抗精子抗体（ASAB）检测标准操作规程_第1页
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抗精子抗体(ASAB)检测标准操作规程××医院检验科临床免疫室作业指导书文件编号:XXX生效日期：共页第页1.目的规范检测抗精子抗体(ASAB)的流程，确保检测结果的准确性及重复性。2.原理2．1·间接免疫荧光法：将稀释患者样本与载片反应区中生物薄片上的精子涂片反应。如果样本是阳性的，特异性IgA、IgG和IgM抗体与相应的抗原结合。在第二次温育时，结合的抗体与荧光素标记的抗人抗体反应，然后在荧光显微镜下观察特异性荧光模型。2．2·酶联免疫吸附实验(ELISA)：以特异性精子可溶性膜抗原包被反应板微孔，待测血清中如存在ASAB可与之结合，再加入酶标记抗人IgG抗体和酶底物／色原溶液，出现呈色反应。呈色强度可反映ASAB水平。3.标本要求3．2·样品收到后立即分离血清，不能及时测定的血清应于2~8℃保存。4.试剂与仪器性和阳性对照，荧光显微镜。5.操作步骤ml (PBS)吐温缓冲液；待测血清样本用PBS吐温缓冲液按说明书稀释。5．1．2加样：将加样板放在泡沫板上，将25μl稀释后的血清样本加至加样板的每一反应区上，应避免产生气泡。5．1．3温育：将生物载片有生物薄片的一面朝下，盖在加样板的凹槽里，室温(18~PBS泡至少5min。5．1．5加样：将20μlFITC标记的抗人IgG(荧光二抗)加至洁净加样板的反应区上。：从洗杯中取出生物载片，用吸水纸擦去背面和边缘的水分后，立即盖在加样板的凹槽里，室温(18~25℃)温育30min。玻片直接放在泡沫板的凹槽里。滴加封片介质至盖玻片，每一反应区约10μl。从洗杯中取出一张生物载片，用吸水纸擦干背面和边缘的水分。将生物载片有生物薄片的一面朝下放在已准备好的盖玻片上。。5．2．2将待测血清按样本稀释液(500＋25)μl稀释，再把稀释后的样本、阴性与阳性对照加至相应孔中，每孔100μl。37℃40min。洗3次，在吸水纸上拍干。n标仪适当波长测吸光度值。6.校准定期对加样枪、洗板机、酶标仪进行保养和校准。关键部件更换或者维修后也需校准。7.质控在控规则：阴性质控物必须阴性，阳性质控物结果在上下1个滴度(稀释度)内。规则质控分析法判断在控或失控。8.结果判断·间接免疫荧光法：荧光模型(阳性反应)：ASAB可与精子的各个部位结合，最常见的结合部位在精子的尾部，但在精子的头部和中间部位也可出现阳性反应。视野中所有精子都出现清晰可见的阳性反应，才能判为阳性，荧光模型与阳性对照必须基本一致。9.生物参考区间健康人血清或血浆中ASAB为阴性。10.性能参数性血清的结果特异性荧光强度基本一致，阴性血清结果为阴性。10．1．3批间差异：用2份特征性血清对不同批号的产品进行检测，阳性血清的结果特异性荧光强度基本一致，阴性血清结果为阴性。为阴性和阳性。11.临床意义在免疫性不孕不育时，可在精液、宫颈液和血清中检出ASAB。在输精管切除术后或泌尿生殖感染时，ASAB也可出现阳性。在不孕时，男性和女性中均可出现抗精子抗体，在不孕的男性中，ASAB

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