中药制剂的检查1课件

第四章中药制剂的检查第一节中药制剂中的杂质检查一、杂质及其来源中药制剂评价：首先是效力及其副作用；其次是所含杂质的程度及其影响。

杂质的分类：一般杂质，检查方法均在药典附录中加以规定。特殊杂质，在药典中列入个别制剂的检查项下。

杂质来源：一是由中药材原料中带入；二是在生产制备过程中引入；三是贮存过程中，制剂的理化性质改变而产生。

二、杂质限量的控制药典中规定的杂质检查均为限量(或限度)检查(LimitTest)，杂质限量是指药物中所含杂质的最大允许量。限量检查：取一定量与被检杂质相同的纯物质或其它对照品配制成标准溶液，与一定量供试药物的溶液，在相同处理条件下，比较反应结果，从而确定杂质限量是否超过规定。三、一般杂质的检查方法(一)重金属检查法重金属是指在一定条件下的溶液中，能与硫代乙酰胺或硫化钠作用，生成不溶性硫化物的金属杂质。在酸性溶液中检查重金属，以硫代乙酰胺作为显色剂；在碱性溶液中，则用硫化钠试剂作为显色剂；凡溶于碱不溶于稀酸的药物，均在碱性溶液中以硫化钠试液作为显色剂。

标准铅溶液的制备称取硝酸铅0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液lOml，置lOOml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于lOug的Pb)。

配制与贮存用的玻璃容器均不得含铅。第一法除另有规定外，取25ml纳氏比色管两支，甲管中加一定量标准铅溶液与醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml后，加水或该药品项下规定的溶剂稀释成25ml，乙管中加入该药品项下规定的方法制成的供试液25ml；若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。

供试品如含高铁盐影响重金属检查时，可取该药品项下规定方法制成的供试液，加抗坏血酸0.5-1.0g，并在对照液中加入相同量的抗坏血酸，再照上述方法检查。

配制供试品溶液时，如使用的盐酸超过1.0ml(或与盐酸1.0ml相当的稀盐酸)，氨试液超过2ml，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照液中应取同样同量的试剂量瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加一定量标准铅溶液，再用水稀释成25ml第二法除另有规定外，取炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后(或取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5～1.0ml，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500～600℃炽灼使完全灰化)，放冷，加盐酸2m1，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加水稀释成25ml，另取配制供试品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水15ml，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成25ml；照第一法检查即得。

第三法除另有规定外，取供试品适量，加氢氧化钠试液5ml与水20ml溶解后，置纳氏比色管中，加硫化钠试液5滴，摇匀，与一定量的标准铅溶液同样处理后的颜色比较，不得更深。

第四法标准铅斑法见“中药制剂分析”P98-99。

(二)砷盐检查法标准砷溶液的制备称取三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每lml相当于1ug的As)。

1．古蔡法

(1)原理：采用锌和酸作用产生的初生态氢与供试品中微量砷盐化合物反应生成挥发性砷化氢，再与溴化汞或氧化汞试纸作用生成黄色或棕黄色砷斑。比较供试品与标准砷溶液在同一条件下所显的砷斑的颜色深浅，以测得供试品的含砷限度。反应式如下：

As033-

+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H20As033-+4Zn+llH+→AsH3↑

+4Zn2++4H20产生砷化氢与溴化汞试纸作用

AsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3(黄色)2As(HgBr)3+AsH3→3AsH(HgBr)2(棕色)

As(HgBr)3+AsH3→3HBr+As2Hg3(黑色)

(2)仪器装置

A为100ml标准磨口锥形瓶，B为标准磨口塞，C为导气管(外径8.0mm，内径6.0mm)，长约180mm，D为有机玻璃旋塞，其上部为圆形平面，中央有一孔径与C内径一致的圆孔，其下部孔径与C的外径相适应，将C的顶端套入D下部孔内，粘合固定，E为中央具有圆孔(孔径6.0mm)的有机玻璃旋塞盖，与D紧密吻合。测试时，于C中装入醋酸铅棉花60mg(装管高度为60—80mm)，再于D的顶端平面上放一片溴化汞试纸，盖上旋塞盖E并旋紧，即得。

(3)标准砷斑的制备精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将照上法装妥的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置25～40℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞纸试，即得。若供试品需经有机破坏后再行检砷，则应取标准砷溶液代替供试品，照各药品项下规定的方法同法处理后，依法制备标准砷斑。

（4）检查法取照各药品项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。

（5）注意事项

中国药典中规定砷斑为2ugAs(即取2ml标准砷液)。供试品中砷的限度各有不同，可按规定，改变供试品的取用量，来与标准砷斑比较。但不宜改变标准砷的量(如未指明时，一般常以2ml标准砷液)。碘化钾试液不得超过10日，酸性氯化亚锡不得超过3个月，锌粒应无砷，以能通过一号筛的细粒为宜。药典采用碱破坏法—石灰法：取一定量的供试品，加入等量的无砷氢氧化钙混匀后，加水湿润，烘干，在小火上小心炽灼至烟雾除尽，移入高温炉中在500～600℃炽灼至灰化，取出放冷，加蒸馏水5ml，再缓缓加入盐酸5ml及浓溴液数滴，置水浴上加热至溶液中的红色溴驱尽，滴加氯化亚锡试液数滴，再全部转入测砷瓶中，一般不含硫的检品可不加浓溴液，只需加盐酸5ml即转入测砷瓶中，依法测定，作空白试验校正。操作注意点：炽灼温度以600℃左右较为合适；一定要灰化完全。

2.二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）

1）原理利用砷化氢与Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中银还原为红色的胶态银，其反应如下：

AsH3+6Ag-DDC→AsAg3·3Ag-DDC+3HDDCAsAg3·3Ag-DDC+3C5H5N+3HDDC→Ag(DDC)3+6Ag+3C5H5N-HDDC

2）仪器装置

A为100ml标准磨口锥形瓶，B为中空的标准磨口塞，上连导气管C(一端的外径为8mm，内径为6mm，另一端长180mm，外径4mm，内径1.6mm，尖端内径为lmm)。D为平底玻璃管(180mm，内径10mm，于5.0ml处有一刻度)。测试时，于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg(装管高度约80mm)，并于D管中精密加入Ag-DDC试液5ml。

标准砷对照液的制备精密量取标准砷溶液5ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C与A瓶密塞，使生成的砷化氢气体导入D管中，并将A瓶置25～40℃水浴中反应45分钟，取出D管，添加氯仿至刻度，混匀，即得。若供试品需经有机破坏后再行检砷，则应取标准砷溶液代替供试品，照各药品项下规定的方法同法处理后，依法制备标准砷对照液。

检查法取照各药品项下规定方法制成的供试液，置A瓶中，照标准砷对照液的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作。将所得溶液与标准砷对照液同置白色背景上，从D管上方向下观察、比较，所得溶液的颜色不得比标准砷对照液更深。必要时，可将所得溶液转移至lcm吸收池中，用适宜的分光光度计或比色计在510nm波长处以二乙基二硫代氨基甲酸银试液作空白，测定吸收度，与标准砷对照液按同法测得的吸收度比较，即得。(三）铁盐检查法

标准铁溶液的制备称取硫酸铁铵0.863g，置1000ml量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于10ug的Fe)。

检查法除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml，移置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35ml后，加30％硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液(取各药品项下规定量的标准铁溶液，置50ml纳氏比色管中，加水使成25ml，……)比较，即得。如供试管与对照管色调不一致时，可分别移至分液漏斗中，各加正丁醇20ml提取，分层后，将正丁醇层移置50ml纳氏比色管中，再用正丁醇稀释至25ml，比较，即得。

第二节药典规定中药制剂的检查项目

一、干燥失重测定法取供试品，混合均匀（若供试品为较大结晶，应先迅速捣碎成2mm以下的小粒）。分取约1g或各药品项下规定重量，置与供试品同样条件下干燥至恒重的扁形称瓶中，精密称定，除另有规定外，照各药品项下规定的条件干燥至恒重。从减失的重量和取样量计算供试品的干燥失重。供试品干燥时，应平铺在扁形称量瓶中，厚度不可超过5mm，如为疏松物质，厚度不可超过10mm，干燥时应将瓶盖取下，置于称量瓶旁，或将瓶盖半开进行干燥；取出时，须将瓶盖好。在每次干燥后应先置干燥器内放冷至室温，然后称定重量。如供试品未达到规定的干燥温度即融化时，应先将供试品置较低的温度中，干燥至大部分水份除去后，再按规定条件下干燥。当用减压干燥器时，除另有规定外，压力应在2.67kPa以下；干燥器中常用的干燥剂为无水氯化钙、硅胶或五氧化二磷，减压干燥器中常用的干燥剂为五氧化二磷。二、水分测定法

中国药典一部收载三种方法：烘干法，甲苯法，减压干燥法。药典规定，一般将供试品先破碎成直径不超过3mm的颗粒或碎片(破碎时不得用高速粉碎机)。直径和长度在3mm以下者不可破碎。如使用减压干燥法需先经二号筛。

1．烘干法本法适用于不含或含少量挥发性成分的药品。取供试品2～5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松样品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100～105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量。计算供试品中含有水分的百分数。

2．甲苯法本法适用于含挥发性成分的药材。

仪器装置如图。A为500mL的短颈圆底烧瓶，B为水分测定管；C为直形冷凝管，外管长40cm。使用前，全部仪器应清洁，并置烘箱中烘干。

测定法：取供试品适量(约相当于含水量1～4mL)精密称定，置A瓶中，加甲苯约200mL，必要时加入玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满B管的狭细部分。将A瓶置电热套中或其它适当方法缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2滴。待水分完全馏出，将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再用饱蘸甲苯的长刷或其他适当方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水粘附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离。检读水量，并计算成供试品中含有水分的百分数。

3．减压干燥法本法适用于含有挥发性成分的贵重药品。先取直径12cm的培养皿，加入新鲜五氧化二磷干燥剂适量，使铺成0.5～1cm的厚度，放入直径30cm的减压干燥器中。然后取供试品2-4g，混合均匀。分取约0.5-1g，置已在与供试品相同条件下干燥并称重的瓶中，精密称定，打开瓶盖，放入上述减压干燥器中，减压至2.67kPa以下持续半小时，室温放置24小时，在减压干燥器出口连接新鲜无水氯化钙干燥管，打开活塞，待内外压一致，关闭活塞，打开干燥器，盖上瓶盖，取出称量瓶迅速精密称定重量，计算供试品中含有水分的百分数。三、灰分测定法

1.总灰分测定法测定前先将供试品称取适量粉碎，使其能通过2号筛，将粉末混合均匀后，称取供试品2～3g(如需测定酸不溶性灰分，可取供试品3～5g)，置于炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(准确至0.01g)，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全炭化并至恒重，根据残渣重量，即可计算供试品中含灰分的百分数。如供试品不易灰化，可将坩埚放冷，加热水或10％硝酸铵溶液2mL；使残渣湿润，然后置水浴上蒸干，残渣照前法炽灼至坩埚内容物完全灰化。

2.酸不溶性灰分测定法取上项所得灰分，在坩埚中小心加入稀盐酸10mL，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5mL冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中含酸不溶性灰分的百分数。

四、炽灼残渣检查法

取供试品1.0～2.0g或各药品项下规定的重量，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，除另有规定外，加硫酸0.5～1mL使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在700～800℃使完全灰化，移置干燥器内，放冷，精密称定后，再在700～800℃炽灼至恒重，即可。如需将残渣留作重金属检查，则炽灼温度必须控制在500～600℃。

五、乙醇量测定法本法系用气相色谱法测定各种制剂中在20℃时含有乙醇的容量百分数。除另有规定外，按下列方法测定。

色谱条件与系统适用性试验用直径为0.25～0.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为载体，柱温为120～150℃；另精密量取无水乙醇4、5、6ml，分别精密加入正丙醇(内标物)5ml，加水稀释成100ml，混匀(必要时可进一步稀释)，照气相色谱法测定，应符合下列要求：(1)用正丙醇计算的理论板数应大于700；(2)乙醇和正丙醇两峰的分离度应大于2；(3)上述3份溶液各注样5次，所得15个校正因子的变异系数不得大于2.0％。

标准溶液的制备精密量取恒温至20℃的无水乙醇和正丙醇各5ml，加水稀释成lOOml，混匀，即得。

供试溶液的制备精密量取恒温至20℃的供试品适量(相当于乙醇约5m1)和正丙醇5ml，加水稀释成lOOml，混匀，即得。上述两溶液必要时可进一步稀释。

测定法取标准溶液和供试溶液适量，分别连续注样3次，并计算出校正因子和供试品的乙醇含量，取3次计算的平均值作为结果。

附注

(1)在不含内标物质的供试溶液的色谱图中，与内标物质峰相应的位置处应不出现杂质峰，(2)标准溶液和供试溶液各连续3次注样所得各次校正因子和乙醇含量与其相应的平均值的相对偏差，均不得大于1.5％，否则应重新测定。(3)选用其他载体时，系统适用性试验必须符合本法规定。六、相对密度测定法

相对密度系指在共同特定的条件下，某物质的密度与水的密度之比。除另有规定外，温度为20℃。

液体药品的相对密度，一般用比重瓶进行测定，测定易挥发的液体的相对密度时，可用韦氏比重秤进行测定。

比重瓶法(1)取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，装满供试品(温度应低于20℃或各药品项下规定的温度)后，装上温度计(瓶中应无气泡)，置20℃(或各药品项下规定的温度)的水浴中放置10-20分钟，使内容物的温度达到20℃(或各药品项下规定的温度)，用滤纸除去溢出侧管的液体，立即盖上罩。然后将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外面擦干，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品的重量后，将供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量，按下式计算，即得。供试品的相对密度＝供试品重量/水重量

(2)取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，装满供试品(温度应低于20℃或各药品项下规定的温度)后，置20℃(或各药品项下规定的温度)的水浴中，放置10～20分钟，插入中心有毛细孔的瓶塞，使过多的液体从塞孔溢出，并用滤纸将瓶塞顶端擦干，照上述(1)法，自“然后将比重瓶自水浴中取出”起测定，即得。

韦氏比重秤法取20℃时相对密度为1的韦氏比重秤，用新沸过的冷水将所附玻璃圆筒装至八分满，置20℃(或各药品项下规定的温度)的水浴中，搅动玻璃圆筒内的水，调节温度至20℃(或各药品项下规定的温度)，将悬于秤端的玻璃锤浸入圆筒内的水中，秤臂右端悬挂游码于1.0000处，调节秤臂左端平衡用的螺旋使平衡，然后将玻璃圆筒内的水倾去，拭干，装入供试液至相同的高度，并用同法调节温度后，再把拭干的玻璃锤浸入供试液中，调节秤臂上游码的数量与位置使平衡，读取数值，即得供试品的相对密度。

如该比重秤系在4℃时相对密度为1，则用水校准时游码应悬挂于0.9982处，并应将在20℃测得的供试品相对密度除以0.9982。第三节黄曲霉毒素B1检查法黄曲霉毒素的测定方法，目前采用薄层色谱法、微柱色谱法和薄层色谱结合荧光分光光度法，还采用高压液相色谱法测定。

一般采用薄层色谱法和微柱色谱法。

微柱法主要用作大批样品的筛选用。若微柱法测定结果发现毒素可能超过允许含量，紧接着应该做薄层色谱怯的确证实验。一、微柱法本法简便，快速，灵敏度为10μg/kg。主要做中药制剂中黄曲霉毒素筛选用，测得结果为黄曲霉毒素的总量。

1．原理将样品提取液通过氧化铝-硅镁型吸附剂填充的微柱，样品中的杂质被氧化铝吸附，黄曲霉毒素则被硅镁型吸附剂吸附。在紫外分析灯下观察荧光环与标准比较定量。

2.玻璃微柱管制法玻璃微柱管长12cm，内径0.4cm玻璃管。在微柱管下端塞入棉花一小团，使松紧适宜，作为支持物。依次从管的上口加入无水硫酸钠0.5cm，硅镁型吸附剂0.5cm，无水硫酸钠0.5cm，中性氧化铝2.5cm，无水硫酸钠1cm厚，再铺一层棉花。装管时，管要垂直放置在层析架上，每装一种试剂要轻轻敲击使之紧密。微柱管应在临用前装填或保存于干燥器中供用，以免减低活性，活化后可干燥保存3天。

3．黄曲霉毒素标准液①准确吸取标准贮备液适量于棕色具塞量筒中，用氯仿稀释至1.0ml含毒素B10.2μg。②准确吸取上述溶液适量，用氯仿分别稀释至1.0ml含黄曲霉毒素B10.005、0.01、0.025、0.05μg等四种浓度的标准液。

4.操作步骤

(1)样品处理：称取磨细并过20目筛的样品20g，置于250mL具塞锥形瓶中，加水4mL润湿样品后，加入氯仿40mL(为加水量的10倍)，振摇30分钟，加入10g无水硫酸钠脱水，过滤入50mL具塞锥形瓶中，滤液如混浊(含水)，可加入少许无水硫酸钠振摇匀，放置10分钟，此为样品提取液。

(2)微柱色谱：取上述制备的微柱6支，垂直插入微柱架上。一支加入样品提取液1.0mL(相当于样品0.5g)，4支分别加入含黄曲霉毒素B10.005、0.01、0.025、0.05μg的标准溶液各1.0mL(相当于样品管的浓度依次为10、20、50和100μg／kg)，一支微柱加入氯仿1.0mL作为空白管。当各管液面流至近上层棉花层时，立即加入1.0mL展开剂，加试剂及展开剂时，微柱管均要竖直，待展开剂流完后即可观察结果。

(3)观察结果与结论：将层析后的微柱置于365nm波长的紫外灯下，观察样品柱的硅镁型吸附剂层是否有荧光，并与空白柱比较定性，与标准各柱比较蓝色荧光强度即测得黄曲霉毒素含量。

二、双向展开法

1.原理样品中的黄曲霉毒素B1被提取，浓缩后在薄层板上点样。先用无水乙醚做横向展开，将干扰的杂质推到样品点的一侧而黄曲霉毒素B1留在点样处。然后再用丙酮氯仿混合液做纵向展开，黄曲霉毒素B1所在位置的杂质底色大大减少，因而有利于观察。

2.样品处理：称取经粉碎并过20目筛的样品20g于250mL具塞锥形瓶中，加正己烷或石油醚30mL和甲醇水溶液(55︰45)100mL，在瓶塞上涂一层水，盖严防漏。振荡30分钟，静止片刻，以脱脂棉过滤于分液漏斗中，待下层甲醇水溶液澄清后放出甲醇水溶液于另一具塞锥形瓶内。吸取此甲醇水溶液20mL(相当于样品4g)于另一125mL分液漏斗中，加氯仿20mL，振摇2分钟，静止分层后，使氯仿层通过颈部铺有少量脱脂棉及上面盛无水硫酸钠10g的小漏斗，过滤于50mL蒸发皿中，无水硫酸钠先用氯仿润湿。分液漏斗中再加氯仿5mL重复振摇提取，氯仿层一并滤于蒸发皿中。将蒸发皿放在通风处，于65℃水浴上通风挥干，置冰盒上充分冷却后，准确加入苯乙腈混合溶剂1.0mL。用带橡皮头滴管的管尖将残渣和溶剂充分混合，再用此滴管吸取上清液转于2mL具塞小瓶中。若溶液不够澄清，则离心或放置使澄清，上清液供薄层点样用。

3.定性试验：①点样，取薄层板3块，在距底边3cm的起始线上，滴加黄曲霉毒素B1标准液和样品处理液。在三块板的距左边缘0.8～1cm处，各滴加黄曲霉毒素B1标准溶液Ⅲ(0.04μg/mL)10μL，在距右边缘2.8-3cm处，各滴加样品液20μL；然后在第二块板的样品液点上，滴加黄曲霉毒素B1标准液Ⅱ(0.2μg/mL)10μL。在第三块板的样品液点上，滴加黄曲霉毒素B1标准液(0.04μg/mL)10μL。

②展开，将点好样的三块板的左边浸入展开槽内的无水乙醚中横向展开，至乙醚达到顶端后继续展开1分钟，取出挥干；再用丙酮氯仿混合液纵向展开至10cm以上。

③观察结果与评定，在紫外线分析灯下观察第一、二板，若第二板的第二点在黄曲霉毒素B1标准点的相应处出现最低检出量，而第一板的样品点在与第二板的相同位置上未出现荧光点，则样品中黄曲霉毒素B1含量在5μg／kg以下。

如果观察到第一板在与第二板的相同位置上出现荧光点，则应将第一板与第三板比较。看第三板上第二点与第一板上第二点的相同位置上的荧光点是否与黄曲霉毒素B1标准点重叠，再进行确证试验。

4.确证试验：另取两块薄层板，于第四、第五两板距左边缘0.8～1cm处各加黄曲霉毒素B1标准溶液(0.04μg／mL)10μL，三氟乙酸1滴。距左边缘2.8-3cm处，第四板滴加样品液20μL，三氟乙酸1滴，第五板滴加样品液20μL、黄曲霉毒素B1标准溶液(0.04μg/mL)10μL，三氟乙酸1滴。再用双向展开法展开后，观察样品液点是否产生与黄曲霉毒素B1标准点重叠的衍生物。观察时，可将第一板作为样品液的衍生物空白板。

5.稀释定量：

如果样品溶液黄曲霉毒素含量高，按单向展开法稀释定量操作。如果黄曲霉毒素B1含量低，稀释倍数小，在定量的纵向板上仍有杂质干扰，影响结果的判断时，可将板上需要判断的样品液点再分别做双向展开观察，以确定含量。第四节中药制剂的特殊杂质检查

特殊杂质的检查原则一般是利用药品和杂质的理化性质及生理作用的差异，采用物理的、化学的、药理的、微生物的方法来检查杂质。

一、土大黄甙的检查通常认为含有土大黄甙的大黄质量较次，1990年版中国药典大黄项下也规定检查土大黄甙。土大黄甙在紫外灯下观察呈亮蓝紫色荧光，此法简单但应注意假阳性的发生。

检查取本品粉末0.2g，加甲醇2mL，浸泡10分钟，放冷，取上清液10μL，点于滤纸上，以45％乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外灯(365nm)下检视，不得显持久的亮紫色荧光。

二、阿胶膏剂挥发性碱性物质的检查药典规定1