苦橙不同部位挥发油成分及抗氧化与抗菌活性分析

γ￣萜品烯(.)ꎮ(２)苦橙３个部位挥发油表现出不同程度的抗氧化活性ꎬ其中苦橙幼果、叶及花的挥刘亚男ꎬ文雅丽ꎬ陈霞蔚ꎬ等ꎬ.苦橙不同部位挥发油成分及抗氧化与抗菌活性分析[Ｊ].广西植物ꎬ(６):苦橙不同部位挥发油成分及抗氧化与抗菌活性分析摘要:为较全面地研究苦橙(.)全植株挥发油成分及抗氧化与抗菌活性ꎬ该研究以其叶、花、幼果为材料ꎬ采用水蒸气蒸馏法()结合气相色谱－质谱(￣)联用技术分析其成分ꎬ并利用体外测试方法比较了三者的抗氧化与抗菌活性ꎮ结果表明:(１)从苦橙叶、花、幼果３个部位挥发油中共分离鉴定出种成分ꎬ３个部位的挥发油成分种类及含量存在一定差异ꎬ其中种为共有成分ꎮ从叶中鉴芳樟醇(.)和ｄ￣柠檬烯(.)ꎻ从幼果中鉴定出种挥发性成分ꎬ主要含有ｄ￣柠檬烯(.)和定出芳樟醇(.)和ｄ￣柠檬烯(.)ꎻ从幼果中鉴定出种挥发性成分ꎬ主要含有ｄ￣柠檬烯(.)和ꎬ幼果挥发油的抗氧化活性最好ꎮ(３)苦橙幼果挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌表现出的抗菌活性强于叶和花ꎮ该研究结果为苦橙叶、花及其幼果中挥发油的提取与利用提供了理论依据ꎮ∗:∗::.ꎮ广西植物卷的铃兰香味、清新的柠檬香味和柑橘味ꎬ广泛应用于香料、日化和食品等方面(ꎬ)ꎬ已进入美国食品香料和萃取物制造者协会()的食用香料名录ꎬ同时被«中国食品添加剂使用卫生标准»纳入允许食品香料ꎮ更为重要的是ꎬ从苦橙中的铃兰香味、清新的柠檬香味和柑橘味ꎬ广泛应用于香料、日化和食品等方面(ꎬ)ꎬ已进入美国食品香料和萃取物制造者协会()的食用香料名录ꎬ同时被«中国食品添加剂使用卫生标准»纳入允许食品香料ꎮ更为重要的是ꎬ从苦橙中及、法国等地被用来缓解多种疼痛、抑郁、痉挛等)γ￣苦橙(.)为芸香科()柑橘属常绿带刺小乔木ꎬ为酸橙()的一个栽培变种ꎬ广泛种植于中国长江以南地区(黄善松等ꎬ)ꎮ作为中药枳实与枳胀、破气消积、化痰散痞之功效ꎮ现代研究表明ꎬ苦橙可用于焦虑症、肺癌和前列腺癌等多种疾病香科植物普遍含有挥发油ꎬ主要成分为萜烯类、芳香族、脂肪族和含硫含氮类化合物(靖会和佐建锋ꎬꎻ陈丽艳和崔志恒ꎬ)ꎬ而苦橙挥发油植物资源是指来源于植物的器官(如根、茎、研究者开始关注药用植物的非药用部位或全株ꎬ检测其成分和效用差异ꎬ以实现资源的全面利用ꎮ柑橘属植物果实在外果皮的表层生长有大量油囊ꎬ合成并储存具有独特芳香气味的挥发油ꎬ广泛(樊荣ꎬ)ꎮ然而ꎬ苦橙药用部位主要是其未成熟的果实ꎬ已有研究对苦橙叶和花中挥发油成分进行了分析ꎬ并进行了抗炎和抗菌活性比较ꎬ但其幼果的挥发油成分种类、相对含量和抗氧化活性尚不明确ꎬ而将其幼果作为挥发油提取原料也未见报道ꎬ为了全面开发苦橙全植株ꎬ避免造成资源浪费ꎬ从而达到综合开发其地上部分的目的ꎮ本研究采用水蒸气蒸馏法分别对苦橙叶、花及其幼果的挥发油进行提取ꎬ并应用￣分析其化学成分ꎻ通过法和法对苦橙不同部位挥发油的抗氧化活性进行研究ꎬ并对其抗菌活性进行评价ꎬ以期为苦橙叶、花及其幼果中挥发油的提取与利用提供理论依据ꎮ材料:苦橙叶、花和幼果来源于浙江省金华市浙八味中药材市场ꎬ以上材料由桂林医学院黄德青副教授鉴定为苦橙(.)试剂:(纯度≥)、(纯度为)、(纯度为)均购自￣公司ꎻ琼脂粉购自成都科龙化学试剂有限公司ꎻ无水乙醇购自南宁西陇化工有限责任公司ꎮ６期刘亚男等:苦橙不同部位挥发油成分及抗氧化与抗菌活性分析/低温冷却循环泵(巩义市予华仪器有限责光光度计(上海美谱达科学仪器有限公司)ꎻ￣(光光度计(上海美谱达科学仪器有限公司)ꎻ￣(昆山市超声仪器有限公司)ꎮ(昆山市超声仪器有限公司)ꎮ苦橙叶挥发油的提取依照年版«中国药典»四部通则中挥发油测定法提取苦橙)加入蒸馏水ꎬ置于电炉上加热使微沸ꎬ连续提取５发油ꎮ连续提取５次后得到苦橙叶挥发油供试品苦橙花挥发油的提取取盐浸苦橙花.苦橙幼果挥发油的提取取干燥苦橙幼果法提取苦橙幼果挥发油(.Ｏ)ꎬ连续提取４次得黄绿色油状物ꎬ冷却后收集得２.苦橙幼果挥幼果挥发油单次提取率为０.ꎮ.析色谱条件:￣石英毛ꎻ进样口温度.析色谱条件:￣石英毛婷等()的方法ꎬ精密称取６.于棕色容量瓶中ꎬ用蒸馏水溶解并定容至刻溶液ꎮ另精密称取.于棕色容量瓶中ꎬ用蒸馏水溶解并定容至刻度ꎬ摇匀后得.合定容至棕色容量瓶中ꎬ室温下暗处反应后ꎬ用无水乙醇稀释至其在处吸光浓度挥发油乙醇溶液和工作液ꎬ涡旋混匀ꎬ置于室温下避光反应后于处测量样品吸光度()ꎻ用无水乙醇代替样品溶液按上述方法测定对照品溶液吸光度()ꎻ用无水乙醇代替工作液按上述方法测定空白吸光度()ꎻ以为阳性对照ꎬ平行试验３次取平自由基清除率(％)＝()×等()的方法ꎬ精密称取标准品于棕色容量瓶中ꎬ用无水乙醇溶解并定容至刻母液ꎬ置于冰棕色容量瓶中ꎬ用无水乙醇稀释并定容ꎬ摇工作液ꎮ在具塞试管中依次加入不同浓度的挥发油乙醇溶液反应后在处测定样品吸光度()ꎻ用无水乙醇代替样品溶液按上述方法测定对照品溶液吸光度()ꎻ用无水乙醇代替工作液按上述方法测定空白吸光度()ꎻ以为阳性对自由基清除率(％)＝()×学院微生物实验室提供的３种致病菌ꎬ即大肠杆菌()、金黄色葡萄球菌(广西植物卷明烯类成分是苦橙)和铜绿假单胞菌()ꎮ抽取供基中ꎬ通过经典的圆盘扩散试验评估３种精油的制备阴性对照ꎬ用庆大霉素作阳性对照ꎮ℃下孵育后ꎬ通过测量抑菌圈的大小来评估抑菌活性ꎮ)的测定采用肉汤微量稀释法测定精油对供试菌的(.ꎬ)ꎮ试验菌悬液用无菌生理盐水调至１×ꎮ不同部位精油在中采用２倍)μｇ.的最终浓度ꎮ将μＬ菌悬液转移到孔培养板上ꎮ阳性对照品和阴性对照品分别用相同体积的庆大霉素溶液和空白溶液制备ꎬ不加供试品ꎮ℃下孵育ꎮ定义为无肉眼可见菌生长的测试样品的最低浓度ꎮ利用峰面积归一化法对其挥发性成分进行定量分析(魏婧等ꎬ)ꎮ所有数据均以３次重复测量的平均值±标准差表示ꎮ苦橙不同部位挥发油经￣分析后ꎬ得到采用.Ｌ标准谱库计算机检索进行定性分析ꎬ经质谱解析ꎬ苦橙３个部位中共鉴定出种苦橙不同部位挥发油经￣分析后ꎬ得到叶和花中含量最高的均是芳樟醇ꎬ分别为.、和γ￣萜品烯(.)ꎮ苦橙叶挥发油中醇类化合.ꎻ和γ￣萜品烯(.)ꎮ苦橙叶挥发油中醇类化合.ꎬ烯类占.ꎻ主要化学成分有芳樟醇)烯(４.)等ꎮ苦橙花挥发油中醇类化合物成分最酯类占２.ꎻ主要化学成分有芳樟醇(.)、发油中烯类成分最多ꎬ占.ꎬ醇类占.ꎬ６期刘亚男等:苦橙不同部位挥发油成分及抗氧化与抗菌活性分析表１苦橙不同部位中的挥发性成分及相对含量编号保留时间()化合物类别分子式相对含量(％)１２３假枯烯烯类烷烃类烯类 ４桧烯烯类５６７８伪柠檬烯烯类呋喃类烯类烯类— ———９紫苏醇醇类Ｏ——芳香烃类 烯类烯类醇类酯类 异蒲勒醇烯类醇类——芳樟醇醇类Ｏ香芹醇醇类Ｏ 异蒲勒醇醇类醇类烯类醇类醇类醇类 — — —百里香酚醛类醇类醇类酚类Ｏ — — 薄荷醇醇类醇类醇类 — —橙花醇醛类醇类—— 甲酸芳樟酯酯类 广西植物卷续表１编号保留时间()化合物类别分子式相对含量(％)柠檬醛醛类Ｏ 香芹酚酚类Ｏ 酚类Ｏ——吲哚吲哚类Ｎ——氨茴酸甲酯氨茴酸甲酯]酚类烃类烃类烯类烯类酯类 — — —— 可巴烯酯类烯类 丙酸叶醇酯酯类Ｏ 依兰烯烯类——]茉莉酮烯类酮类Ｏ— — 烯类烯类— — 石竹烯烯类赛斯奎沙宾烷烃类——环苜蓿烯烯类酮类烯类烯类烯类烯类烯类 —— ——))喇叭烯烯类烯类 — —大根香叶烯醇类烯类 —桉油烯醇醇类醇类 蓝桉醇醇类Ｏ 愈创木醇醇类Ｏ——白千层醇醇类醇类 — —６期刘亚男等:苦橙不同部位挥发油成分及抗氧化与抗菌活性分析续表１编号保留时间()化合物类别分子式相对含量(％)醇类Ｏ 月桂烯醇醇类Ｏ 白菖醇烯类醇类醇类— — 十氢二甲基甲乙烯基萘酚醇类酚类— —法尼醇烯类醇类— — 杜松樟脑萜类Ｏ 醇类醛类ＯＯ — —依兰醇醇类Ｏ 烯类烯类ＯＯ— — 十六酸甲酯酯类Ｏ 邻苯二甲酸二丁酯酯类Ｏ——西柏烯烯类 亚油酸甲酯酯类Ｏ 亚麻酸甲酯酯类Ｏ 叶绿醇醇类Ｏ—亚油酸乙酯酯类Ｏ :处有最强吸收峰ꎬ当其与抗氧化剂结合后ꎬ两者反应能使溶液本身的蓝绿色褪去ꎬ其褪色程度与抗氧化剂成定量关系ꎮ由图２可知ꎬ和苦橙不同部位挥发油对自由基的清除能力均随着浓度的增大而逐步增强ꎮ当苦橙叶挥发油浓.ꎬ表现出较强的抗氧化能力ꎮ当苦橙花挥ꎬ对的清除率可时ꎬ对的清除率可达.ꎮ而幼果、ꎮ可见ꎬ幼果的挥发油清除自由基能力优于花和叶的ꎮ在单电子ꎬ在波长处有最大吸收ꎬ当其醇溶液与抗氧化剂反应时ꎬ抗氧化剂可以和孤对电广西植物卷下同ꎮ图３不同部位挥发油对自由基的清除率子配对使得吸收逐渐下降ꎬ甚至褪色消失ꎬ其吸光度下降程度与其接受的电子数量成定量关系ꎮ由对自由基的清除能力不断增强ꎮ当苦橙叶的清除率可达.ꎬ与阳性组的清除率基本达到相同水平ꎬ并且继续增大浓度ꎬ清除率基本保持不变ꎮ当苦橙花挥发油浓度小于.时ꎬ其对自由基的清除能力均小于阳性发油对自由基的清除率大于对自由基的清除率ꎬ最高清除率达.ꎮ苦橙幼ꎬ苦橙幼果挥发油对的清除率达.ꎬ继续增大浓度ꎬ清除率见ꎬ幼果的挥发油清除自由基能力优于花和叶的ꎮ(.２~.７)的大肠杆菌具有一定的抗菌活性ꎮ此外ꎬ苦橙的花和幼果对被试菌有较强的抗分别为.和.ꎮ３种挥发油对被试菌的值不同ꎬ大肠杆菌对挥发油更敏感ꎮ苦橙ꎬ苦橙幼果的常见的挥发油提取方法有水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取法、超声波辅助萃取法等ꎮ超临界流体萃取法虽然能够提升挥发油的提取率ꎬ但从经济效益、设备要求等多方面综合考虑ꎬ水蒸气蒸馏法更适用于工业生产(孙吴倩等ꎬ)ꎮ本研究采用水蒸气蒸馏法提取苦橙叶、花及其幼果的挥发油ꎬ应用气相色谱－质谱(￣)联用技术对其化学成分进行定性定量分析ꎮ本研究结果表明油含量较高ꎬ易于获取ꎬ为可持续利用资源ꎮ而苦橙３挥发油ꎬ应用气相色谱－质谱(￣)联用技术对而形成了各自的特性:苦橙叶挥发油呈微黄绿色松油醇(.)、甲酸芳樟酯(.)、橙花醇松油醇(.)、甲酸芳樟酯(.)、橙花醇)６期刘亚男等:苦橙不同部位挥发油成分及抗氧化与抗菌活性分析表种挥发油的抗菌活性微生物菌株抑制区直径()最小抑制浓度.)庆大霉素庆大霉素大肠杆菌１８金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌董雪等(董雪等()对苦橙花挥发油化学成分分析发现其主要的化合物为醇类和萜烯类ꎬ叶一丹等()对苦橙叶挥发油化学成分研究发现其含酯类和醇类物质为主ꎬ它们与本研究结果一致ꎮ另外本研究发现苦橙幼果中萜烯类成分最多ꎬ这是有异于叶和花的地方ꎬ可能是植株在生长发育过程中的代谢产物转化导致ꎮ药用植物不同部位的生物学活性具有显著性差异的现象已有前人的研究结果得到佐证:李慧敏等()研究发现北柴胡不同部位总黄酮根ꎻ查雨锋等()研究表明三七根提取物对改善氧化损伤的作用优于茎、叶、花提取物ꎻ此外也差异有助于明确物质在植株中转运和积累机制ꎮ本研究结果表明苦橙不同部位挥发油对自由基和自由基均有较强的清除能力ꎬ幼果挥发油成分主要为萜烯类化合物ꎬ其抗氧化活性优于叶和花ꎮ大部分芸香科挥发油对葡萄球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌和枯草芽孢杆菌的生长均表现出不同程度的抑制活性(刘巧等ꎬ)ꎮ本研究中幼果挥发油表现出的抗菌活性优于叶ꎬ可将幼果作为苦橙挥发油提取原料用于功效产品研可用叶、花作为苦橙挥发油提取原料以实现苦橙资源的综合开发利用ꎮ参考文献: : 科技大学学报(自然科学版)ꎬ(３):.][Ｄ].:及活性研究[Ｄ].广州:华南理工大学:.]及活性研究[Ｄ].广州:华南理工大学:.]