逆转录聚合酶链反应中的细节问题课件

逆转录聚合酶链反应中的细节问题41、俯仰终宇宙，不乐复何如。42、夏日长抱饥，寒夜无被眠。43、不戚戚于贫贱，不汲汲于富贵。44、欲言无予和，挥杯劝孤影。45、盛年不重来，一日难再晨。及时当勉励，岁月不待人。逆转录聚合酶链反应中的细节问题逆转录聚合酶链反应中的细节问题41、俯仰终宇宙，不乐复何如。42、夏日长抱饥，寒夜无被眠。43、不戚戚于贫贱，不汲汲于富贵。44、欲言无予和，挥杯劝孤影。45、盛年不重来，一日难再晨。及时当勉励，岁月不待人。逆转录聚合酶链反应中的细节问题RT-PCR原理AMMANMMA(AYRNAIsolation/tAMMAn)CellsorTissueCDNAsynthesisoligo(di)armingAAAA周A10ie0iAAMMIAGSPMMMMMAMA(AhAAMANIPCRAmplification信息技术课教学的主要目的就是让学生去了解计算机文化、初步掌握一些计算机基本知识及技能，进一步激发学生的学习兴趣，增强信息意识和创新意识，有效地培养学生对信息的收集、处理、应用和传输的能力以及自学能力和创新能力。我认为，在教学中要把计算机作为一种工具，来提高学生的信息素养，培养他们使用信息技术解决问题的各种能力。信息技术学科由于其实践性及应用性强的特点决定了在教学中必须采取相应的、灵活多样的评价方式，才能有助于培养学生的实践创新精神。一、课堂演示，讲解为主近年来，大多数学校都陆续建成了新的电脑室，这主要是以TCL公司生产为主的电脑设备，同时配备了几十台多媒体电脑，从而形成了一个功能较为强大的多媒体网络教室。我们教师在上课期间，可以借助多媒体网络教室的广播系统，对计算机的基本知识作出适当的演示并加以详细的讲解，使学生获得大量的感性知识，从而加深对知识的理解。例如：在讲授Windows98系统操作时，我是这样做的：先让学生上机实践（当然上该节课前已安排学生进行预习），因为各个学生的理解能力不一样，在他们预习后自己再在无老师的指导下进行实践，看自己的自学能力有多强，从而证实自己的理论理解与实践是否一致。然后我运用了"跃龙门"多媒体教学软件，将正确的操作过程通过教师机演示给学生，并一边进行适当讲解，使学生们看到完整的操作过程。这样做就进一步证实了学生们对自己预习后自行上机实践是否全部正确。再让学生们上机实践一次，这样就收到了很好的教与学效果。同时，为了配合演示式的教学，我又根据课程内容及学生的接受能力，制作有针对性的课件，使课程内容生动形象，变难为易。二、强化练习学生要熟练使用计算机，仅靠教师的讲授和演示是远远不够的，必须通过大量的实践练习，才能掌握操作技能和技巧。练习的方式要多种多样，如课堂问答，上机操作，课内外作业演示等。在进行上机操作练习时，一般给学生布置有针对性的练习内容。例如，在讲完“Word”软件中的文字录入及排版知识后，要求学生课后准备一篇50字左右的短文，在下一节上课时使用Word软件进行录入、排版，并对排版提出合理的要求；又如在讲完IE浏览器的使用后，就让每位学生运用IE浏览器浏览本市的网站和其他教育网站。这样，每教学一项新内容，就及时让学生进行定量的练习，这样有利于激发学生的学习兴趣，巩固所学的新课内容，熟练掌握操作要点，提高学习效果。三、进行网络教学自从学校多媒体网络教室的出现，上级领导对培养学生的上网操作能力非常重视，因此，我们学校也少不了增加上网这项功能。在计算机教学中，网络为学生提供了更为广阔的信息知识环境。学生可以通过上网获得丰富的信息知识。我们教师还可指导学生从网上下载学习软件，收集各类学习网站以及学习资源，不仅满足了他们的好奇心和求知欲，还培养了他们的信息惦集、处理、吸收能力；让学生在节日时，发送电子邮件给亲戚同学问好、祝福；让学生在因特网上阅读新闻、参加K12网站的BBS、收发电子邮件等。采取各种方式设计教学模式，可以满足学生个性化发展的要求。四、采用任务驱动教学“任务驱动”的教学方法指在整个教学过程，以完成一个个具体的任务为线索，把教学内容巧妙地隐含在每个任务之中。学生在教师的引导下，通过完成一个个任务逐步掌握所学的知识与技能。为学生营造一个建构知识、寓学于实践的环境，让他们在这个环境里，充满兴趣愉快地进行学习，突出了在“做”中“学”的思想。例如，我在因特网的教学中，我可以分为这样几个大任务：在因特网上浏览信息、在因特网上查找信息、从因特网上下载信息、在因特网上收发电子邮件、阅读网络新闻、参加BBS、在因特网上进行实时交流等等。对于"在因特网上收发电子邮件"这个大任务又可以分为：写信与发信、收信与读信、回信与转信、信件的分类和整理、订阅电子杂志、加入邮件讨论组等子任务；针对“写信与发信”这个子任务，又可以划分为：写信、发信、在信中夹一张照片、发送一个或多个文件、发送一段录音、发送一个影像、把同一个文件发送给多个接收者、成批发送信件等子任务。五、实现分组教学，提高学习兴趣在计算机上机操作时，学生会经常遇到这样或那样的问题，如果教师一一解答操作，不仅教师感到忙碌、时间紧迫，而且还限制了学生学习的主动性和积极性，得不到良好的教学效果。分组教学可以避免诸多弊端，提高学习主动性和积极性。教师根据上课班级学生人数进行分组，每组人数不要太多（控制6―8名），每个小组有固定的机位并设两名小组长，上课前先进行培训。当本组同学遇到问题时，由小组长充当小老师进行辅导。当有些问题较难时，教师要鼓励全组成员一起研究解决。如果处理得当，教师要及时表扬，使学生充分体会到成功带来的喜悦。这样一来能够极大地激发小组成员的动手能力。如果小组解决不了，可由其它小组提出方案或由教师进行指导。六、实现课堂教学与其它课程的整合利用信息技术学科工具性的特点，可以加强与其它学科的横向联系，不仅能使学生更扎实的掌握课堂所学内容，而且还能让学生对信息技术课有更完整的认识。例如：我让初中二年级学生运用所掌握的信息技术知识和上网技能，到因特网上查找文字、图片、照片等资料，制作一个以“环境保护”为主题的PowerPoint幻灯片。学生们兴致勃勃的查找有关环保资料，精心制作出一套集知识性、趣味性于一身的幻灯片。这样，让学生完成了课堂学习内容的同时，还增长了课外知识，实现了与其它课程的整合，使学生亲身体会到信息采集、处理、加工的全过程，大大提高了学生的信息素质和信息实践能力。列宁作为无产阶级革命的领袖和导师，实现了科学社会主义从理论到实践的发展，领导俄国人民建立了世界上第一个社会主义国家。列宁在继承和发扬马克思恩格斯所创立的共产主义学说的基础上加以深化和创新，并以实践中出现的问题为指导，不断丰富和发展马克思主义的相关理论，其中当然包括大学生思想政治教育的理论。在列宁时期，无产阶级的大学生思想政治教育理论更加成熟和更加系统化。列宁提出了许多关于进行思想政治教育的内容、原则和方法，这对于以后的思想政治教育的发展具有重要的借鉴意义。一、对无产阶级进行理论灌输的论述列宁在《怎么办？》一文中对社会主义灌输理论做出了经典的表述，他认为“工人本来也不可能有社会主义的民主意识。这种意识只能从外面灌输进去。”〔1〕列宁的灌输理论的对象虽然主要是指工人阶级，但是由于青年大学生本身具有的特殊性使得灌输理论对于青年大学生的思想政治教育同样具有重要的意义。他指出：“俄国的情况也是一样，社会民主党的理论学说也是完全不依赖于工人运动的自发增长而产生的，它的产生是革命的社会主义知识分子的思想发展的结果。”〔2〕这就是要求对青年大学生进行理论灌输，使他们成为革命的知识分子以教育人民。为了达成这一目标，列宁提出要把对青年大学生的社会主义理论灌输当成党的一项重要任务来实施，并在不同的场合予以强调。在《为俄国社会民主工党第二次代表大会准备的决议草案》中，列宁指出：“所有学生组织、团体和小组提出如下建议：第一，在工作中把培养自己成员的完整而彻底的革命世界观当作首要任务。”〔3〕同时列宁认识到，如果对青年大学生不积极进行社会主义和共产主义理论的灌输，青年大学生也许会走向我们的对立面，所以列宁又指出：“不要怕他们缺乏锻炼，不必担心他们没有经验和不够成熟。第一，如果你们不善于组织和推动他们，他们就会跟孟什维克和加邦分子走，那时他们的没有经验将会带来五倍的危害。”因此，必须要“按照我们的精神教育他们。”〔4〕列宁的社会主义灌输理论使俄国取得了巨大的成效，同时该理论随着马克思列宁主义在中国的传播，逐渐成为我党进行思想政治教育的重要理论基础。二、对正确对待和认识大学生的论述在如何对待大学生的问题上列宁有着自己的独特见解。他认为最主要的是要认清青年大学生所处的历史地位和发挥的作用，并且对不同的大学生采用不同的方法来进行教育。首先，对待大学生上，列宁特别强调要从当时的社会环境即俄国社会生活的现实条件方面来探索大学生的政治动向，不应该按照那种脱离历史条件、不注重大学生知识分子之间不同的政治派别和政治素养高低的眼光认识大学生。因此，列宁指出：“不管大学生是多么无私、纯洁、富于理想等等，他们不可能是整个社会的例外”〔5〕只要是生活于社会中的青年大学生，总要收到当时的历史条件的影响导致他们对待革命的态度、对待政治方向和目标的差距。对此，我们应该认识到这些差别，抛弃那种“资产阶级民主主义观点和革命社会主义的堂皇外衣之间的明显矛盾”〔6〕。其次，列宁也认为对于这样一群“血气方刚、热情奔放和正在探索途中的青年”，我们必须学会辩证的对待。对于那些“正在把无产阶级引入迷途的”青年大学生，我们必须与其进行彻底的斗争，而对于那些对社会有益的青年学生，虽然他们身上也会有许多缺点和错误我们应采取“说服而不是用斗争的办法”来克服。最后，列宁认识到青年大学生在革命和建设中的重要作用。列宁在给《给亚?亚?波格丹诺夫和谢?伊?古谢夫的信》中指出：“整个斗争的结局都将取决于青年，取决于青年大学生，尤其是青年工人”〔7〕。这是对青年大学生的高度认可。此外列宁也不仅仅认识到青年在当前的革命中具有重要的地位，他认为“我们只是为这个未来社会奠定基础，至于建设，则有待于你们将来长大以后去努力”〔8〕，这就明确界定了大学生作为未来社会主义建设的重要力量，赋予了大学生崇高的使命感和责任感。三、对大学生要与工农群众相结合的论述与工农群众相结合是大学生思想政治教育的重要原则和方法。列宁对青年大学生要与工农群众相结合的原则做出了具体的阐释，列宁认为青年大学生要与工农群众相结合就是要在实践中向群众学习，就是要把所学的知识运用到实践中去发挥应有的作用。首先，青年大学生要与工农群众相结合的必要性。第一，列宁指出：“离开工作，离开斗争，从共产主义小册子和著作中得来的关于共产主义的书本知识，可以说是一分不值，因为这种书本知识仍然会保持旧时的理论与实践的脱节，而这正是资产阶级旧社会的一个最令人厌恶的特征”〔9〕。列宁在此深刻的批判了资产阶级的教育制度与方式，认为按照这种脱离鲜活的实践的教育方式只能培养出一些书呆子或者吹牛家。为了防止这种教育危险必须改革这样的教育制度，他强调青年大学生“只有在与工农的共同劳动中，才能成为真正的共产主义者”〔10〕。其次，列宁从大学生这一群体的力量是非常软弱的方面来进行阐述与工农结合的必要性。列宁指出：“你们不了解如果他们不依附于一个阶级，他们就等于零。你们吹嘘俄国无产阶级知识分子向来以思想‘纯洁’著称，――其实正是因为这样，他们才始终没有力量”〔11〕。列宁认为青年大学生只有与工人群众相结合才能在革命和建设中发挥巨大的力量。四、借鉴列宁关于大学生思想政治教育相关论述的现实启示面对我国现代化建设的进程及世界形势的复杂多变，提高高校思想政治教育的实效，探索对大学生进行思想政治教育的规律成为当前研究的重要课题。在这一背景下，深入研究列宁关于大学生思想政治教育的理论与实践，对于我们在新形势下加强思想政治教育建设，提高思想政治教育的实效性具有重要的借鉴意义。1.借鉴列宁关于大学生思想政治教育的相关论述是提高思想政治教育实效性的现实要求当前我国正处在全面深化改革，进行社会现代化建设，实现伟大复兴的中国梦的关键时期，这一现实的要求需要全社会的总动员。在知识经济迅速崛起的今天，大学生作为知识精英和社会栋梁对于社会主义现代化建设发挥着不可替代的重要作用。但是我们也清醒的认识到，随着当前社会利益主体的多元化，利益需求的多样性，在市场经济的发展中各种不良思潮也侵蚀到象牙塔内，“道德滑坡”、“信仰危机”等现象在大学生群体中屡见不鲜，这不仅直接影响到了人们对于大学生这一群体的期望，也降低了大学生作为社会精英应具有的作用。因此，如何培养德才兼备的大学生，提高思想政治教育实效，使大学生沿着正确的道路为社会现代化贡献力量就成为思想政治教育的主题。列宁以自己所处的时代环境为条件，在辩证唯物主义和历史唯物主义的指导之下，对大学生思想政治教育的基础、原则、方法等各个方面进行了探索，他们的探索在一定程度上蕴含着当代大学生思想政治教育发展的理论基础和现实根基。这就有必要对列宁关于大学生思想政治教育理论进行借鉴，以期为高校思想政治教育注入新的活力。2.借鉴列宁关于大学生思想政治教育相关论述是体现“三个面向”教育理念的根本要求1983年10月1日，邓小平为北京景山学校题词中指出，教育要面向现代化，面向世界，面向未来。这为新时期的教育发展和改革指明了根本的方向和要求，同时这一命题同样适用于大学生思想政治教育的发展要求。大学生思想政治教育的现代化就是要求使大学生思想政治教育的目标、体系和原则方法必须体现时代的气息，更具有针对性，更加关注大学生这一特殊群体所具有的新的特点，形成符合的时代的特色和大学生思想特点的思想政治教育理论体系以追求思想政治教育效果的最大化。列宁关于大学生特点的精辟分析与关注是我们进行其理论和实践借鉴的基础。面向世界、面向未来要求大学生思想政治教育的发展必须树立开放和长远的眼光，积极借鉴国外关于大学生或高校思想政治教育方面的理论和教育改革的实践，汲取其中的优秀成果为我所用。但是在这一借鉴的过程中，必须保持坚持马克思主义的指导地位不动摇，这是我们进行大学生思想政治教育借鉴的根基。而根基的夯实就在于把列宁关于大学生思想政治教育的相关论述实现中国化，符合中国的国情，体现中国特色。3.借鉴列宁关于大学生思想政治教育相关论述是构建高校或大学生思想政治教育体系以及促进思想政治教育学科发展的必然要求高校或大学生思想政治教育是思想政治教育学科的重要分支，构建更加系统的、理论化的高校或大学生思想政治教育体系拓宽了思想政治教育学科的领域，增强对于同一问题的关注，有利于社会对该学科的确认赞同和学科功能的发挥。在构建高校或大学生思想政治教育体系的过程中要求我们避免重走弯路，要立足于自身的发展，借鉴列宁关于大学生思想政治教育的方法和原则构建符合本学科自身的话语体系，为思想政治教育的效果提升铺平新的道路。总之对于列宁关于大学生思想政治教育理论与实践的借鉴是现实与理论对我们的要求，也是历史赋予我们的责任。〔逆转录聚合酶链反应中的细节问题RT-PCR原理AMMANMMA(AYRNAIsolation/tAMMAn)CellsorTissueCDNAsynthesisoligo(di)armingAAAA周A10ie0iAAMMIAGSPMMMMMAMA(AhAAMANIPCRAmplification介绍内容口实验器具与材料C试剂口标本收集与保存CRNA抽提口递转录反应(RT)聚合酶链反应(PCR)、实验器具、材料1、移液枪:1m1、200μ1、20μ12、吸头及吸头盒:1m1、200μ1、20μ1(无菌无酶,可直接购买)3、EP管:1.5m1(无菌无酶,可直接购买)4、PCR薄壁管0.2m15、普通EP管:1.5m1、0.5m1(高压灭菌)6、大瓷缸:2个(180℃的高温干烤6h,灭活RNA酶,存放无酶EP管和PCR管7、组织捣碎棒(可直接购买)试剂1、DEPC水500m12、75%乙醇:用无水乙醇DEPC水配,然后放4℃保存3、异丙醇4、氯仿5、电泳缓冲液(TAE/TBE)7、琼脂糖8、Taq酶(含MgC12Buffer),-20℃9、dNTP,-20℃10、随机引物,-20℃11、MMLV逆转录酶(Buffer),-20℃12、RNasin,-20℃13、Triz1100m1/1瓶,-4℃14、Marker,-20℃15、引物,-20℃三、标本收集与保存目的:防止RNA被RNA酶降解措施:低温、RNA酶抻制剂、尽快取材防止细胞裂解1、细胞悬浮细胞:1500rpm,5min离心,取沉淀-80℃冻存,或直接抽RNA;贴壁细胞:倒摔培养液,加Trizol1m1,溶解细胞,直接抽RNA或冻存(如没有Triz1,可用胰酶消化后,同悬浮细胞处理)2、组织液氮取材(越快越好),-80℃冻存:即可用于抽RNA,也可用于抽蛋白;RNA保护剂取材:用普通冰袋即可,但不宜用于抽蛋白Triz01取材:同上;80℃冰袋取材:没办法的办法四、RNA抽提目的:防止RNA被RNA酶降解,获得高质量的RNA措施:1.了解RNA酶的来源及应对方法:1)内源性:组织细胞裂解释放(低温、RNA酶抑制剂)(2)外源性:实验者的皮肤分泌物、呼吸气体、唾液等(带手套、口罩);3)实验环境中的灰尘、微生物等(环境清洁、消毒、在超净台内进行);(4)实验器械(进行无酶处理):180℃的高温下干烤6h;0.1%DBPC水浸泡或用氯仿冲洗(注意:有机玻璃器具不能使用);用DEPC处理过的无菌双蒸水配制溶液2、了解RNA抽提的步骤原理,知道哪些是需要注意RNA酶污染的关键步骤,做到胆大心细。举例如下:TRIREAGENT分离RNAPR0T0COL1)5-10×10胞沉淀,加TR1,反复打将细胞涂解,50-100mg组织加1m1TRIReagent于匀浆器中勾浆(注意:标本体积不得超过TRIReagent体积的10%)2)将匀浆于室温静置5分钟(此步后将样本置-80℃至少可保存一个月)3)然后向匀浆中加入0、2m1氯仿,盖紧样本剧烈振摇15秒4)将混合物室温静置2-15min,12,000g,4℃离心15min(低温离心很重要,否则,水相中会混入少量的DNA)(离心后原混合物分为底员红色的酚-氯构中间相和上员无色的水RN在在干水智,而DN和白质分别在在于中间相和育机相,水相的体积大概占用于的Re9en感体积的0,5)转移上层无色的水相至新的管子中,加0.5m1异丙醇(从水相中沉淀RNA),室温静置5-10分钟6)12,000g,4℃离心8min.此时可见RNA沉淀(离心前通常看不见)于管底或侧壁形成胶冻状或白色沉淀刀)移去上清,加至少1m1的75%乙醇洗涤RNA沉淀(用涡旋),(此时RNA可至于75%乙醇中存于4℃至少一周或存于-20℃至少一年)8)然后于7,500g,4℃离心5min(如RNA沉淀积于管壁一侧和倾向于漂浮,于12,000g沉淀9)移去上层的乙醇洗液,将RNA沉淀置空气中短时千燥.(注意不要让RNA沉淀完全干燥,因为这样将极大的降低其可溶性。但对于用于RT-PCR的样本而言,应尽量让RNA样本中的乙醇挥发,