新机体免疫功能检测课件

机体免疫功能检测免疫应答的类型及组成分两种类型一.非特异性免疫应答二.特异性免疫应答一.非特异性免疫应答（固有性免疫应答，)（一）概念：人类在种系发展过程中形成的并可遗传给后代的免疫力，它是天生具有的，不专门针对某种物质。（二）特点：.先天获得，人人皆有；比较稳定，并可遗传给下一代.不因同一抗原进入机体次数多少改变反应强弱.发挥作用迅速（三）组成.皮肤、黏膜的机械阻挡作用及局部分泌的抑菌、杀菌物质.吞噬细胞的吞噬作用()细胞对病毒感染靶细胞的杀伤作用.血液、体液中的抗菌分子：补体、溶菌酶二.特异性免疫应答（适应性免疫应答，)（一）概念：具有特异性，即针对某一特定物质而发生反应，包括细胞免疫和体液免疫（二）特点：.后天获得.有个体差异.免疫发生强弱与抗原进入次数有关（三）组成细胞免疫：由主导完成，其效应物质是致敏()体液免疫：由主导完成，其效应物质是第二节人体免疫功能检测非特异免疫功能体液中杀菌物质——补体、溶菌酶吞噬细胞——大、小吞噬细胞（数量、功能）

特异性免疫功能细胞免疫功能细胞数量功能体液免疫功能细胞数量功能人特异免疫功能的检测一细胞数量的检测二细胞功能的检测三细胞数量的检测四细胞功能的检测一细胞的计数（细胞表面标志的检测）（一）特异性抗原的检测细胞表面有一些特异的抗原，根据这些不同的抗原可鉴定不同的细胞群体抗原：淋巴细胞群（簇）分化抗原不同群淋巴细胞在分化成熟过程中，细胞表面出现或消失的抗原分子细胞表面主要抗原及其特异性

抗原特异性受体、全部细胞和部分细胞成熟细胞（辅助）细胞、、受体（杀伤抑制）细胞、细胞的亚型活化细胞、受体检测淋巴细胞表面抗原中:的数量表示成熟的总淋巴细胞的数量，的数量表示是细胞的数量，的数量表示是细胞的数量。≥。免疫功能差或者免疫功能紊乱，该比值小于检测方法：用已标记的抗抗原的单克隆抗体检测.免疫荧光法：用荧光素标记的单抗作为试剂染色淋巴细胞，计算出染上荧光的淋巴细胞百分率如：荧光标记的抗单抗淋巴细胞计数个，染上荧光的为细胞染色.免疫细胞化学法：用酶标记的单抗检测淋巴细胞

淋巴细胞印片淋巴细胞表面抗原与相应单抗结合加底物细胞上有颜色为阳性细胞用酶标记的单抗洗涤染色（二）细胞特异性受体（受体）的检测花环形成试验()原理：淋巴细胞表面含有绵羊红细胞（)受体（)，当淋巴细胞与绵羊红细胞相遇时，细胞通过该受体吸附绵羊红细胞而形成花环。,红细胞花环形成试验据实验条件不同又分两种：花环形成试验（,总花环）花环形成试验（,活性花环）花环形成试验分离出淋巴细胞(:)°、低速离心°、计数个中形成花环的意义：代表细胞总数（凡是细胞均能形成花环），数量低于正常，说明细胞免疫功能差。正常值：花环形成试验分离出淋巴细胞(:)、低速离心°、，计数个中形成花环的意义：能形成花环的细胞是活性强的细胞，花环形成率更能反映细胞免疫功能的情况。正常值：二细胞功能的检测检测细胞功能的试验有：（一）淋巴细胞转化试验（二）相关的细胞因子的检测（在细胞因子章节介绍）（三）淋巴细胞的细胞毒性检测（一）淋巴细胞转化试验.原理淋巴细胞在某些物质刺激下，细胞增殖、分化（如细胞变大、胞浆增多、出现空泡）合成增加（核染色质疏松，核仁出现），转化成为淋巴母细胞。

.刺激物一般分有丝分裂原（非抗原）和抗原两类：（）非抗原刺激物（有丝分裂原）可刺激相关的一类淋巴细胞发生增殖转化，与机体是否曾受过某一抗原致敏无关。

非抗原刺激物刺激物能刺激发生转化细胞植物血凝素（)刀豆素()脂多糖()、美洲商陆()、（）抗原刺激物只能使曾经被相应抗原刺激（致敏）过的淋巴细胞发生增殖转化。.试验方法（）形态学检测法将待测者血取出，加入一定量刺激物（一般用)培养，天后涂片染色，计数个中转化淋巴细胞即淋巴母细胞（根据形态）的百分率。正常值～操作过程：试验管:抗凝血－培养液对照管：抗凝血培养液°培养天涂片染色计数个中转化淋巴细胞的百分率转化与未转化淋巴细胞的区别转化细胞未转化细胞特点母细胞过渡型小淋巴细胞细胞大小（直径）µµµ胞核染色质疏松疏松致密核仁个有或无无分裂相有或无无无量丰富稍宽窄嗜碱性强、深兰色兰色天青兰空泡有或无有或无无伪足有或无有或无无胞浆形态学方法的优缺点优点：简便、不需要特殊仪器，无有害物（放射性物质）污染。缺点：判断结果不客观，受主观因素影响，结果判断难以规范化。（）同位素掺入法（掺入法）原理：细胞受刺激后，细胞进入增殖周期,发生有丝分裂合成。试验中当细胞进入期时，在培养液中加入胸腺嘧啶核苷（)，细胞摄入，合成,根据掺入细胞内的同位素量，推测细胞增殖程度，从而判断淋巴细胞转化程度。步骤：外周血分离淋巴细胞洗涤次计数并配成×细胞°加µ孔°收集细胞于滤膜上°分钟置有闪烁液的闪烁瓶中用闪烁计数仪测（每分钟脉冲数）计算刺激指数：刺激指数()实验组对照组正常值：同位素掺入法的优缺点优点：结果客观准确，有取代形态学法的趋势缺点：技术要求高，操作中每一个因素的改变都可影响结果；需要特殊仪器检测；有同位素污染问题（）比色法—四甲基偶氮唑盐淋巴细胞受刺激物刺激培养过程中，细胞增殖活化，在细胞培养终止前小时，加入，继续培养。

在细胞线粒体琥珀酸脱氢酶的作用下，被还原成蓝黑色的甲瓒，形成的甲瓒量与细胞增殖呈正相关。终止培养后加入二甲亚砜，使甲瓒溶解。在酶标仪上测，可反映细胞增殖水平。以刺激指数（）判断淋巴细胞增殖程度。试验孔对照孔本法敏感性不及掺入法，但操作简单，无放射性污染。（二）细胞因子检测细胞因子的检测应注意的问题.欲了解免疫功能情况，应检测多项细胞因子，如细胞免疫应测、、等.局部取标本：细胞因子由局部细胞产生，在血液中浓度极低，最好取局部体液或细胞.动态检测比较，如疾病的复发期、缓解期、恢复期.同一细胞因子选用多种方法检测，生物活性检测与其他方法检测结果不一定平衡（一个是功能，一个是量）细胞因子检测方法生物学方法免疫学方法分子生物学方法（一）生物学方法原理：根据不同细胞因子生物学活性（功能)不同而设计的方法如可促进淋巴细胞生长；可杀肿瘤细胞；可刺激造血细胞形成集落；可保护细胞免受病毒攻击。具体方法：细胞增殖法靶细胞杀伤法诱导的产物分析法细胞病变抑制法.细胞增殖法原理：一些细胞因子可专一刺激某些细胞增殖，而且细胞增殖的程度与这些细胞因子活性呈正相关。如：——细胞，——肥大细胞，——浆细胞。这些只依赖某种细胞因子才能生长的细胞系又称为依赖细胞株。如人对鼠细胞有支持生长作用一定数量鼠细胞每孔分别加不同剂量的培养根据鼠细胞生长情况，可制作的标准曲线（数孔）.靶细胞杀伤法有的细胞因子能杀伤靶细胞（肿瘤细胞），利用同位素释放法或染色法等可判定其杀伤率.细胞因子诱导的产物分析法某些细胞因子可刺激特定的细胞产生生物活性物质，通过测定其诱生产物来反映细胞因子活性如、可诱导骨髓产生组胺；诱导肝细胞产生抗糜蛋白酶；.细胞病变抑制法干扰素可阻止病毒侵害细胞，可用相关试验来检测验干扰素含量。如血凝素生成抑制试验：小鼠脑脊髓心肌炎病毒可感染人肺癌细胞，该病毒在生长过程中可产生血凝素，使人型凝集试验管：细胞（已长好）加一定量干扰素培养一定时间加病毒培养反复冻融稀释不同倍数加型血球观察凝集情况阳性对照加标准；阴性对照不加。在标准剂量曲线上查出量（二）免疫学检测法细胞因子为蛋白质或多肽，具有较强的免疫原性，可用其特异抗体来检测。最常用的检测方法是和放免法、化学发光法。定量测定（三）分子生物学方法利用细胞因子基因探针检测特定的细胞因子表达的技术常用的方法：斑点杂交、逆转录、、细胞或组织原位杂交等试剂：核酸探针——一段用放射性同位素或其他标记物（生物素、地高辛等）标记的一段片段，或单链、，它可与目的基因（细胞因子)互补此法灵敏、快速三种方法优缺点比较优点缺点生物学敏感、测功能长期培养依赖细胞株、费时步骤烦琐、影响因素多免疫学简单、迅速只检测量，不代表活性，敏感重复性好度低（较生物学法低倍）分子生敏感、快速测基因表达情况，不能直接提物学供浓度和活性（三）细胞介导的细胞毒试验细胞毒性细胞（)具有杀伤靶细胞的功能，它是评价机体细胞免疫水平的指标。检测这种杀伤作用的试验称为细胞毒试验。与靶细胞表面相应抗原结合通过脱颗粒，释放穿孔素、颗粒酶，使靶细胞溶解、凋亡。靶细胞穿孔素、颗粒酶靶细胞溶解、凋亡致敏淋巴细胞杀伤靶细胞的颗粒外排途径和途径联合杀伤靶细胞的过程杀伤具有高度的抗原特异性及严格的限制性连续杀伤靶细胞的杀伤特点：抗原特异性、限制性、高效性与连续性方法.形态学方法淋巴细胞与靶细胞按一定比例加在一起培养一段时间，染色后计数残留靶细胞（肿瘤细胞）数，计算淋巴细胞抑制肿瘤细胞生长的抑制率。对照组（不加，只有肿瘤细胞）：对照组平均残留肿瘤细胞数实验组（肿瘤细胞）：实验组平均残留肿瘤细胞数抑制率对照组实验组对照组.同位素法：常用释放试验原理：用标记靶细胞（一般为肿瘤细胞），将它与待测淋巴细胞（效应细胞）一起培养，效应细胞（）破坏靶细胞，释放出来，测定其数量，即可推知效应细胞的杀伤能力。方法：效应细胞：受检者外周血单个核细胞靶细胞：用铬酸钠（)标记传代肿瘤细胞分三组：.最大释放组：µ靶µ(靶细胞全溶).自发释放组：µ靶µ培养液.实验组：µ靶µ培养液µ效应效：靶分别为：；：；：培养后取上清测计算特异溶解百分率：实验组自发释放组最大释放组自发释放组特异溶解百分率大于为阳性细胞免疫功能体内检测法—Ⅳ型超敏反应皮试原理：Ⅳ型超敏反应的本质是细胞免疫，Ⅳ型超敏反应如为阳性，可反映细胞免疫功能好。所用抗原：或以为例：

皮内注射，—观察结果。红肿硬结直径大于，为阳性该试验设计是基于人群中的人均感染过结核菌（被结核抗原致敏），致敏淋巴细胞再次接触抗原（如)后，释放出细胞因子，使局部产生以巨噬细胞、淋巴细胞浸润为主的炎症反应（表面为红肿硬结）。阳性（直径>)：曾感染过结核菌，细胞免疫功能好阴性(直径<)：细胞免疫功能差或从未感染过结核菌强阳性（直径>)：表明现处于结核的活动期

三细胞数量的检测（一）细胞表面识别抗原受体（）（,)的检测是细胞表面膜免疫球蛋白，存在于成熟淋巴细胞膜上，为细胞结构蛋白。类型为：、型。作用及意义：.是细胞的表面标志.是细胞识别抗原的受体.检测外周血淋巴细胞时，表面有者为细胞，故可作为检测细胞数量的方法。.方法（常用免疫荧光法）（）试剂：荧光标记的抗人、抗体（）外周血淋巴细胞涂片，荧光抗体染色（）观察：阳性细胞呈均染上荧光.正常值：（二）细胞表面抗原的检测细胞表面特有的抗原有：、，用抗的单抗（免疫荧光法、酶免疫组化法）检测外周血淋巴细胞，阳性细胞为淋巴细胞，约占总淋巴细胞的。以上两种方法中，检测细胞膜表面的方法用得多些。四细胞功能的检测（一）血清中的测定人的体液免疫功能正常（细胞功能正常），应反映在血清中有正常量的免疫球蛋白检测人免疫球蛋白常用方法：单向琼脂扩散试验、免疫比浊法正常值：()