超敏反应性疾病及其免疫检测

临床免疫学检验技术第二十二章

超敏反响性疾病及其免疫检测杨巍第二十二章超敏反响性疾病及其免疫检测目录第一节Ⅰ型超敏反响一、Ⅰ型超敏反响体内检测方法二、Ⅰ型超敏反响体外检测工程及检测方法第二节Ⅱ型超敏反响一、Ⅱ型超敏反响常见检验工程及其检测方法二、Ⅱ型超敏反响抗血细胞抗体检测的临床意义及应用评价第三节Ⅲ型超敏反响一、Ⅲ型超敏反响常见检验工程及其检测方法二、Ⅲ型超敏反响免疫复合物检测的临床意义及应用评价第四节Ⅳ型超敏反响一、Ⅳ型超敏反响常见检验工程及其检测方法二、Ⅳ型超敏反响皮肤试验临床意义及应用评价本章小结第二十二章超敏反响性疾病及其免疫检测重点提示Ⅰ型超敏反响体外检测工程及检测方法。抗血细胞抗体常见检测方法和临床意义。抗原非特异性循环免疫复合物的检测方法和临床意义。第二十二章超敏反响性疾病及其免疫检测超敏反响〔hypersensitivity〕：是机体接受某些抗原刺激时，出现生理功能紊乱或组织细胞损伤等异常的适应性免疫应答。第二十二章超敏反响性疾病及其免疫检测Ⅰ-Ⅳ型超敏反响发生机制的比较超敏反应类型介导形式和成分效应细胞和成分初次介导组分二次介导组分Ⅰ型（速发型）抗体介导，IgE肥大细胞嗜碱性粒细胞血管活性胺白三烯、PGD2、PAF、细胞因子Ⅱ型（细胞溶解型）抗体介导，IgG、IgMFcR+细胞（吞噬细胞、NK细胞）补体、攻膜复合体溶酶体酶、穿孔素Ⅲ型（免疫复合物型）免疫复合物介导，IgGFcR+细胞、补体抗原-抗体、补体复合物溶酶体酶Ⅳ型（迟发型）T细胞介导，Th1、Th2、CTL巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、CTLIFN-γ、IL-4、IL-5、eotaxin、细胞毒素趋化因子、细胞因子、细胞毒素、炎症介质第二十二章超敏反响性疾病及其免疫检测第一节Ⅰ型超敏反响第一节Ⅰ型超敏反响Ⅰ型超敏反响：亦称变态反响〔allergy〕或过敏反响〔anaphylaxis〕，主要由特异性IgE抗体介导产生，因其发生速度快，常在再次接触相同抗原后数分钟内即出现临床反响，故又称速发型超敏反响〔immediatehypersensitivity〕。第一节Ⅰ型超敏反响第一节Ⅰ型超敏反响AgMastcellIgE再次接触一、Ⅰ型超敏反响体内检测方法1.皮肤试验Mastcell脱颗粒局部红肿、硬结20-30minMastcellMastcell2．激发试验(provocationtest)：是模拟自然发病条件，以少量致敏原引起一次较轻的变态反响发作，用以确定变应原的试验。非特异性激发试验特异性激发试验二、Ⅰ型超敏反响体外检测方法第一节Ⅰ型超敏反响血清总IgE检测特异性IgE检测IgG4检测细胞脱颗粒测定体外检测方法1．血清总IgE(totalIgE，tIgE)检测〔1〕检测方法：包括免疫比浊、化学发光免疫试验和酶联免疫吸附试验。〔2〕临床意义：TIgE升高常见于过敏性疾病，当患者有选择性IgA缺乏症，感染、肿瘤和其他情况〔输血、川崎病、肾病综合症、肝脏疾病〕时也出现血清TIgE升高。单纯TIgE升高不能作为疾病诊断依据，也不能说明患者属于特异质个体；TIgE正常也不能排除变态反响疾病。第一节Ⅰ型超敏反响〔3〕血清总IgE检测的应用评价：①免疫比浊和化学发光免疫试验敏感性高、特异性强、稳定性好，测定自动化、检测时间短；酶联免疫吸附试验方便、实用，敏感性和特异性均好，不需要特殊仪器。②血清tIgE含量受多种因素的影响，因此，在分析血清tIgE结果时须建立当地人群tIgE水平的参考区间。第一节Ⅰ型超敏反响2．特异性IgE〔specificIgE，sIgE〕检测〔1〕检测方法：包括放射免疫试验、免疫印迹和荧光酶免疫试验。放射变应原吸附试验〔radioallergosorbenttest，RAST〕RAST是目前公认的检测Ⅰ型超敏反响的有效方法之一。根据标记物不同分为：RASTRIA、RASTEIA、RASTFEIA。第一节Ⅰ型超敏反响免疫印迹应用免疫印迹检测sIgE时，因为CCD的存在，可能出现交叉反响，影响结果判定。交叉反响性碳水化合物决定因子〔Cross-reactiveCarbohydratDeterminant，CCD〕：是指变应原分子结构中包含的能与蛋白质结合的寡聚糖侧链，可以诱导机体产生特异性IgE。抗CCD的sIgE不引起过敏反响，但可以造成血清学变应原检测出现假阳性结果。第一节Ⅰ型超敏反响荧光酶免疫试验〔fluorescentenzymeimmunoassays，FEIA〕是利用酶标记抗体〔抗IgE〕与待测样本〔血清sIgE〕反响，借助酶催化荧光底物，经酶促反响生成稳定且高效的荧光物质，通过测定荧光强度确定待测样本sIgE的含量。第一节Ⅰ型超敏反响〔2〕sIgE检测的临床意义：sIgE检测可以与变应原皮试和支气管激发试验互为补充，但不能完全代替后两种试验。〔3〕sIgE检测的应用评价：①RAST方法检测效率低〔每次只能检测一种变应原〕；有放射性核素污染风险；当待测血清中含有相同特异性IgG时可干扰正常结果。②免疫印迹无污染、无需特殊设备、操作简单、能一次性确定多种变应原，故广泛应用。③荧光酶免疫试验的敏感性和特异性均较好，但使用荧光素做标记时，试剂的使用有效期较短。第一节Ⅰ型超敏反响3.IgG4检测〔1〕检测方法：包括放射免疫试验、酶联免疫吸附试验、免疫比浊等。〔2〕临床意义：①IgG4异常增高可见于Ⅰ型超敏反响性疾病和IgG4相关性疾病。②此外，类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫病患者血清中亦可出现IgG4水平升高。第一节Ⅰ型超敏反响4．细胞脱颗粒测定〔1〕类胰蛋白酶测定：作为肥大细胞活化、脱颗粒的指标。一般采用双抗体夹心ELISA法。〔2〕嗜碱性粒细胞脱颗粒测定：该试验阳性不仅能够证实sIgE的存在，而且能够证明sIgE是有功能的，较单纯皮肤试验或sIgE阳性结果更有临床意义。〔3〕嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophilcationicprotein，ECP)测定：作为嗜酸性粒细胞活化、脱颗粒的指标。ECP测定包括荧光免疫试验、化学发光免疫试验、酶联免疫吸附试验和放射免疫试验等多种方法。第一节Ⅰ型超敏反响第二节Ⅱ型超敏反响

第二节Ⅱ型超敏反响Ⅱ型超敏反响：又称为溶细胞型或细胞毒型超敏反响，特点是由IgG或IgM类抗体与靶细胞外表相应抗原结合后，在补体、吞噬细胞和NK细胞参与下，引起的以细胞溶解或组织损伤为主的病理性免疫反响，发作较快。第二节Ⅱ型超敏反响一、Ⅱ型超敏反响常见检验工程及其检测方法〔一〕抗血细胞抗体检测方法1．抗球蛋白试验〔antiglobulintest，AGT〕，即Coombs试验。2.微柱凝胶法第二节Ⅱ型超敏反响-+++双群+++++++RBC通过凝胶，沉积在管底凝集RBC在凝胶下部凝集RBC在凝胶中部凝集RBC在凝胶顶部；未凝集RBC在管底凝集RBC在凝胶中上部凝集RBC在凝胶顶部，呈线条形2．凝聚胺法：原理：低离子介质——降低溶液的离子强度——促进不完全抗体与红细胞抗原结合；高价阳离子多聚物〔凝聚胺〕——中和红细胞外表的负电荷——使IgG型抗体直接凝集红细胞。参加中和液——由凝聚胺引起的非特异性凝集——分散；由抗体介导的特异性凝集——不分散。结果判定：凝集块在短时间〔1分钟〕内分散——判断为阴性；形成不同强度的凝集块——判断为阳性。3．酶介质法：原理是IgG型不完全抗体与红细胞膜上相应抗原结合不能形成肉眼可见的凝集。参加酶介质后，红细胞膜外表的唾液酸糖肽被破坏，细胞膜外表负电荷减少，细胞间排斥力减小，细胞之间距离缩小，呈现肉眼可见的凝集。最常用的酶是1%的木瓜酶或菠萝蛋白酶。第二节Ⅱ型超敏反响〔二〕自身抗体检测常见的介导Ⅱ型超敏反响的自身抗体还包括抗乙酰胆碱受体抗体、抗促甲状腺激素受体抗体以及抗肾小球基底膜Ⅳ型胶原抗体和抗肾小管基底膜抗体等。检测方法：间接免疫荧光法〔indirectimmunofluorescence，IIF〕。检测时，以特异性组织切片作为检测基质。第三节Ⅲ型超敏反响第三节Ⅲ型超敏反响Ⅲ型超敏反响：又称为免疫复合物型或血管炎型超敏反响，是由抗原和抗体结合形成中等大小的可溶性免疫复合物沉积于局部或全身多处毛细血管基底膜后，激活补体，并在中性粒细胞、血小板、嗜碱性粒细胞等效应细胞参与下，引起的以充血水肿、局部坏死和中性粒细胞浸润为主要特征的炎症反响和组织损伤。第三节Ⅲ型超敏反响一、Ⅲ型超敏反响常见检验工程及其检测方法类别原理方法敏感度（μg）物理法溶解度PEG比浊试验20补体法结合C1qC1q固相试验0.1抗球蛋白法结合RFmRF固相抑制试验1~20细胞法补体受体Raji细胞试验6第三节Ⅲ型超敏反响二、Ⅲ型超敏反响免疫复合物检测的临床意义及应用评价〔一〕临床意义免疫复合物阳性或浓度升高主要见于感染性疾病和自身免疫性疾病。CIC的消长可反映病情的严重程度、检测治疗效果。须比照屡次检测结果才能证实其与疾病的相关性。对有蛋白尿、关节痛、血管炎、浆膜炎、紫癜病症等诊断不明确的患者，可考虑检测循环免疫复合物，并结合局部免疫复合物的免疫组化检测结果以明确病变是否与Ⅲ型超敏反响有关。第三节Ⅲ型超敏反响〔二〕应用评价目前临床上多采用PEG比浊试验检测循环免疫复合物，此法操作简便、测定快速、易于推广，但不能区别免疫复合物分子大小，干扰因素多，特异性较差，仅适用于循环免疫复合物的粗筛。循环免疫复合物的检测方法种类较多，原理各异，对同一标本采用不同检测方法获得的检测结果不尽相同。迄今，临床上尚未有公认的准确、特异、敏感、简便、快速的检测方法和理想的标准参考品。因此建议联合应用多种方法，以提高准确性和特异性。第三节Ⅲ型超敏反响第四节Ⅳ型超敏反响第四节Ⅳ型超敏反响Ⅳ型超敏反响：由效应T细胞与特异性抗原结合后，引起以单个核细胞浸润和组织损伤为主要特征的炎症反响。由于T细胞介导的超敏反响需要经过效应分子的合成阶段，因而进程较为缓慢，通常在再次接触相同抗原后24小时～72小时发生，故Ⅳ型超敏反响又称为迟发型超敏反响〔delayedtypehypersensitivity，DTH〕。第四节Ⅳ型超敏反响一、Ⅳ型超敏反响常见检验工程及其检测方法1．Ⅳ型超敏反响皮肤试验原理：使用皮内注射、皮肤斑贴等方法使变应原进入已经致敏的机体，体内致敏的T细胞再次接触到变应原后，释放多种细胞因子，造成局部以单核细胞和淋巴细胞浸润为主的炎症反响。24小时～48小时后局部出现红肿、硬结、水疱等现象，以此来判断变应原是否引起机体Ⅳ型超敏反响或机体的细胞免疫功能状态。2．Ⅳ型超敏反响皮肤试验方法：包括结核菌素皮试和斑贴试验两种。第四节Ⅳ型超敏反响反应程度皮内试验斑贴试验皮内试验斑贴试验-无反应或小于对照无反应或小于对照+仅有红肿轻度红肿、瘙痒++红肿伴硬结明显红肿、时有红斑+++红肿、硬结、水疱红肿伴豆疹、水疱++++大疱和（或）溃疡红肿、水疱、溃疡Ⅳ型超敏反响皮肤试验结果的判断标准第四节Ⅳ型超敏反响二、Ⅳ型超敏反响皮肤试验临床意义及应用评价〔一〕临床意义1．寻找变应原2．结核菌素皮试意义：①了解机体是否对结核菌素有免疫力及接种卡介苗后的免疫效果观察；②排除结核菌感染；③了解机体细胞免疫功能状况。3．传染病的诊断〔二〕应用评价结核菌素皮试不但可以判断机体是否对变应原过敏，而且可以反映机体的细胞免疫功能状况。斑贴试验虽然敏感度不太高，但假阳性较少。第四节Ⅳ型超敏反响本章小结Ⅰ型超敏反响性疾病的变应原检测方法分为体内检测和体外检测〔血清学检测〕两种。体内检测主要包括皮肤试验和激发试验。体外检测包括血清总IgE检测、特异性IgE检测〔即变应原筛查〕和血清IgG4检测，应用的免疫学检测方法包括放射免疫试验、化学发光免疫试验、荧光免疫试验和酶联免疫吸附试验等。细胞脱颗粒测定能够更加直观的