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文档简介

1基因结构与表达分析的基本策略StrategyforStructureandExpressionAnalysesofGenes分子生物学系22分子生物学的三大核心技术DNA序列分析—DNA测序,1977聚合酶链式反应—DNA扩增,1985DNA重组技术—基因克隆,19733一、DNA序列分析二、核酸分子杂交三、聚合酶链式反应四、基因芯片和微阵列五、Western免疫印迹主要内容4(恒一浑)双偿脱火氧抄末运端映终暴止自法(挽S物a换n凶g械e宁r影,忙1填9件7交7姓)一佳、D煤N璃A序呢列图分范析(喊二佳)D葵N著A自柄动拼化牌序财列六分昏析(炮三透)丙化快学纹降茅解文法(G攀i必l之b爪e赴r床t,阴1理9敏7茫7配)5F质r授e苦d食e抗r讨i荡c镜k胳S效a叔n疼g军e也r1都9北1慎8~W社a悄l青t帅e吉r悼G蛾i随l旬b见e湾r锡t1狗9轰3摇2~T羞h周e伟N理o芦b遮e疤l来P宵r滋i孔z蚕e尺i躁n落C勒h辨e彻m亚i琴s盛t决r陷y忽1锤9湾8汇0P饱a道u党l粥B档e另r彼g1放9轧2答6~6D社N窝A测垂序盘技热术病基惜础晶:高循分设辨给率散变棍性向聚膜丙杀烯姨酰扶胺菌凝问胶校电伟泳窃(p霞o猴l乱y真a绕c料r眨y阳l栗a沿m凭i使d普e输g颜e更l丸e搭l枯e纯c闸t延r劣o妹p机h旱o柱r佳e情s持i势s略,P烂A材G浊E)吃技搬术室,齐可绣分您离差初别算仅1个怒碱命基秩的色单茅链络寡龟核哑苷购酸D饿N袜A片表段秩。7(一琴)拆双驼脱云氧热末俯端摧终倘止颠法(d厕i蔑d属e退o驼x用y看c葵h且a践i瞧n偿t帝e僚r猜m缩慧i元n颂a深t泪i殖o仙n)8A奸T须P、d阿A以T侧P和d凡d竿A隆T筋P的列结荣构A律T阔PAO即HO宴HHHd缴A优T映Pd猎d词A逃T勉PN京T耻P唱:核注苷屯三垄磷惨酸A卫T课P、G领T域P、C供T辫P、U攻T厨P的愧合巷称依;d岭N巡寿T童P楼:脱安氧愁核浅苷场三谈磷纵酸d蒜A湖T枯P、d跳G费T牙P、d膀C顺T结P、d剪T端T捎P;d乏d甘N转T沉P袜:涌d捷d明A宏T迁P、d斜d兽G魄T群P、d佛d娘C熄T定P、d扑d鸽T皇T初P;9掺嗓入N个否核达苷绪酸D苗N森A合吴成村反艇应蹄模君式畏图1口0D板N秘A单叶链苹模滥板引您物掺摸入d哭d粗N较T访P延贵伸找的兰新坝合捕成同链末周端宴终略止1叛11辛.双砍脱糊氧洲末念端包终充止罚法杂原智理D斧N筝A合跌成劣反遥应填中加,d朋d煎N扮T像P不玩存贵在3佣′遵-撕O救H末幕端,驴故羽不勺能论与梯下童一舌个裳核嘴苷脆酸骂的5债′拣-磷镇酸谎基工团形细成3沃′,5却′梳-磷寸酸约二降酯昨键泊,窗导杂致D婚N复A新阅链道的蓝延罢伸副提巨前灿终级止孩于d唐d型N拼T弓P。1镇2d反d坟C企T钉Pd从d沃A策T丽Pd才d呜T储T谊Pd栋d热G岩T任Pd折C蝇T江Pd教A缘瑞T仔Pd矿T恩T矛Pd慕G合T研PA夕G星C则T5′T471漠1G挺A棋A咐T细G箩A遮3′ACGCT1穗32乳.喷D放N竞A测揉序满主并要触步呈骤1杂4A反应管G反应管G反应管T反应管C反应管T反应管1什51宾6G忧A轿T具C1吹7●变恼性礼聚遣丙渔烯傍酰雹胺凝凝怠胶喜电漠泳●房诚单贪链D柳N篇A模脏板案的亭制搞备●D徐N存A模炸板昏与鄙测止序祖引粪物去退挠火●行掺货入由法腥标被记皇反融应●蛮延虑伸-终宝止败反弓应●壮放滔射意自住显另影●籍阅趣读跑测粮序胶结安果测洁序扫步冤骤1末8(拣二趁)D孟N士A测唯序篮自讲动艺化扭原雪理采绩用4种启不神同挂的菜荧擦光掘分易别涌标猫记4种d旬d饶N畅T屋P终钥止蛮反拐应期产蔬物劝,坏替烤代掘放确射叨性喊同宋位句素肚标央记奸是尝实并现D斜N犹A测贞序喷自灵动甜化美的乞基捕础旧。1荷9d超d基C甘T撑Pd抹d坝A虚T章Pd粗d胸T师T刊Pd僚d米G慈T据Pd坚C谣T唉Pd朱A霉T醒Pd额T愉T略Pd欢G持T头P5′TGAATGA3′ACGCT2跟02及1表坝示寇一洋个S稿N稿P位撕点佳,坡该驾位芦点聪出该现案了径双点峰师,诸对摘应昌的抵核前苷隶酸扔分洽别爸为C和T魔,因泉此苦该料位什点标为C势T杂性合膨型咱,屯如畏果耽该掏位到点粮只馆有箭一驶个纵峰C或垒者T,电则纵该怪位爸点佳基希因秒型仗为C哲C或T荒T纯杏合蛮型2畜2D教N踏A自乡丰动打测抛序春步扛骤4种渡不或同饭荧益光腰染敏料足标摊记风终缎止匙物d设d悦N旷T裙P始sS继a厦n记g推e剪r测过序猪反景应反衫应院产盘物同束一泳恋道政电可泳散分拜离激猪光炮激慈发击不竹同峡大止小D击N博A片形段秤上你的肉荧衣光伍分晒子狱,庸发欣射暮出启四查种楚不辛同蜻波广长谋的每荧废光荧糕光驾信蒸号梁采功集家、女计乘算宿机熔分广析津与D寒N感A自瞒动廉排碎序2现3D尾y痕e塌l截a布b荡e脾l丘e园d困d态i制d担e山o奶x扫y附t帜e温r喂m遭i辉n消a括t慢o辈r填s椒o柱n闸A顶B之I怪3沿7致3匠0该c亲a灶p才i夸l急l幸a念r慰i染e敢s2愉4

与末端终止法不同,化学降解法是建立在对原有DNA的化学降解过程基础上。

(三)化学降解法2足5

将待测DNA片段3′或5′端进行同位素标记,标记的DNA片段分成五个反应,分别用不同的化学试剂处理,造成碱基特异性切割,使DNA片段分别于某一种(类)碱基处断裂。电泳分离5组DNA混合物,放射自显影检测末端标记的DNA链的电泳区带位置。化学降解法原理2梳6化晨学供降崖解G反笼应糊模境式扰图硫酸二甲酯哌啶M丑e获tM免e探tM纯e呜tM韵e堤t2右7最暗新与测肢序亩技价术4旷5第4技舟术(R肺o恶c愉h祖e)焦奴磷忘酸资测胞序烫(P滩y顽r语o皇s放e岂q天u赶e洋n呈c亮i福n煮g)S师o非l圈e恰x猛a测守序给技裕术(I疏l践l其u调m饺i侮n凤a)S窝O丸L加i草D技废术(A祝B匠I)连表接躁法准测球序2栏8举宾例辈:S椅o歼l俭e叙x碑a测踢序H昼i浮S勉e刃q孔2勿0排0息02姓9S追o铅l据e裤x壤a测捧序惰:减在怕一规个烛反负应妇中扫同昂时悦加殃入4种翠核古苷笋的倦标延签持,茂采沸用班边钥合述成贫边堆测妻序剩(S距B悦S-s事e础q镜u炒e验n戴c遇i律n菌g桃b钟y渣s掠y极n番t耐h澡e纷s裳i楼s)侦。完升成湾人称类坦基封因世组啄草只图铜不倡同彩测连序觉仪搅的鲜比隐较京图3凝0二、核圾酸肿分歌子庸杂根交(N唇u屠c罪l秒e帅i骄c退A待c顾i棋d怖H党y体b彼r塘i蓄d府i取z虾a进t柄i柜o仙n)(调一阻)S愚o妖u押t饿h种e明r遵n印稼迹引杂慈交叶:丙检看测D灵N撒A(逃S煎o衣u鼠t衰h尼e论r功n耍b慕l默o芬t员h曲y量b乔r销i办d临i愧z章a逐t姑i祝o渣n矛)辫S蜓o那u盒t融h蛇e轮r稠n避E跌M,兴1狮9棒7评5(钢二构)N芒o食r烈t尸h星e勒r恒n印环迹途杂裕交抱:粥检撕测R裤N丑A(胆N适o孔r卫t续h孩e途r举n校b担l间o关t淘h世y躺b央r威i北d昏i袜z栗a勾t翼i宜o映n史)中S策t什a胳r息k支G此R,1呈9妙7温73殿1核岸酸缩慧分另子腊杂削交见原赵理标局记血的单构链桐核花酸骄探闭针与颤待宾检际测巧的移靶疤单柏链D添N艘A或R旦N拔A局冻部拾互仆补昂结旗合挎形喉成焰杂财交找双辨链效。应箭用寨:核鹿酸乐靶D唤N园A或R漠N蓬A序即列倘的刃定映性乓与退定查量萝分沿析截。3快23指33滑3印柄迹扛技杀术利璃用牌各奏种埋物笋理悉方零法补使珍电拨泳主胶呆中万的梳生益物遥大筝分乎子牙转祝移班到N铺C等维各园种移膜烈上义,魔使嘴之银成凑为挨固苦相荒化筹分坝子赵。这门一闹技撇术央类近似据于勺用委吸乒墨鼻纸压吸牲收络纸钓张稼上彻的佳墨碗迹层,象因尾此纱称雹之杯为“b告l讯o悔t踩t既i垄n源g”,译小为柿印斜迹唤技煎术肢。3蒜43扰4探转针裕技桌术用剩放岗射肌性盾核圈素套、嗓生糟物驻素羞或熟荧抽光泛染览料必标楚记央其席末席端位或役全泪链朽的劝已汗知湾序乓列骆的澡多诸聚奸核乖苷归酸倾链棚被黑称牲为“探好针”。探急针栽可奏以聋与融固壁定盲在N扣C膜允上植的脑核责苷练酸滚结稻合捞,当判杰断饰是坏否苍有艇同田源软的糕核丸酸疏分激子唱存再在庆。3膊5S盾o冒u慈t鸦h但e俱r丙n印器迹片杂副交呆原警理将盏电治泳壳分搞离牵的待册测D救N差A片腔段山结井合徒到以一宿定关的更固某相边支念持均物背上粥,误然佳后申与坐存车在避于晋液疾相女中台标鲜记甜的票核犁酸尤探差针邻进趋行楼杂填交歇的扭过做程率。(专一扣)S李o税u仓t越h沟e傻r制n印夕迹范杂斑交应丛用愧:D真N革A(爬基释因典组D云N棵A)粒分讽子垂的枝定钢性判或猫定量妹分响析因。3谊61缠.制贤备置基便因姥组D忌N熟A2信.用伐限汇制栗性驾内鼠切且核回酸炒酶幼消沃化棚基紧因面组D谢N寄A3牌.琼没脂签糖虹凝新胶公电荣泳脆分舅离D呼N睬A酶呜切染片置段4主.凝风胶铃预剑处借理(盾如桐强荐碱份,D偷N欣A双检链翻变皱为末单乌链蓬)5出.皇S柳o是u习t敲h接e男r妹n印切迹例转辜移6演.标劲记收核脂酸缴探旁针坑、翻探神针练与D讯N搁A片躁段进杂黄交7顶.杂援交墙结跌果这显氧示S娘o汗u炮t否h出e沿r径n印蹲迹督杂幅交做基监本驻过童程3耳7S祥o取u鉴t皆h疑e黑r忘n印何迹赌杂晌交范示继意麦图3瞒8将短电哥泳轨分辩离缝的待溪测D躲N禽A片激段贩结田合剖到融一悄定酿的过固您相姜支沾持侧物暑上绪,栗然胡后筋与答存犁在坛于妇液腿相具中锡标旦记救的武核鉴酸缝探明针精进党行坦杂刃交找的煎过雪程崭。3别94吗0地火中钳海弃贫射血饥的S参o赔u岗t踏h顾e捐r稍n佳b仪l丸o朴t基辩因播诊凝断(1)旬仅完一淋条岭染绒色孩体誓上哥的室一隙个α基细因盟缺宜失革或锋缺悔陷辰,树则α链希的衫合怪成榆部去分帝受歉抑催制话,葱称欣为α起+地变贫焦;(2)扁每浮条熄染礼色模体阔上覆的2个α基买因咬均柄缺铜失过或什缺定陷剂,访称熄为α便0地严贫哀;(棋3闯)鼻α守1、α讲2序款列链基甚本哭一姿致耀;共基记因母不伟同轮程窄度蜘的灾缺澡失漆可扮引朗起贼不符同柏类济型他的旦地纹中恰海队贫拌血叨。α梯1α瞧2α何αα具α+α+α+α步α0α+α0α0α04丈1B锯a乞m畏H垄IB殖a抛m堪H叔Iα2α1α21呀0嗽k典b1党4去k盟bprobe地激中叮海敏贫看血取的尝直毫接踪蝶基膛因烤诊积断4门2αα艳/劣α腾α彻α绍α遵/差α雄-壤α皆α故/炕-贿-著α售-破/把-应-浊-板-讯/沉-使-正状常揭缺1缺2缺3缺41摇4缴k锯b1离0军k织b4田3(压二钳)N疗o博r提t际h璃e回r的n印佳迹匀杂鼠交(啊N咳o摘r供t株h纺e绿r克n愤b胁l冤o铃t仁h束y尽b书r汁i租d振i幕z植a恭t编i宾o才n狐)指钞将R荣N俯A变匪性黎及骄电室泳塌分糕离湿后酱,边并呈转塘移帝到敢固赛相帆支忧持均物胃上立,飞用讲杂护交贺反旗应钟来催鉴桑定穿其饶中丸特劲定m灰R跳N摇A分忧子阅的寻含籍量屯及典其尤大赔小喊。用给于m煎R幼N旧A进西行付定愿性欲和任定额量补分膛析歌。4场4R寒N娱A琼江脂忌糖凑凝涂胶东电锋泳3kb0.4kbNt36382604623N愤o拾r散t剂h促e敞r梳n烦b愉l缘瑞o替t晶h姨y据b即r乒i帆d冈i舒z骄a穗t队i仅o差n28S18S应利用已举唯例4愧5GAPDH0d2d4d6d8dN手o李r铲t局h嚼e绸r薯n扶b炸l桌o节t杂拜交悦分肯析m奋R隔N东A的控表慌达靶m衣R凤N加A3愤-磷轧酸扣甘颠油狱醛芦脱祸氢虫酶4花64闹6三阶、吐其卷他困杂扛交店技饼术1统.斑开点蝴杂陈交(仗d园o乘t诊b阔l蚂o鼠t骆h孕y羡b岩r逐i犬d岔i促z驰a耗t原i食o鸣n)将R观N猫A或D评N砍A变享性惕后幸直妄接喊点罪样啦于酒硝肯酸毛纤前维木素哈膜略或语尼盆龙谎膜紧上刚,架用眼于浇基么因锯组俯中违特止定核基杀因酸及差其眉表嫂达两的赏定扛性灿及咬定佛量构研己究廉。4陶74壮72盐.原幅位懒杂月交金(i曾n持s平i较t喊uh像y萍b雄r删i茂d仓i绩z塘a耀t掌i北o托n)用蛋标略记坦的鸦核辫酸示探右针晋与帅组遗织盘切叙片受或讲细筹胞前中睡的剑待皆测动核棉酸踩互捎补受序殖列岁杂假交刷,丹可悬对鼻核钓酸漂进段行登定雹性范、视定夫位奴和宏相除对摆定拘量掏分衡析践。4封83.阻核医酸萝酶S走1保测护掩分招析菌法(箱n估u单c吗l瓜e售a塑s叙e乔S泛1串p埋r附o乌t冲e叮c他t零i耐o为n箭a吗s史s弹a秤y)单调链D商N猴A探提针与冤待培测R台N兴A形迅成D场N彼A乏/缸R僵N反A杂完交坡双泄链援,矿加题入让核瘦酸么酶S合1专州一颜性妻地涂降吉解蹈未宏形搬成棋杂承交漏体姥的D者N压A或R累N屈A单磨链渴,D方N躲A厚/启R竖N只A杂脑交浅双无链粮则攻受请到顶保演护香而席不猾被四降午解正。4牲94.R毅N绢A酶棒保允护盐分目析神法(R泰N差a懒s咐e参p猪r怪o袋t岛e民c孙t肥i杜o法n涝a绢s盘s胖a景y,R蜜P剂A)5弟0R崖P夜A基毁本长程摄序寨:●待蒙测R核N敬A的救分邮离●体毒外勤转堤录料标编记R竟N葡A探乓针●待煎测R香N饿A与守探妹针R窝N炭A进慨行打液纳相隙杂避交●R轿N咽A酶符消宣化●不兼同赏大犹小浙杂罩交问片吓段腔凝全胶想电励泳匪分呢离5蚀1三货、搅聚模合芒酶没链绍式榜反剩应(工P唇o衔l垃y莫m位e擦r哗a切s伯e柏C彻h民a僚i便n提R侨e调a霜c街t寨i浅o猾n症,踪蝶P叼C束R时)(淹一习)P捡C埋R技旗术俩原集理(吓二字)玩耐防热D稼N桶A聚测合使酶(鸦三灰)P椒C妇R引企物鼓及证设县计个原拒则(石四诱)P蜓C帐R条嗽件党的劫优芝化(沸五仆)P虎C踩R改姥进瞒技槐术(摄六尊)感其曾它P亏C钳R技欲术5治2聚谈合妹酶灯链置式俗反剃应(聚P弱C沾R柳)筑:(现一属)P劝C阅R技军术搬原浩理

Mullis

K.

1985年发明的一种模拟天然DNA复制过程的核酸体外扩增技术。

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