溜加促入并含微A凯T灾P态的眠1敞0魔×遗B说u炉f仪f恰e材r基1扣μ忠l幅，野T裂4舍D冤N乖A啄连元接骗酶蹈合明适伞单沾位旧，咽用哈d虫d判H务2铃O染补乞至钉1据0泥μ俩l以，生稍摘加主离胶心雨，诉在五适驱当掩温加度动（饺一阀般润1免4科-租1持6阔℃店）是连蜡接铁8夜-撑1础4狠h释r喷。粘廊性芹末站端劳D宗N伍A随片岔段科的换连岩接梅－档D伏N碍A尊连拴接架酶跨连牲接情法N剥i弹c何kN做i霞c百k平丈末良端怖D闹N展A侍片速段椒的灵连笼接奏－爹末昆端个同鸽聚忽物漏加宣尾献法3览’3址’5饥’5啊’3鹊’3车’5五’5编’末端核苷酸转移酶+dATP+dTTP3’3’5’5’3’3’5’5’AAAAATTTTD滴N老A皆聚猪合蜓酶和T莫4径D肆N拾A芬连减接妹酶平切末徐端瞒D苍N胸A遍片灾段器的禁连练接俯－达衔孔接仪物乌连沃接络法衔恭接界物也(猫l事i隆n廊k炸e肃r铸)缠，挣也说叫冷接激头，是灵有故人武工谁化期学挠合计成劳的剖一蚀段绞1贤0载-筒1掩2锣个苹核盏苷柔酸缘瑞组折成平，扣具货有爸有事1夺个途或怨几钟个世限承制翻性收酶瓶切线位念点蚂的陷平痒末奏端抹的井双新链哪寡石核士苷俩酸坚短矮片杀段上。G为G旬A司T仓C篮CC伏C忆T悦A浪G府G+B呜a瞧m刻H赤I贞切绩割G栋A厘T都C惯CG连朵接润酶垫＋亭经桨B甚a确m华H距I晓切涉割坝的庸p捏B璃R叔3俩2孟2GC倡C术T瘦A哈GB劳a场mH摧I豆衔邪接贺物d秃s馅D笼N雪AG才G寒A蒜T架C旋CC棉C秒T弹A俊G问GG现G济A彼T耀C滨CC拥C蓬T衬A切G予G连脆接遭酶重饲组阶D天N修A吼分幼子G春A受T慌C喜CGGC突C呢T仪A庸G如润何贺避运免坟单廊酶后切爹后薯产漆生双的移相武同够的株粘您末管端微或种平钞末格端俊的译自泼身印环里化朱？（孕一镜）桐大智肠循杆交菌润D透N妖A芝聚尤合睛酶池I（校二尚）兔K拣l调e纹n菌o单w猫片播段教酶（缎三对）锋T跪4慢D旅N象A括聚姿合喷酶（信四数）潜逆示转控录明酶裳（饶反冒转富录沟酶裳）三省、性D拖N知A呼聚赵合液酶婶及金其焰应政用（渗一刘）大堵肠锄杆贺菌朵D能N钢A倡聚丙合王酶晴I（E啦.肺C箱o径l穿iD音N释A浮p戒o膝l荒I择）是代K柜o灿r诱n辨b迷e仿r铜g脊A树.纯1闷9聚5姨6社年神首碗先姐从赠大屡肠埋杆所菌E绒。母C雕o厘l性i细浴胞炮中耀分叙离端出撕来纳的破。惯它初是斤一港种基多本功腿能啄性望的钳酶子，恩包滨括3趋种值不歉同孔的押酶隙活增力移：5初′宣-狭3跌′既聚绣合尚酶爬活鸭性（卡模录板屯，滨带谅3素′尚－胸O肚H缩慧游炎离映基归团驾的作引提物朵、虑4杰d芦N示T倍P亚s至、M悠g2张+）双摘链姜特辩异穿性股的绢5海'隶→挂3籍'香核驶酸失外越切步酶脂活拥性3值'歼→雅5骑'阿核销酸务外多切揭酶誉活修性易。从化游清离愈的棍双境链背或狐单揪链假D坛N当A腿的蛙3尘′封端益降露解你。筹不喷过梢对君于峡双啄链鞠的浮降缓解舞可饼被描5挨′壤-失3秘′猪的伙多钳聚捏活包性若所杨抑书制跃。喉主傻要悄是租校拿正暖作脏用由。C乖C酒GG怖G侧C挡T疫A东T辣C型G孤G版ACCGGGCTATCGGAPolI+Mg2+＋4dNTPsATAGC蹄C爆TC魔C鸭G肺A镇T申A便G距C佳C笼TG抢G芽C拖T蔬A道T羊C帜G吉G鸭AC询C准G这A嚼T建A才G浓C坏C错TG桑G唇C仇T月ACCGATAGCCTGGCTATCGGAPolI+Mg2+＋4dNTPsCCGATAGCCTGGCTAPolI+Mg2+T大越肠窄杆破菌汤D古N奶A粥聚言合违酶昏I桨的挽三哭种泊用所途A彼.栋利敬用强缺嚷口狡转冷移短法浸制坐备旋高蕉比散活耕度伪的种D悼N刑A斯探脑针利型用颤其欺5姑′→3那′绞的案外辅切张酶厕活红性选及亩其熄聚迈合耍酶侄活罩性根。B沟.鼓用康于营D奏N却A剑连魄接览前核的鸣大够缺久口缸填铁充利斜用映5′→3砌′娃的将聚云合窑酶仿活字性胀。C欧.但用顽于般D逝N翁A糕的秃序让列贡分姨析利享用猾5判′→3质′免的木聚觉合竖酶碌活睬性鸽。大掠肠妄杆秘菌直聚功合计酶翻I浊的呼应品用形示呀例缺景口胆平镰移灵法贤制森备职探伯针P自o怒l翼I鉴+底M纤g2擦++［炎α果－3瞎2P］d籍N篮T害P扛s（匹二损）K挖l蛙e矮n槽o病w器片码段纯酶K蜂l早e杏n朋o化w拔片称段是雾大抄肠惭杆匀菌吧聚胜合济酶坏I碧全腰酶先经亮枯隙草垫杆柜菌盏蛋涌白浩酶素处监理悄后脱产哀生被的滑大饼片烦段吵酶组分棵子苦，机分班子告量与为劝7协6用K澡D蛾。酶暖催群活照性赖：⑴枕5帮’护→呢3劲’捞的也聚协合植酶染活监性⑵备3’→愤5靠’稿的斥核版酸应外牙切混酶序活危性C碗C得G牺A谊T铸A汉G议C膨C岸TG常G誉C翁T栋ACCGATAGCCTGGCTAKlenow+Mg2+K详l占e星n世o壳w他片常段宋的球主竖要火用起途非（利想用呆5时’冶→弹3延’丢的列聚希合漠酶别活五性珍）⑴择修讯补烧限邪制楼性针酶樱消庸化知D疑N锦A苗形蚊成骑的蓬3插′亲隐常蔽耽末芒端⑵凝标梢记涌D孩N静A勒片斜段套的厨末队端底葵物掏用注［源α料－3主2P同］穷－任d吼N屡T阵P杯s⑶指c尺D贵N桑A勺克趁隆灭中简第颜二话链弱c觉D丝式N粒A郊的沉合歉成⑷蔬D渐N准A财序船列红的蝇测肉定（灰三姜）T4D肉N嫂A浑聚赚合客酶T4D陕N蚁A档聚袍合龙酶晋是从稠T蚊4掀噬威菌订体霜感剂染挡了摔的丸大求肠交杆辈菌扛中时分别离究出承来团的北，酶龄催滔活兴性锐：⑴雾5企′害→猛3疗′草的宣聚腥合功酶槐活莲性⑵芽3扯′演→裤5逃′争的掏核构酸缓外辣切摆酶隙活预性昏。其跑外抹切球酶芝活井性轧要论比被大情肠架杆笔菌恋聚同合氏酶恶I鸦的境活撑性浊高治2用0需0肺倍饿。比K碌l含e路n惭o负w耕片舅段好酶强1增0驼0～1净,斑0底0释0倍尊。因曾此负，知可敢以承综决合刺利浴用锣这叛两虚种滩活稀性避进裕行取歌代应合径成反隔应虹：如睛果出反认应陆体卵系像中拿仅敌存绿在得一婶种璃d姥N蹦T蜘P垂或兵没物有士底棵物给时狠，涛这闭时澡T阿4等D称N苍A肾聚灰合秩酶涨就柜会寺表锋现声出归3鸡′否→支5仆′授外著切委酶绞活社力罚，冲从草双狡链张D取N除A购的帖3要′盟开者始额降业解门，肺直性到速露吸出利底坟物愚d母N吓T产P劝相绸同婚的帝碱然基稿。稍然建后亿就若在挎此联位富置渣发汽生写合慰成屠和肯取到代敢反杰应仰。C且G婚T肚C肉G县CG拉C啦A晒G质C工GC喂GT劈燕C消G匙CG巾C脂A刻G爹C崖Gd建T桃T划PM忌g+铸+C如G各TG桥C均A算G齐C车Gα禁－3泥2P－莫d宿N淹T右P毁sM危g+锈+T窗4杀D身N扛A屑聚纽奉合著酶吨的培用车途1泪、遍利纲用易取宅代嘱合扭成侨反本应漆制伶备母探火针2疗、担标绕记希具览有斧平催末侮端可的萍或及具罩有返3听’蔬－皇隐镇蔽斤末未端联的趁D苍N火A蛋片菌段利六用返较蜓强哲的鸦3属′州→谨5科′陷外群切踏酶寒活谷性朱和乞5容′罚→辉3印′野聚桨合摄活毅性3饮、币用话于怖D湖N笛A片序湾列闭分泡析事—筒—勺双炒脱似氧构终倚止表法漫对饲长季片毙段屋D济N择A央进糕行菊测惧序南的泳理享想关用峡酶闲。（债四戒）逆毛转记录角酶野—盾R破e惭v筐e目r虏s国e爪t包r封a担n催s翠c近r炒i萝p必t竖a冠s杆e逆南转差录栽酶是坐一滋种害依誉赖凝R潮N芳A纷的藏D笛N唐A曲聚疑合掘酶目。1责9肃7脾0写年叔H柳.瓶M许.罚T筐e彼m准i照n僵（述美敏）希和卖D悼.盏B易a音l猪t更i们m江o钻r伐e飘(视美镜)健同望时包分琴别盒从常禽卫成检髓李细页胞偶瘤曾病幼毒证和乱鼠嫌白浸血筛病抹病冈毒抱中援发途现求了敞A萌M破V卫R似T缎和钩M歼o甘-滋M敢L塑V惹R好T秧,弓1吧9拳7庭5贯年脊二掘人秩共慢获滑诺床贝横尔奔生脊理贫—浩医嫂学边奖赖。目酒前沉两迎个寒酶步已欺经障商魄品希化庭生旗产扔。功酬能士：多叙功竖能敞酶毯，毕主钟要取有刃三最种惰酶软活策性堵：◆券依宴赖枣于蛇R液N拌A句的寨D夕N忧A糖聚瓜合贵酶咏功颈能江。◆袭R蚁N繁a竖s胶e朝H秆功献能佣：藏水寒解顾D贡N锻A园-多R厨N奶A旧杂网交富分贺子中罩的勒R售N督A寸链俗。◆霞依季赖内于瞧D例N领A属的测D勺N纪A容聚符合磨酶联功绣能蠢。A或M翻V社-咬R专T应与忆M悼o粘-鸭R愈T停在视结简构爸、专作沈用竖特馋点便上勺不脱完灵全待相宗同见，浮在滥c阁D燥N