实验一植物组织总DNA的提取及DNA的浓度测定学时

实验十一植物组织总DNA的提取及DNA的浓度测定

掌握用CTAB法提取植物总DNA的方法和基本原理。学习利用紫外分光光度法测定DNA溶液的浓度。一、实验目的二、实验原理

通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。

CTAB,SDS等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入异丙醇或乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中，即得植物总DNA溶液。之后可加入RNA酶降解其中的RNA，再用氯仿除去RNA酶，得到较纯的DNA制剂。D矿N辈A的破吸什收桂光杜谱明峰熄在2计6揪0链n超m处候，耗据卖计卵算材，朗测切定赏此咱波易长翼下便D怖N刻A厉溶葬液遣的醉O翁D盒值跌，仍当羞O蒸D2快6毛0=缴1阿时糕，天双崇链面D更N役A眠含掘量转约待为5聋0且µ孕g视/歌m站l，伶据楚此辽可职用驼紫苍外奸分帮光董光筋度刷计坝测垄定孝溶除液料中质D满N造A杨含生量辽。由帽于蛋英白境质的先吸跃收要峰激在2轮8恐0铸n糖m处耕，纯在仙测增定贝D季N物A夺含梯量贸时赢，罗还蜘常恋计垮算O零D2涛6扑0/琴O荷D2搅8缴0之载值潮，细如线该碍值逝为1爽.赢8萌-牺2跳.装0时受，俘认眠为板已银达茅到斤较由高兽的延纯欲度己，耗如除低并于黎此税值么，贵表巷明衬其萄内劣含烘杂字质群较瞒多粱，甲可牵能荒影岁响纤酶填切乌反剪应利。水箱稻狭品简种歉的级幼香苗易叶是片三宝、控实顽验迷材伞料四适、欢实跑验棚器虎具训、鞠药喇品光试尺剂水没浴积锅财，幕研劳钵俭，嫩微遗量罪移厨液纳器领，厉枪秤头侦，练离微心陕管省，款台柴式块离抽心弟机萌，织液依氮串，症恒胃温危箱裂，替标核签击纸复，毫紫精外境分柔光咸光意度熟计寇，懒磁席力脏搅煤拌着机扛，裹剪韵刀赛等肝。2对%爆C料T宅A旅B蒙抽卖提谈缓牵冲律溶屋液继，膊异江丙店醇思,突氯摩仿梢-组异游戊命醇浸等C痕T事A姿B宫法诱流灵程荒图植物材料裂解液上层溶液液氮研磨抽提细胞裂解干燥溶解离心洗涤异丙醇沉淀DNA溶液五衰、斤实朵验子方幸法(歌1辜)邻2水%客C炊T奋A嫩B序抽赤提拾缓赠冲宵液位在做6蒙5标℃双水扛浴案中惑预艳热拦。(申2墨)独取峡少昆量柏叶平片嘱（晕约愚0辈.鸣2厚g貌）伪置赛于闪研烤钵芬中城，差用脚液送氮版磨掘至陶粉美状环；(婶3凭)唤在摸液居氮问挥陈发盘将富尽询而木植胁物讽组白织眉尚蹲未销解睛冻撤时呀迅海即烈加毛入乔7华0定0批µ艺l填的毁2肢%冶C恭T半A配B晒抽协提酬缓目冲绑液亚，屿轻遣轻压搅傍动哄；(蝇4外)旧将容磨陪碎的液留分秋倒控入显1柏.押5搅m荣l线的圣灭大菌国离桨心慨管侨中梢，聚磨纷碎祥液邻的甲高著度污约越占偏管蜓的条三芦分雄之鹅二作；(裕5抖)尼置搬于俱6监5万℃屡的坐水拉浴骆槽脆或种恒瓦温捎箱容中槐，梢每浩隔韵1拥0董m鬼i纯n轻侦轻广摇正动，暂4枯0犁m以i嗓n肢后畏取散出山；1宫.届D丘N皆A肿的挤提落取（扑6赵）顿冷视却络2乒m存i灵n怎后瘦，集加争入脊氯紫仿榨-仪异茄戊芬醇怕（甘2岔4饺：强1络）撤至反满米管辽，猛剧泼烈忙振促荡坦2弊~元3不m裂i尤n坑，绳使鞋两撒者混削合终均逮匀；（逮7封）业放什入碧离冈心呀机改中臭1劣0示0宝0判0象r小p屋m梢离太心张1砖0客m混i妨n蓬，安与察此晕同晕时严，晕将陕6注0瓣0达µ顾l努的检异圾丙葡醇型加兴入栋另精一骄新脸的饼灭外菌守离淋心踏管陡中锹；（疯8级）服用央移冰液扫器乡丰轻棚轻喉地额吸投取按上都清倘夜险，前转侦入际含毒有蓬异猫丙睁醇腹的溜离办心荷管粮内岸，等将杀离轧心街管输慢懂慢丸上舍下棚摇放动册3掘0擦s随e莫c撒，舰使颂异帝丙苗醇鬼与迹水猫层通充里分界混同合筑至纺能骨见木到毙D芬N悔A颠絮座状粮物盲；（洒9疤）理1鼻0兄0敞0酒0胞r常p丛m葵离躺心喝1前m尼i断n孩后沿，雾立轨即玩倒劫掉枪液传体绿，抚注勾意鞠勿胞将览白伏色走D夜N傲A肝沉伍淀施倒赶出盗，周将过离滨心券管软倒傍立断于峡铺艺开目的政纸垄巾旁上狮；（孙1字0光）刚6移0婚s敲e辽c居后楼，妄直聋立识离辨心报管挽，短加渡入说7胆2悄0挽µ叹l缓的芬7伴5葵%疏乙颈醇穿及能8饲0似µ哗l葬5锈M近的圈醋膀酸辆钠懂，轻屋轻烫转件动，防用纪手近指润弹翠管晋尖胃，扑使沃沉唉淀旦与护管内底法的经D修N宴A矿块束状往物俘浮睁游谢于霞液伐体反中崖；（滤1雾1列）逮放摊置咳3降0抱m骆i滨n董，杯使姜D烧N僵A罩块污状逃物逃的将不偏纯遭物泼溶蜓解女；（澡1树2柜）着1困0添0弦0惯0雪r痰p峡m革离愁心塘1耕m疤i爹n行后烧，览倒铅掉明液弓体币，办再拐加巾入抹8耳0经0天µ挡l扩7想5智%寨的历乙集醇乐，发将息D岩N献A俊再亩洗狮3泊0照m场i算n蛛；（冤1荐3酿）存1豪0炮0存0子0铁r暮p织m衰离娱心链3促0披s楚e芒c随后展，粱立价即茂倒将掉满液锦体浇，制将总离张心基管骑倒唐立挖于捞铺所开欺的方纸耕巾弄上小；年数趋分鸭钟际后墨，震直始立掠离队心膛管征，桑干拥燥嫂D狭N扣A法（杨自凤然嚼风搭干卸或鸡用芳风冤筒颤吹苏干步）寺；（雾1闭4前）狗加责入朱5羞0矩µ柿l风0忧.用5亿×略T苹E向(替含敬R芦N久a宇s冈e牺)坦缓歌冲磨液蹄，孔使辈D诞N息A亡溶而解盯，赢置嚼于残3悔7互℃冻恒指温赴箱慈约洞1控5民h殿，浅使脑R女N馅A问消毒解牲；（请1皂5钻）伤置颗于具-避2雪0拐℃闲保顽存福、括备酸用火。称绍取选样救品街，叙液扫氮唱研善磨塘，扛加饲入暗预睁热命的脏(6败5℃)屯C学T拆A疯B汉及β召-巯展基强乙色醇保蛾温亭1轿h欧,就期结间雪不沸停晕的夫摇维均吸喘取震上过清馅液愿,榆移谅至参新吨的弱离蓬心臂管斥中劈燕,挂加捐入杨等讽体辨积怪氯键仿思：槽异黑戊袜醇晨（策2潜4洽：袖1敬）融，易轻冷缓慈颠栋倒冒混快匀窝,茶1蛙0臭0息0差0珍r课p忧m搜,气1揪0倚m徒i饲n取哲上醉清世液蜓，千移堤至百新洁的章离纱心枪管膀中俘,总加鞋等偷体盒积机氯饺仿派：毯异景戊舒醇德,滴颠奋倒暖混斥匀货,锣1符0填0淘0穴0蜂r收p乓m禽,夜1苗0柴m弯i触n取为上稼清馆液珍，贺加鸣入长0烦.赤6呢-赌0置.糊7狐V烧的丈异梁丙诸醇败（雾预诵冷渴）背，疯后屋4恳℃廊/阁-造2绘0仇℃蔬保祖温掘沉狱淀1秧0棋0驼0衣0叫r肠p晨m愧,皱1胀0骆m雾i驴n朵离启心指取厦沉献淀修，纽奉7肾0粮%放乙移醇钢清压洗巩两朱次融，赠吹争干用号T返E蒜溶爸解窑D劝N锡A备,娘然适后协低踏温待保训存取趋提谱取谣的脸D稠N咸A目溶滩液船2µ帅l锅(手约治1扯0宝0扎-概2淹0龙0艳n康g血)会至愤一御干际净踏的胆离答心啊管僵，晴加格入迁1士9苗8爸µ递l编蒸置馏城水瓜稀括释超。酸先絮2欠0感0矩µ盛l奴蒸咱馏关水收至南比掀色劈燕杯回，画进顿行抗紫挥外蓄光塑空发白义测茫定何，批然另后剖倒赤掉解蒸寻馏耳水旁，停加盲入榜2颠0告0斥µ刃l台已种稀咬释租的昏D袭N拔A咏溶李液纺，私测宵定镰2村6袄0润n障m净及雄2浴8河0队n意m哥的糠光布吸鹅收篇值损（杏O垂D2涛6义0及默O壁D2线8欺0）晨，万计马算牌D窝N示A啊浓贫度童及蓬O哀D2塑6霞0/任O伐D2真8膊0比汤值炒。计疗算后公浅式选如细下妈:d范s余D姥N良A锤=狮5碧0咳×念(壁O挤D俩2嫁6匀0喇)坏×他稀皇释牵倍恶数以洒上拥浓蜘度雄单疮位侍为染g/慈m鸣l2旧.细D嫩N网A贝浓岸度匹的寄测挥定（思1张）毛叶旷片易磨逮得越农细齿越荒好。（角2残）缎移嚼液幼器屑的耀使负用萝。（额3雹）须由佛于聪植竹物约细掀胞敢中漠含椒有港大宵量挨的D涨N置A机酶，屿因迎