色谱柱选择与维护

色谱柱选择与维护第1页，课件共68页，创作于2023年2月

色谱柱的选择与维护公司简介如何选择色谱柱A、固定相的选择B、PH的选择如何维护色谱柱广州菲罗门科学仪器有限公司第2页，课件共68页，创作于2023年2月中国全权总代理广州菲罗门科学仪器有限公司第3页，课件共68页，创作于2023年2月广州菲罗门科学仪器有限公司

我们的宗旨:以最真诚和迅速的态度替用户提供优质服务,解决分析的问题和需要第4页，课件共68页，创作于2023年2月1982成立于美国加州提供一系列非常完整的色谱柱极少数专门提供色谱耗材公司-液相和气相免费提供超过10000应用谱图免费提供技术支持免费提供技术资料第5页，课件共68页，创作于2023年2月第6页，课件共68页，创作于2023年2月2004LabvisionHPLCColumnReport2004年一月到六月Labvision调查美国1200实验室结果使用柱子数量的比例Phenomenex 25%W 22.5%A 7.7%S 7.6%其他5%以下第7页，课件共68页，创作于2023年2月如何选择适当的色谱柱第8页，课件共68页，创作于2023年2月理想的柱子可以适用于分析所有的化合物永远不会坏理想分离度第9页，课件共68页，创作于2023年2月决定峰分离度的三个要素峰保留时间选择性(出峰的顺序)柱效第10页，课件共68页，创作于2023年2月如何得到最理想的分析结果流动相,被分析物,和固定相三者之间的作用影响峰保留时间和峰分离性.峰保留时间短一般峰型较好,但分离可能不理想.所以为了调节最理想的分析结果,可以改变下列的一项或数项条件:流动相固定相pH温度

第11页，课件共68页，创作于2023年2月固定相的选择

疏水性的选择极性的选择苯基的选择

第12页，课件共68页，创作于2023年2月固定相疏水性考虑的要素

键合相的种类(C18,C8,Phenyl,etc)表面积键合相的键合率第13页，课件共68页，创作于2023年2月Luna™C18(2)–月神品质可靠,世界畅销的C18柱重复性高–可以同时提供3个不同的批次的柱子第14页，课件共68页，创作于2023年2月Luna™C18(2)GinsengRootColumn: Luna5µmC18/ODS(2)Dimensions:150x4.6mmIDElutionType:GradientEluentA: Acetonitrile/water(15:85)EluentB: Acetonitrile/water(80:20)

FlowRate:1.5mL/minTemperature:25°CDetection: UV-VisAbs.–VariableWave.@205nmAppID1125第15页，课件共68页，创作于2023年2月Luna™C8(2)&C5

减少疏水性化合物的保留时间 减少分析的时间第16页，课件共68页，创作于2023年2月Synergi™Max-RP

疏水性和C18柱类似–但这是一支C12柱 提供比C18柱更尖的柱峰,尤其是分析碱性化合物第17页，课件共68页，创作于2023年2月Synergi™Max-RPBasicDrugsatNeutralpH 第18页，课件共68页，创作于2023年2月疏水性的比较C18phasesC8phase300ÅC18phase第19页，课件共68页，创作于2023年2月极性选择性的考虑首先考虑固定相的极性封尾,封端基团分析物的极性官能基

之间的作用第20页，课件共68页，创作于2023年2月极性选择性如何增加极性的选择性

极性基团封端极性基团镶嵌苯基第21页，课件共68页，创作于2023年2月极性选择性Columns: Luna™5mC18(2) YMC-Pack™5mProC18

Synergi™4mPolar-RP®(Ether-linkedPhenyl)

150x4.6mmMobilephase: 75:25Methanol:waterFlowrate: 1mL/minComponents: 1.Estrone 2.Estradiol第22页，课件共68页，创作于2023年2月极性选择性Luna™C18(2)Synergi™Polar-RP®YMC-Pack™ProC181+21+212第23页，课件共68页，创作于2023年2月SynergiMax-RP-C12SynergiHydro-RP-C18SynergiFusion-RP–C18SynergiPolar-RP–PhenylSynergi™第24页，课件共68页，创作于2023年2月SilicaAdvantageBalancingEfficiency&BackpressureLinearVelocity(mm/sec)PlateHeight(H)5µ4µ3µFlowRate(mL/min)PressureDrop(Bar)higherefficiencieslowerbackpressuresSynergi™第25页，课件共68页，创作于2023年2月Synergi™第26页，课件共68页，创作于2023年2月Synergi™Max-RP与C18柱性能类似的C12柱第27页，课件共68页，创作于2023年2月Synergi™Polar-RP®保留极性和苯基化合物100%水溶液稳定增加极性的选择性第28页，课件共68页，创作于2023年2月Synergi™Hydro-RP

疏水性非常强..

极性封端100%水溶性稳定增进极性的选择性第29页，课件共68页，创作于2023年2月SynergiHydro-RPVS.Luna®C18(2)Synergi™Hydro-RP第30页，课件共68页，创作于2023年2月

SynergiHydro-RPSynergiMax-RPMobilePhase: A:20mMKH2PO4,pH4.6 B:AcetonitrileGradient: A/B(95:5)toA/B(65:35)in15minFlowrate: 1.5mL/minSample: 1.Morphine 2.Hydromorphone 3.Codeine 4.Nalorphine 5.OxycodoneSynergi™Hydro-RP第31页，课件共68页，创作于2023年2月Synergi™Fusion-RP

增加极性的选择性同时减少疏水性的分析时间

在水溶液中100%稳定在LC-MS下面基本无流失第32页，课件共68页，创作于2023年2月min02468101214mAU0100200300400500VWD1A,Wavelength=210nm(S:\HPCHEM\1\DATA\SW1003\TEST0034.D)min02468101214mAU050100150200250300350VWD1A,Wavelength=210nm(S:\HPCHEM\1\DATA\SW1003\FUSI0046.D)RunningConditionsMobilephase:75:2520mMPotassiumphosphatepH2.5:AcetonitrileFlowrate: 1.5ml/minTemperature:AmbientDetection: 210nmInjection: 1.Maleicacid 2.Chlorpheniramine 3.Triprolidine 4.Diphenhydramine Synergi

Fusion-RP480Å一般的C18柱极性增大疏水性减少第33页，课件共68页，创作于2023年2月SynergiFusion-RPAvgsymm:0.91SynergiMax-RPAvgsymm:0.77LunaC18(2)Avgsymm:0.82RunningConditionsMobilephase:A:25mMTrispH9B:ACNGradient: 40%-70%Bin15minutesFlowrate: 1.0ml/minDetection: 230nmComponents: 1.Scopolamine,LogP= 2.Lidocaine,LogP=2.44 3.Noscapine,LogP=1.97 第34页，课件共68页，创作于2023年2月苯基的选择性影响被分析物和固定相之间产生的作用 Luna™Phenyl-Hexyl使用甲醇可以增加作用效果第35页，课件共68页，创作于2023年2月Luna™Phenyl-Hexyl具有疏水性和苯基双重的选择性 重复性高和稳定的苯基固定相第36页，课件共68页，创作于2023年2月Luna™Phenyl-HexylGreenTea(绿茶)Column:Luna™5uPhenyl-HexylDimensions:250x4.6mmMobilePhaseA:0.2%AceticacidinWater/Acetonitrile(91:9)B:Water/Acetonitrile(20:80)Gradient:100%Atot=25min,(68:32)t=25mintot=35min,hold100%Bfor10min.FlowRate:1ml/minTemperature:350CAppID14436第37页，课件共68页，创作于2023年2月苯基的影响Columns: Luna™5mC18(2)150x4.6mm Luna™5mPhenyl-Hexyl150x4.6mm Synergi™4mmPolar-RP150x4.6mmMobilephase: 50:50Acetonitrile:20mMPotassiumphosphate pH2.5Flowrate: 1.0mL/minComponents: Acidic,aromaticcompounds 1.Indoprofen 2.Ethylparaben 3.Naproxen 4.Diflunisal 5.Indomethacin 6.Ibuprofen第38页，课件共68页，创作于2023年2月C18(2)Phenyl-HexylPolar-RP苯基的影响第39页，课件共68页，创作于2023年2月pH的影响当选择流动相的pH时,我们必需考虑到pH对分析物和柱子两者的影响第40页，课件共68页，创作于2023年2月pH对柱子的影响即使键合完美,封端完好,硅胶表面还是会存在Si-O-H的微酸游离基pKa~3.5如果流动相的pH是4以上,此Si-O-H的游离基会脱氢,成为带负电的Si-O-(这会造成和分析物之间的极性反应,而造成峰拖尾)如果流动相的pH是8(或10)以上,硅胶会被破坏,造成柱子损害第41页，课件共68页，创作于2023年2月pH对分析物的影响基本上,反相柱的峰保留时间长短,主要归因于疏水性的非极性反应.所以要增长峰保留时间,必需选择流动相的pH能够让分析物保持中性对酸性分析物(pKa~3-6),基本选择pH在pKa以下对碱性分析物(pKa~9-11),基本选择pH在pKa以上第42页，课件共68页，创作于2023年2月对碱性分析物的分析建议多数硅胶柱没法于高pH条件下稳定,所以一般分析碱性化合物时,会选择于pH~1.5-3下进行分析.在此pH条件下,硅胶表面的游离Si-O-H会保持中性,减少离子间的二极反应,因而减少峰拖尾,峰型较好但是在低pH条件下,碱性化合物的极性增加,疏水性减少,如果要增加峰保留时间,流动相的有机溶剂比率必需减少第43页，课件共68页，创作于2023年2月对碱性分析物的分析建议在高pH条件下,碱性化合物可以保持中性,疏水性因而增加,但是如果峰保留时间太长,可以将流动相的有机溶剂比率增加,以缩短保留时间.增加选择分析条件的弹性流动相的有机溶剂比率增加,以缩短保留时间外,并可以增进峰型(尖)但是问题是:如何在高pH(8以上)条件下分析?第44页，课件共68页，创作于2023年2月高pH对碱性分析物的分析选择使用高分子柱使用最新技术突破的

双子星柱(GEMINI)第45页，课件共68页，创作于2023年2月Gemini™C18–双子星柱第46页，课件共68页，创作于2023年2月Gemini™C18–双子星柱在pH1-12范围内很稳定适用于酸,中,碱性化合物,特别是分析中,碱性化合物很理想可以更有弹性的调节pH以得到合适的分析条件第47页，课件共68页，创作于2023年2月ParticleTechnologyPolymerSilicaTwin第48页，课件共68页，创作于2023年2月Gemini™C18第49页，课件共68页，创作于2023年2月流动相pH的影响pH1–12Stability第50页，课件共68页，创作于2023年2月Gemini™

C18第51页，课件共68页，创作于2023年2月pKa第52页，课件共68页，创作于2023年2月pKa第53页，课件共68页，创作于2023年2月总结

将固定相和被分析物之间的疏水性,极性,和苯基关系密切考虑以选择适当的柱子和分析pH范围第54页，课件共68页，创作于2023年2月C18phasePhenylphase固定相的影响第55页，课件共68页，创作于2023年2月HydrophobicityRankingPhaseDescription&ColumnFingerprintSorbentCharacteristics&ApplicationUse选择柱子的绝佳参考资料第56页，课件共68页，创作于2023年2月方法开发的绝佳参考资料第57页，课件共68页，创作于2023年2月如何保护柱子和延长柱子的壽命使用保护柱柱子使用完后,立刻冲洗样品前处理-过滤,固态萃取尽可能每一种分析方法使用一支专门柱第58页，课件共68页，创作于2023年2月5%原理–C18柱的基本冲洗方法使用柱体积10倍的以下溶液冲洗,以0.1-0.2ml/min流速95/5=水:乙晴5/95=水:乙晴梯度冲洗-于分析结束后由5%乙晴增加到95%乙晴第59页，课件共68页，创作于2023年2月保护柱套和柱芯第60页，课件共68页，创作于2023年2月为何要使用保护柱将样品中的颗粒和死吸附的杂质拦截以保护昂贵的分析柱可以增加柱子的寿命和保持柱效第61页，课件共68页，创作于2023年2月一般的保护柱有何缺点增加系统的死体积峰变宽保留时间改变第62页，课件共68页，创作于2023年2月我们的保护柱套有何不同通用-适用于所有的柱子直接与柱子连接几乎体积同时不改变峰保留绝对不与流动相作用使用容易价格合理第63页，课件共68页，创作于