SOP-QC-019-00口罩生物负载检验规程

KANGGU口罩生物负载检验规程文件编号SOP-QC-019-00页码主管部门.：编制人：审核人：批准人：质量部−−−−−分发部门质量部生效日期−−目的建立口罩微生物负载的检验规程目的是通过薄膜过滤法检测附着在口罩上的所有微生物残留，并对这些过滤物进行培养，以有效地进行车间环境控制，从而使产品的生物负载指数到达EN14683标准要求。范围本规程适用于我司口罩产品。职责质量部微生物实验员对此规范负责。生物负载测试要求4.1测试依据：EN14683&ENISO11737-14.2取样数量：取样5pcs。4.3判定结果：口罩生物负载测试值应≤30cfu/g。实验器材电子天平、生化培养箱、压力蒸汽灭菌器、恒温水浴锅、超净工作台、旋涡混合仪、洗脱液、营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、平皿、电动吸引器、冰箱程序6.1实验前准备6.1.1培养基的配制根据试验需要,按培养基配制的比例要求溶于三角烧瓶后，用瓶塞盖上，将其放入高压蒸汽灭菌器进行灭菌，无菌操作法倒入平皿中，待冷却后置于生化培养箱中培养48小时，确定无菌生长后使用。6.1.2洗脱液的配制按照（5g氯化钠：1g蛋白胨：2g吐温20）加入1000mL蒸馏水的比例溶解，分装倒入300mL洗脱液于500mL具塞锥形瓶中，121±1℃30min灭菌，6.1.3实验设备的消毒实验前将微生物限度室和超净工作台的紫外灯打开，消毒30min；实验用品在传递窗中紫外消毒30min；实验前，超净台内腔用75%的酒精棉擦拭。6.1.4实验其他材料灭菌的过滤膜：孔径0.45μm,Φ60mm;用镊子在火焰上灭菌后，待冷却后夹一片过滤膜放在过滤器的过滤台座上,台座可以事先用无菌洗脱液润湿下，以便膜更好的贴覆，注意观察膜的完整性，膜不得有破损；重新组装过滤器，用夹子把过滤器夹紧,用牛皮纸保好后放入121±1℃测试样品的采集：采样时从净化车间或灭菌前包装中随机抽取同一批产品中的产品，采样时应注意包装不得破损。其他：经121±1℃量筒若干；微量移液管，及微量移液器，∮90mm平皿若干、酒精灯、记号笔、打火机。6.2样品测试6.2.1用振荡法处理检品产品供试液制备：打开超净台风机，点燃酒精灯；取1套样品，先用75%酒精擦拭外包装；打开灭菌的装有一定量的洗脱液的具塞广口瓶；用灭菌的镊子和剪刀打开产品外包装；用灭菌的镊子和专用剪刀将产品小心的剪开,使产品完全拆开，用镊子夹取放入已打开的广口瓶中；重新盖瓶盖，并移至混合仪上振荡2min或直至充分混匀（二者取时间短者）；按6.2.1.1中（a）～（e）步骤处理其他检品。6.2.2检品洗脱液的抽滤将灭菌的过滤瓶用过滤吸引管连到真空泵和过滤器之间；将6.2.1中的洗脱液，用灭菌量筒将洗脱液平均分成2份，分别用作细菌培养，霉菌及酵母菌培养将上述1/2洗脱液倒入过滤器中；打开真空泵，抽滤；再将另1/2洗脱液倒入过滤器中打开真空泵，抽滤；按照6.2.2中（a）～（f）步骤处理其他检品6.2.3培养及计算用经火焰灭菌的镊子将过滤完的膜从过滤器上取下；将膜分别放置在已确认无菌的两种培养基上；注意膜的放置方向，膜没有菌的一面要与培养基接触；用记号笔在平皿盖上做好标识将上述营养琼脂培养基放于生化培养箱中30～35℃另一份玫瑰红钠培养基放于生化培养箱中20～25℃培养5天作霉菌及酵母菌培养注：如果不能即时读取实验结果，应将平皿放到2～8℃冰箱中，尽快读取结果。如果在培养后不能及时将平皿取出（培养时间在周末结束或不在正常的工作时间），那么要标注清楚实际的培养时间，培养时间不能超过规定时间24小时以上。如有培养基干燥的情况，实验结果不予以接受。菌落计数：测试菌数=细菌菌落数x3+霉菌及酵母菌