第7章-茎尖培养和脱毒快繁技术课件

第七章茎尖培养和脱毒、快繁技术7.1茎尖培养：7.2脱毒技术：7.3快速繁殖技术第七章茎尖培养和脱毒、快繁技术：7.1茎尖培养茎尖培养的概念茎尖培养的应用：3. 茎尖培养的方法7.1茎尖培养茎尖培养的概念7.1茎尖培养茎尖培养的概念：茎尖分生组织培养：（meristem）,不带叶原基，<250um；茎尖培养：(shoottip),带1-3个叶原基，100-1000um；芽培养：(shoot)，>1mm。2.茎尖培养的应用：形态建成研究：茎尖分生组织无病株生产：茎尖营养繁殖：芽培养7.1茎尖培养茎尖培养技术：材料消毒：茎尖分离：培养方法：对培养基和培养条件的要求：7.1茎尖培养茎尖培养技术：材料消毒：在温室种植或田间种植的健康植株上取枝条，必要时母株可用杀菌剂处理；在实验室切取2-3cm长的芽，去掉较大的叶片，进行常规的表面灭菌；7.1茎尖培养茎尖培养技术：茎尖分离：将灭菌的芽置放有湿滤纸的无菌培养皿中，置体视显微镜下，依次用镊子或解剖刀剥去叶片直至露出生长点，用锋利的解剖刀片把带或不带叶原基的分生组织切下来，直接接种到培养基上；7.1茎尖培养茎尖培养技术：培养方法：固体培养、液体纸桥培养（易愈伤化时）7.1茎尖培养茎尖培养技术：对培养基和培养条件的要求：一般可用MS培养基，加少量的生长素（不用2,4-D）和细胞分裂素；GA3有时对抑制愈伤等有一定的效果。7.1茎尖培养脱毒苗培育的意义：脱毒原理：茎尖培养脱毒技术和程序：病毒检测：几种植物的脱毒技术7.2脱毒技术：脱毒苗培育的意义：是无性繁殖作物消除病毒的有效手段：病毒一般不能通过种子传播到下一代，所以无性繁殖植物易受病毒的侵害，造成产量品质的下降；脱毒苗一般可提高产量30-70%。7.2脱毒技术：脱毒原理：热处理：使病毒钝化，可在活体进行，如香石竹在38度处理2个月可消除茎内所有病毒；茎尖培养：病毒在体内的分布不均匀，顶端分生组织一般不含病毒（维管系统缺乏、细胞分裂速度快、其他的抑制机制）；两者结合可以提高效果；愈伤组织培养7.2脱毒技术：茎尖培养脱毒技术和程序：外植体的分离：2-3cm新梢，去掉大叶片，灭菌后，在解剖镜下切取带1-2个叶原基的茎尖；培养方法：MS＋BA0.5＋NAA0.05,3-4月，继代3-4次，少部分长出芽；结合热处理脱毒：先热处理植株，取1mm的茎尖培养；试管苗热处理；结合化学疗法脱毒：如抗病毒制剂Virazole可以抑制病毒复制；7.2脱毒技术：病毒检测：经过茎尖培养的植物不一定全是无毒的，需要经过严格的鉴定才能用材料消毒：指示植物法（indicator）：抗血清鉴定法：酶联免疫法(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA):电镜法：7.2脱毒技术：病毒检测指示植物法（indicator）：提取脱毒苗的汁液，接种（汁液接种、芽嫁接等）到能产生明显的典型症状的别种植物（指示植物）上，根据接种后指示植物的表现确定脱毒是否彻底。指示植物的选择：1.对特定病毒敏感，且症状表现明显；3.本身无毒（如种子繁殖）；2.可常年栽培；常用：千日红、笕色藜、野生马铃薯、曼陀罗、心叶烟等。7.2脱毒技术：病毒检测：抗血清鉴定法：用纯化的病毒注射动物，在动物的血清中产生抗体。抗原与抗体之间存在十分特异的凝集和沉淀反应。已知病毒的抗血清可以用来鉴定这种病毒的存在与否。试管沉淀反应、点滴沉淀实验、凝聚试验等。7.2脱毒技术：病毒检测：酶联免疫法(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA):在血清法的基础上，结合酶反应发展起来。在抗体上带上某种酶，抗原和抗体结合成的免疫复合物就有了酶活性，在反应体系中加入酶底物，底物在酶的催化下，形成有色反应物。从而使检测的灵敏度大大提高。7.2脱毒技术：病毒检测：电镜法：用电镜直接观察病毒颗粒，通过病毒颗粒的形态直接鉴定病毒的存在。比较快速、可靠；但需要电镜和样本制备技术。7.2脱毒技术：几种植物的脱毒技术马铃薯、甘薯、甘蔗、苹果、草莓、柑桔、香蕉7.2脱毒技术：试管苗无性繁殖的意义：常用的快繁类型及特点：快繁的一般步骤：提高试管苗繁殖速度的措施：种苗繁殖体系7.3快速繁殖技术（micropropagation）试管苗无性繁殖的意义：与脱毒技术结合，生产无毒苗原种；苹果、桃子、枣、大蒜、康乃馨、唐菖蒲、加快果树、花卉、林木、药材等繁殖系数低的植物优良品种的繁殖速度；月季、杜鹃（扦插难生根）是兰花唯一的大规模无性繁殖方法；为一些不能进行常规繁殖的植物材料提供了新的繁殖方法。如雄性不育系（如大白菜）、自交系、和杂交种（杂种优势固定）、雄株（石刁柏，芦笋）、三倍体无籽西瓜、7.3快速繁殖技术（micropropagation）常用的快繁类型及特点：无菌短枝型：丛生芽增殖型：器官发生型：胚状体发生型：原球茎型：7.3快速繁殖技术（micropropagation）常用的快繁类型及特点：无菌短枝型：节培法、微型扦插法。将待繁殖的材料剪成带一叶的单芽茎段，转入成苗培养基，成苗后再剪成带一叶的单芽茎段，继代成苗。遗传稳定。丛生芽增殖型：茎尖或初代培养的芽，在适宜的培养基上诱导，不断发生腋芽，而成丛芽；最后生根成苗。遗传稳定。7.3快速繁殖技术（micropropagation）常用的快繁类型及特点：器官发生型：从无芽组织直接诱导不定芽，或诱导出愈伤组织后，再在从愈伤组织上诱导不定芽。易变异。胚状体发生型：从愈伤组织诱导胚状体，繁殖速度快，但成功的事例不多。易变异。可以制作人工种子。7.3快速繁殖技术（micropropagation）常用的快繁类型及特点：原球茎型：兰花的茎尖或腋芽在组织培养的条件下可直接产生原球茎。原球茎是一种类胚组织，可以继代增殖成新的原球茎，控制条件也很容易分化成植株。7.3快速繁殖技术（micropropagation）快繁的一般步骤：无性繁殖系的建立：试管苗中间繁殖体的增殖：试管苗的壮苗与生根：试管苗的出瓶种植与苗期管理：7.3快速繁殖技术（micropropagation）快繁的一般步骤：无性繁殖系的建立：从外植体接种到得到第一批无菌材料（芽、苗、胚状体、原球茎等）。包括根据不同的植物特性，选择快繁类型和外植体的种类；外植体灭菌、接种、培养；外植体生长分化出芽或原球茎等。7.3快速繁殖技术（micropropagation）快繁的一般步骤：试管苗中间繁殖体的增殖：以芽的增殖为主，可以不考虑根的生长。快繁类型不同中间繁殖体也不同，要使快繁达到一定的速度，中间繁殖体的增殖速度平均要每月3-4倍。如无菌短枝型的增殖，接种一个腋芽，一个月后要长成至少带3-4个节的短枝出来。器官发生型和胚状体发生型的增殖在愈伤阶段，其过程不宜过长，以防产生过多的不利变异。中间繁殖体增殖到一定的规模，就可以分流一部分材料转入壮苗和生根培养。7.3快速繁殖技术（micropropagation）快繁的一般步骤：试管苗的壮苗与生根：一般要分成单苗，转移到盐浓度较低、不含细胞分裂素，含低浓度生长素的生根壮苗培养基，至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。问题：不易生根（延长时间、继代）；易生根：壮苗阶段不加生长素，试管外生根可减少费用；特殊方法：如马铃薯的小球茎法。7.3快速繁殖技术（micropropagation）快繁的一般步骤：试管苗的出瓶种植与苗期管理：（壮苗培养；开口锻炼；选择介质；逐步过渡）水分平衡介质适宜（水培、固培）养分充足防止菌类光温合适7.3快速繁殖技术（micropropagation）提高试管苗繁殖速度的措施：选择合适的繁殖途径改良培养基：激素（腋芽、不定芽、胚状体）等；改良培养条件：温、光、湿度、气体（有利气体、有害气体）7.