分解尿素的细菌分离与计算

专题2微生物的培养与应用课题2分解尿素的细菌的分离与计算课时重难点【重点】对土样的选取和选择培养基的配制。【难点】对分解尿素的细菌的计数。典型例题：1．下列关于分解尿素的细菌，说法正确的是（）A．以尿素作为唯一碳源B．能分解尿素的原因是能合成并分泌蛋白酶C．环境中含有大量的尿素诱导该细菌产生了分解尿素的特性D．以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后不会使酚红指示剂变红2．原油含有大量致癌的“多环芳烃”，分子结构十分稳定，有些细菌可以利用原油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解圈。某小组以如何筛选出能降解原油的菌株并投入除污为课题设计了有关实验。有关说法正确的是A．用于筛选目的菌株的培养基其主要特点是以原油（多环芳烃）为唯一碳源B．培养基配制完成之后需进行消毒处理C．在选择培养基上形成的菌落，即为能分解多环芳烃的目的菌种D．筛选出目的菌种后，可用平板划线法在培养基上进行接种和计数3．关于生物技术实践中的有关检验，不正确的是（）A．在果酒制作实验结束时要检验是否有酒精产生，正确的操作步骤是先在试管中加入适量的发酵液，然后再加入硫酸和重铬酸钾的混合液B．在微生物培养中，检验培养基是否被污染的方法是用一组不接种或接种无菌水的培养基与接种培养物的培养基一起培养C．检验以尿素为唯一氮源的培养是否分离出了分解尿素的细菌，方法是在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，则说明分离成功D．检验胡萝卜素纯度的方法是纸层析法，原理是不同的色素分子在层析液中的溶解度不同，故随层析液在滤纸上扩散的速度不同，若样品中有杂质，则会出现不同的色素点（带）4．尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制选择培养基时（）A．葡萄糖在培养基中越多越好B．尿素分解菌有固氮能力，故培养基中只需无机氮C．尿素在培养基中越少越好D．尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素为化合态氮5．下列生物学实验操作，能够顺利达到实验目的的是A．将果泥和果胶酶分装在不同试管中恒温处理后再混合，以探究果胶酶的最适温度B．洗涤红细胞时，需要加入五倍体积的蒸馏水C．土壤浸出液接种于牛肉膏蛋白胨培养基上以筛选出能分解尿素的细菌D．根据SDS—凝胶电泳的结果可判断蛋白质的分子量大小6．下列有关生物技术实践的叙述，不正确的是A．制作果醋时应不断通入无菌空气B．在土壤中分解尿素的细菌的分离和计数实验中，应采用平板划线法C．通过比色法来检测亚硝酸盐含量需要制备标准显色液D．饥饿时，胰高血糖素分泌量上升，促进肝糖原和肌糖原分解7．下列是以酵母菌为材料进行的实验，有关叙述错误的是（）A．探究酵母菌的呼吸方式，可用溴麝香草酚蓝检测产生的CO2B．用酵母菌发酵酿制果酒，选择酸性重铬酸钾检测产生的酒精C．探究酵母菌种群数量变化，应设空白对照排除无关变量干扰D．用稀释涂布平板法培养计数，应选择有30～300菌落数的平板8．【生物—选修1：生物技术实践】有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于培养基。（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即和。（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力。（4）通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、和。无菌技术要求实验操作应在附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。9．人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，培养基常用的灭菌方法有。（2）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养。在稀释土壤溶液的过程每一步都要在〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是，提供氮源的的是，琼脂的作用是。〖思考2〗该培养基对微生物（具有，不具有）选择作用。如果具有，其选择机制是。3．在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是。除此之外，也是测定微生物数量的常用方法。【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量4．采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于。通过统计，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是。〖思考4〗利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是。〖思考5〗第位同学的结果接近真实值。你认为这两位同学的实验需要改进的操作是。5．统计的菌落数比活菌的实际数目。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是菌落。因此，统计结果一般用来表示。6．设置对照的主要目的是。7．对照实验是指除了的条件外，其他条件都的实验。满足该条件的称为组，未满足该条件的称为组。（二）实验设计1．实验设计的内容包括、、和等。2．根据图示2－7填写以下实验流程：菌落计数菌落计数配制土壤溶液系列稀释涂布平板与培养3．土壤微生物主要分布在距地表cm的近中性土壤中，约为细菌。4．分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是，其目的是保证获得的平板。细菌稀释度为，放线菌稀释度为，真菌稀释度为。5．培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在℃培养1～2d，放线菌一般在℃培养5～7d，霉菌一般在℃的温度下培养3～4d。6．在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取时的记录作为结果，以防止因而导致遗漏菌落的数目。点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。7．菌落的特征包括等方面。〖思考8〗土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？8．实验过程(1)取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。(2)应在火焰旁称取土壤10g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。(3)在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。(4)实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。(5)为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先规划时间。（三）结果分析与评价1．对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助的方法。2．在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的将尿素分解成了。氨会使培养基的碱性，PH。因此，我们可以通过检测培养基变化来判断该化学反应是否发生。3．在以