肝胆生物化学检验课件

肝胆生物化学检验CompanyLogo教学目标[教学时数]6学时熟悉肝胆基本解剖生理功能；熟悉血氨、胆红素、总蛋白、清蛋白/ALT/ALP等

分析前变异（标本收集与前处理）；掌握ALT/ALP/AST/DB/TB/TP/Alb等检验方法原理熟悉肝胆酶学、胆红素、氨、蛋白等临床意义CompanyLogo梗阻性黄疸梗阻性黄疸生物化学标记物特点？该患者在被检验师开始分离血清时已发现偏黄，血清偏黄色主要由黄疸引起，有时候为摄入着色剂引起黄疸病通常胆红素会沉积在皮肤粘膜或眼睛CompanyLogo肝功能评估常见生物化学指标（与功能相关）酶学：ALPALTASTGGT5’-NT(核苷酸酶）生物转化及排泄：TBDB合成：TPAlb代谢及排泄：TGTC尿素氨CompanyLogoCompanyLogoCompanyLogo二、肝脏的生物化学功能排泄功能物质代谢功能生物转化重要生化功能CompanyLogo（一）排泄功能主要排泄对象：胆汁酸、胆红素、氨1、胆汁酸代谢（1）胆汁的分泌：胆汁功能：促进脂类的消化吸收，同时能将体内某些代谢产物及生物转化产物不断地排入肠道随粪便排出体外。胆汁的来源：肝胆汁胆囊胆汁十二指肠胆汁的成分：水/胆汁酸（盐）、卵磷脂、蛋白质、脂肪酸和胆固醇CompanyLogo（2）胆汁酸生成及种类：初级胆汁酸（肝细胞）次级胆汁酸（肠道）初级游离胆汁酸初级结合胆汁酸（甘氨酸/牛磺酸）次级游离胆汁酸次级结合胆汁酸（甘氨酸/牛磺酸）CompanyLogo（3）胆汁酸肝肠循环：（4）胆汁酸的功能：①促进脂类消化②促进脂类吸收③抑制胆固醇从胆汁中析出沉淀游离型胆汁酸结合型胆汁酸CompanyLogo2、胆红素代谢胆色素

尿胆素原粪胆素原尿胆素粪胆素胆绿素胆红素未结合胆红素(单核吞噬细胞系统如骨髓、脾脏)结合胆红素（肝脏）胆素原胆红素代谢概况CompanyLogo部位——肝脏细胞鸟氨酸瓜氨酸瓜氨酸精氨酸代琥珀酸ATPAMP+PPi延胡索酸鸟氨酸精氨酸H2O尿素天门冬氨酸NH3CO2氨甲酰磷酸+H2O尿素循环3、氨代谢CompanyLogo（二）物质代谢功能1、营养物质代谢2、激素及维生素代谢(1)在蛋白质代谢中的作用(2)在氨基酸代谢中的作用(3)在糖代谢中的作用(4)在脂代谢中的作用激素的灭活主要在肝脏进行多种维生素能在肝细胞内储存并进行转化CompanyLogo胆红素代谢紊乱生化（一）胆红素代谢障碍定义:黄疸分类:黄疸和阻塞性黄疸溶血性黄疸肝细胞性黄疸高胆红素血症高胆红素血症高胆红素血症可分为肝前性、肝性、肝后性肝前性高胆红素血症可能为溶血或血红素代谢旺盛、红细胞破坏血红蛋白增加、镰状细胞贫血引起表现为非结合胆红素升高结合胆红素正常肝性高胆红素血症既可能为未被转运到肝脏或肝脏生物转化功能缺陷引起，前者典型的如吉氏综合征、后者典型如克-纳氏综合症新生儿黄疸（缺UDPG转移酶）表现为非结合和结合胆红素都升高肝酶学指标如ALTAST多升高表明肝脏有炎症或肝细胞有损伤CompanyLogo肝后性高胆红素血症通常为结石、肿瘤、疤痕引起胆管堵塞，表现为结合胆红素升高，非结合胆红素正常，ALPGGT升高脂类代谢异常其他影像学检查可辅助诊断梗阻部位该例患者最后被诊断为胆结石CompanyLogo案例2一新生儿从第三天总胆红素开始升高母亲O型新生儿A型接受光疗（450nm）转化非结合胆红素，否则导致胆红素穿过新生儿血脑屏障，发生脑瘫耳聋智力低下并监测胆红素家属寻求合理的解释CompanyLogo生理性黄疸：2-3天出现，4天开始好转，也可能持续2周一般非结合胆红素升高肝酶学正常其他原因：溶血性疾病、先天性胆管闭锁、新生儿特发性肝炎导致持续升高溶血性黄疸主要是免疫机制引起溶血属于肝前性其检查方法？CompanyLogoCompanyLogo血清胆红素测定重氮盐法胆红素氧化酶(bilirubinoxidase,BOD)法高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)、导数分光光度法直接分光光度计法测定方法CompanyLogo1．重氮盐改良J-G(JendrassikandGrofmethod,J-G)法(1)原理:

血清中结合胆红素与重氮盐反应生成偶氮胆红素；同样条件下，游离胆红素需要在加速剂作用下，使游离胆红素分子内的次级键断裂，极性上升并与重氮试剂反应。反应完成后加入终止试剂，继而加入碱性酒石酸钾钠使紫色偶氮试剂转变为蓝色，波长600nm下比色分析，求出血样中总胆红素的含量。

(2)方法评价：

推荐的常规方法，其方法的线性范围较宽，在342µmol/L(200mg/L)浓度下有较好的准确性和精确性，高浓度时准确性和精确性降低。因此，建议浓度过高时减少血样用量测定。

CompanyLogo【临床意义】【参考范围】

黄疸的鉴别诊断总胆红素:5.1～19.0μmol/L(0.3～1.1mg/dL)直接胆红素:1.71～6.8μmol/L(0.1～0.4mg/dL)CompanyLogo2．胆红素BOD测定法(1)原理:BOD在不同pH条件下催化不同组份的胆红素氧化生成胆绿素，胆绿素与氧进行非酶促反应转变为淡紫色化合物，胆红素的最大吸收峰在450nm

附近。随着胆红素被氧化,450nm下降，下降程度与胆红素浓度成正比。；在pH8.0条件下,未结合胆红素及结合胆红素均被氧化，用于测定总胆红素,在pH=4.5的酸性条件下，BOD仅能催化结合胆红素和大部分δ胆红素，而游离胆红素不被氧化，测定其含量代表结合胆红素。(2)方法评价：BOD法测定总胆红素的准确性、精密度比改良J-G法好

CompanyLogo【参考范围】血清总胆红素：10.26±4.10µmol/L血清结合胆红素：2.57±2.56µmol/L胆红素µmol/L=胆红素mg/LX17.1【临床意义】见重氮比色法CompanyLogo尿胆素原测定新鲜标本（受胆红素干扰可能被氧化为尿胆素）方法：埃里希反应（试剂酸性对二甲基苯甲醛红色）

胆红素干扰排除：氯化钡沉淀过滤CompanyLogo胆汁酸代谢障碍1、胆汁酸合成障碍2、胆汁酸向肠道排出障碍3．胆汁酸肠肝循环紊乱4．胆汁瘀积病变时胆汁酸代谢紊乱CompanyLogo血清胆汁酸测定高效液相色谱法放射免疫分析法酶免疫分析法比色分析测定法测定方法CompanyLogo(1)酶比色法测定原理3α-HSD胆汁酸+NAD+3-氧-5β类固醇+NADH（1）

NADH+NBT甲jie（蓝色化合物λ=540nm）（2）

3-氧-5β类固醇+NAD+3-氧-5β类固醇+NADH（3）黄递酶△4-DH酶比色法CompanyLogo由于胆汁酸在血中含量低，方法检测的灵敏度达不到要求，通过增加3-氧-5β-类固醇脱氢酶(△4-DH)，胆汁酸经3α-HSD催化的产物3-氧代胆酸在△4-DH作用下再次脱氢，加大了NADH的生成量，提高了反应的检测能力（见反应式1、2、3）。但以上两种方法都存在一个缺点：生成的蓝色产物是一种染料，易于附着管壁，难于清洗或堵塞管道。酶循环法测定原理为：NAD+

Thio-NADThio-NADH胆汁酸3-氧代胆汁酸NADH3α-HSDCompanyLogo(2)酶比色测定法评价：快速、简便、准确、可靠和适用的优点。它即可以手工操作、也可以在自动化仪器上进行。但试剂价贵、不易保持。对酶量的要求严格，以保证酶促反应在零级反应下进行，酶量不足易产生误差。此外，标准品的制备非常重要。常采用甘氨胆酸溶入小牛血清中制成冻干品。

【参考范围】1～7µmol/L

(成人空腹血清总胆汁酸)血清胆汁酸测定的临床意义1、总胆汁酸测定①肝细胞微损伤确定诊断价值指标②高胆红素血症与胆汁瘀积的区别◆

TBA测定正常而胆红素升高，可视为高胆红素血病◆

TBA升高，胆红素正常为胆汁瘀积◆两者均升高考虑为胆汁瘀积性黄疸2、胆汁酸比值测定★胆道梗阻时，患者血清中CA和CDCA升高，以CA为主，CA/CDCA>1。★肝实质细胞损坏时，血清中以CDCA为主，CD/CDCA<1因此，CA/CDCA比值可作为鉴别梗阻性病变黄疸和肝细胞病变（黄疸）的指标。3、其它★药物：所致的中毒性肝炎、早期TBA↑★

指示回肠病变或功能紊乱的指标★胆汁酸耐量试验

任何引起肝细胞损伤的病理过程都可能引起血中胆汁酸升高可见于各种类型的肝病、肝硬化、脂肪肝，也见于急慢性胆道阻塞。其中空腹胆汁酸测定是一种敏感、特异性强并相对简单的肝功能试验，是目前公认最敏感的肝功能试验之一。特别适用于可疑有肝病但其它生化试验正常或轻度异常的病人诊断。案例359岁女性未明原因发烧瘙痒血清棕黄色CompanyLogoCompanyLogo血浆酶紊乱检验1．肝脏合成酶类:胆碱脂酶、凝血因子、铜蓝蛋白；2.肝细胞内酶:

ALT、AST

3．肝脏阻塞性疾病酶活性改变：ALP、GGT4．肝硬化疾病酶活性改变：单胺氧化酶（MAO）

CompanyLogo酶活性测定的基本知识酶活性的概念酶活性单位酶活性单位的计算酶促反应进程酶促反应底物动力学CompanyLogo一、酶活性的概念

酶活性即酶促反应速度，指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量。底物浓度为〔S〕,产物浓度为〔P〕,时间为t，反应速度为vv=-d〔S〕/dt或v=d〔P〕/dt。注：在实际测定酶促反应速度时，以测定单位时间内产物的生成量为好。CompanyLogo二、酶活性单位定义：指在一定条件下使酶促反应达到某一速度时所需要的酶量。酶活性单位是一个人为规定的标准。惯用单位：酶活性测定方法的建立者所规定的单位。国际单位：1IU指在规定条件（最适pH，最适底物浓度）下，每分钟转化1mol底物的酶量。单位为IU/L。Katal单位：1Katal指在规定条件下，每秒钟转化1mol底物的酶量，1Katal=60×106IU。CompanyLogo三、酶活性单位的计算步骤：运用公式进行计算。明确测定方法的酶单位定义，按照酶单位定义确定物质量、体积和时间的单位，CompanyLogo计算公式:

产物的增加量每单位规定的保温时间1000（ml）酶单位/升=—————————×——————————×————————

每单位规定的产物增加量实际保温时间实际标本用量（ml）分光光度法测定的公式：

（A测定–A对照）·V总·106

每单位规定的保温时间酶单位/升=——————————————×——————————

·L·V标实际保温时间CompanyLogo四、酶促反应进程酶促反应进程曲线CompanyLogo酶量的测定：通过酶活性测定间接测得酶的含量，因此，要准确测定酶量，应使酶浓度（〔E〕）与酶促反应速度成正比，即〔E〕∝-d〔S〕/dt或〔E〕∝d〔P〕/dt。能够真正代表酶活性大小的是线性期的酶促反应速度，即酶促反应初速度。

酶活性测定时首先要确定线性期，在此期测定反应速度才能准确代表酶活性。酶的含量酶活性酶促反应初速度CompanyLogo五、酶促反应底物动力学中间产物学说：酶促反应进行时，酶首先与底物结合为中间产物，然后再催化底物反应生成产物。E+SES→E+P

CompanyLogo米-曼氏方程：

Vmax〔S〕v=—————〔S〕+Km上式中v代表反应速度，Vmax代表最大反应速度，〔S〕代表底物浓度，Km称为米氏常数。CompanyLogo（一）米氏常数的定义由米-曼氏方程可以导出：（Vmax-v）〔S〕Km=———————

v当v=1/2Vmax时，Km=〔S〕。因此Km值为反应速度相当于最大反应速度一半时的底物浓度。Km值是酶的特征常数，具有重要的应用价值。CompanyLogo（二）Km值的应用1.鉴定酶的种类

Km值是酶的特征常数，在反应条件一定时，只与酶的种类和底物的性质有关，与酶的浓度无关。不同种类的酶其Km值不同，对于一种未知的酶，可在规定的条件下测定其Km值加以鉴定。CompanyLogo表7-1某些酶的Km值酶底物Km(mmol/L)乳酸脱氢酶丙酮酸0.017己糖激酶D-葡萄糖0.05D-果糖1.5-半乳糖苷酶D-乳糖4.0碳酸酐酶H2CO39.0过氧化氢酶H2O225蔗糖酶蔗糖28糜蛋白酶甘氨酰酪氨酰甘氨酸108CompanyLogo2.反映酶与底物的亲合力Km值越大，酶与底物亲合力越小，Km值越小，酶与底物亲合力越大。3.选择酶的最适底物

Km值取决于酶的种类和底物的性质，在酶一定时，不同底物有不同的Km值。酶活力测定时，应优先选择酶的最适底物，使酶促反应容易进行，并节省底物用量。CompanyLogo4.计算不同底物浓度时酶促反应速度相当于最大反应速度的比率根据米-曼氏方程可以计算5.设计适宜的底物浓度酶促反应进程曲线表明，只有初速度才能真正代表酶活性，一般要求初速度达到最大速度的90%～95%、底物消耗率为1%～5%。这样既可以近似地表示酶活性，又不致于使底物浓度过高而造成浪费。CompanyLogo(三)Vmax的应用定义：Vmax指酶完全被底物分子饱和时的反应速度。

应用：

Vmax可用来计算酶的转化率（TN），即单位时间内每分子酶可使底物发生化学反应的分子数，单位为分子数/秒。当反应速度达到最大反应速度时，如果已知酶量，则可计算出酶的转化率：

TN=底物转化量（mol/s）/酶量（mol）CompanyLogo(四)Km和Vmax的测定1．Linweaver-Burk作图法,又称为双倒数作图法

1Km+〔S〕Km11——=—————=———·——+———vVmax〔S〕Vmax〔S〕VmaxCompanyLogo2．Cornish-Bowden作图法又称为直线线性作图法。CompanyLogo同工酶测定同工酶的定义同工酶产生的机理同工酶的测定方法CompanyLogo同工酶的定义是催化功能相同，但是分子组成及理化性质不同的一组酶，是在同一种属中由不同基因位点或等位基因编码的多肽链单体、纯聚体或杂多体。CompanyLogo一、同工酶产生的机理（一）由不同基因位点编码（二）由等位基因编码（三）由多肽链化学修饰产生CompanyLogo二、同工酶的测定方法（一）按照理化性质不同进行分离鉴定1．电泳法

同工酶氨基酸组成不同，等电点不同，电泳迁移率也就不同，据此可用电泳法分离鉴定。

2．层析法根据同工酶分子荷电量不同，可用离子交换层析法加以分离。CompanyLogo（二）按照底物专一性不同进行鉴定同工酶底物专一性不同，Km值也不同。如果同工酶之间的Km值差别足够大，可以通过测定其Km值加以鉴定。（三）按照最适pH不同进行鉴定同工酶分子氨基酸组成不同，最适pH也不同。如果同工酶最适pH之间的差别足够大，可以通过调节缓冲溶液的pH值加以鉴定。CompanyLogo（四）按照免疫学特性不同进行分离鉴定（五）按照耐热程度不同进行鉴定（六）选择性抑制法CompanyLogo酶学分析在临床诊断上的应用血浆酶的来源酶的区域化分布酶活性测定在临床诊断中的应用同工酶的诊断价值CompanyLogo一、血浆酶的来源血浆酶血浆特异酶非血浆特异酶外分泌酶细胞内酶CompanyLogo二、酶的区域化分布表7-3诊断常用血清酶的来源血清酶符号来源鸟氨酸氨基甲酰转移酶OCT肝卵磷脂胆固醇酰基转移酶LCAT肝谷氨酸脱氢酶GLDH肝山梨醇脱氢酶SDH肝丙氨酸氨基转移酶ALT肝、肾、心异柠檬酸脱氢酶ICD肝、胎盘、心-谷氨酰转肽酶-GT

肝、胆、肾、小肠5ˊ-核苷酸酶5ˊ-NT肝、胆道单胺氧化酶MAO肝、肾、脑天门冬氨酸氨基转移酶AST心、肝、骨骼肌肌酸激酶CK骨骼肌、心、脑乳酸脱氢酶LDH心、肾、骨骼肌、肝、肺碱性磷酸酶ALP小肠、胎盘、肝、肾酸性磷酸酶ACP前列腺、红细胞、血小板淀粉酶AMS胰、唾液腺脂肪酶LPS胰CompanyLogo三、酶活性测定在临床诊断中的应用（一）在肝脏疾病诊断中的应用（二）在急性心肌梗死诊断中的应用（三）在急性胰腺炎诊断中的应用（四）在骨骼疾病诊断中的应用（五）在肌肉疾病诊断中的应用（六）在前列腺疾病诊断中的应用（七）在肿瘤诊断中的应用四、同工酶的诊断价值CompanyLogo血清酶测定（一）氨基转移酶测定1．赖氏法测定ALT（１）原理：

（２）方法评价：①赖氏法的实验结果需与卡门分光法的结果对比后求出；②NaOH的浓度对显色有影响；③该法的重复性差。CompanyLogo【参考范围】

5～25卡门氏单位【临床意义】(2)慢性活动性肝炎或脂肪肝：(1)肝细胞损伤的灵敏指标:ALT轻度增高(100～200IU),或属正常范围,CompanyLogo2.连续监测法测定ALT（１）原理：

采用酶偶联反应,即L-丙氨酸和α-酮戊二酸在ALT作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸再在LD作用下生成L-乳酸，同时NADH被氧化为NAD+,可在340nm处连续监测到NADH的消耗量,从而计算出ALT活性浓度。

双试剂法

:首先使血清与缺少α-酮戊二酸的底物溶液混合，37℃保温5分钟，将标本中所含的α-酮酸(如丙酮酸)消耗完，然后，加入α-酮戊二酸启动ALT催化的反应，在波长340nm处连续监测吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率(-△A/min)，来计算ALT的活性。CompanyLogo（２）方法评价：①存在着两个副反应，会使测定结果偏高；A、血清中存在的α-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH。B、血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)增高时，在有氨存在条件下，亦能消耗NADH。

②双试剂法，因温育期长，能有效地消除干扰反应，测定准确性高，是ALT测定的首选方法；③血清不宜反复冰冻保存，以免影响酶活性；避免使用溶血标本。CompanyLogo3.赖氏法测定AST（１）原理：

血清中的AST可催化门冬氨酸(aspartate)与α-酮戊二酸间的氨基移换，生成草酸乙酸(oxaloacetate)和L-谷氨酸。草酸乙酸自行脱羧转变成为丙酮酸。反应60分钟后，加入2，4-二硝基苯肼终止反应，并与酮酸生反应生成两种2，4-二硝基苯腙。在碱性条件下,两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在505nm处差异最大，由草酸乙酸转变成的丙酮酸所生成的苯腙呈色强度显著大于α-酮戊二酸苯腙。据此可用比色法测定AST活性。

（２）方法评价：①赖氏法的实验结果需与卡门分光法的结果对比后求出；②该法的重复性差：负干扰现象

CompanyLogo【参考范围】

8～28卡门氏单位【临床意义】肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎：血清AST也可轻度增高。心肌梗死：血清中AST活性增高各种肝病病人：血清AST的升高CompanyLogo4．连续监测法测定AST（１）原理：

采用酶偶联反应,即L-门冬氨酸和α-酮戊二酸在AST作用下，生成草酰乙酸和L-谷氨酸。草酰乙酸在苹果酸脱氢酶作用下生成L-苹果酸，同时伴有NADH转化为NAD+，在340nm监测NADH的转化速率，从而计算出AST的活性。

双试剂法

:同ＡＬＴ测定。CompanyLogo（２）方法评价

误差可来自内源性和(或)外源性内源性干扰主要来自血清中高浓度丙酮酸和L-谷氨酸脱氢酶(GLDH)。外源性干扰来自试剂中污染的GLDH和AST。

【参考范围】

5～40IU/L(连续监测法测定)

【临床意义】

见赖氏法CompanyLogo(二)ALP测定化学法连续监测法：鲍氏法金氏法皮氏法CompanyLogo１、金氏法测定ALP（１）原理：

ALP在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使之水解释放出酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4－氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物，根据红色深浅确定ALP的活力。(2)方法评价：

磷酸苯二钠比色法与更早的β-甘油磷酸钠法相比具有较大的优点，如水解速度快，保温时间较短、灵敏度较高、显色稳定、不需去蛋白、操作简单、快速。但与磷酸对硝基酚连续监测法相比，准确度、精密度较低；操作比较繁琐,，灵敏度低。CompanyLogo【参考范围】成人：3～13单位，儿童：5～28单位

ALP金氏单位定义是100ml血清，37℃与底物保温15分钟，产生1mg酚为1个金氏单位。ALP主要用于诊断肝胆和骨骼疾病【临床意义】CompanyLogo2.连续监测法测定ALP（1）原理：以磷酸对硝基酚(p-nitrophenylphosphate,4-NPP)为底物，2-氨基-2-甲基-1,3-丙醇（2-amino-2-methyl-1-propanol,AMP）或二乙醇胺为磷酸基的受体。在碱性环境下，ALP催化4-NPP水解产生游离的对硝基酚，对硝基酚(p-nitrophenol，4-NP)在碱性溶液中转变成黄色。根据405nm处吸光度增高速率来计算ALP活性单位。（2）方法评价：线性范围可达500U/L，批内CV为2.06%～2.36%，批间CV为2.74%。CompanyLogo【参考范围】男性：1～12岁<500U/L,女性：1～12岁<500U/L

12～15岁<750U/L，>15岁40～150U/L，

>25岁40～150U/L。【临床意义】

见金氏法CompanyLogo(三)GGT测定法化学法（重氮反应比色法）和连续监测法。1.重氮反应比色法测定GGT原理：

【参考范围】男性3～17U/L；女性2～13U/L2.连续监测法测定GGT(1)原理：

(2)方法评价：

(2)方法评价：重氮比色法活性单位：100ml血清在37℃下反应1hr,生成0.5μmol的α-苯胺为1个GGT活性单位。男性：11～50U/L；(以γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺为底物)女性：7～32U/L

男性：≤40U/L；女性：≤30U/L(以γ-谷氨酰-4-硝基苯胺为底物)【参考范围】CompanyLogo(四)MAO测定原理:

MAO主要作用于CH2-NH2基团，在氧参与下，氧化脱氨生成相应的卞醛、氨及过氧化氢。以苄氨偶氮-β-萘酚为底物,在O2和H20参与下，MAO催化生成苄醛偶氮-β-萘酚、氨及过氧化氢，用环己烷抽提后进行比色测定。(2)方法评价：【单位定义】：

1ml血清与底物在37℃孵育60分钟，催化单胺氧化产生1nmol苄醛偶氮-β-萘酚为1个MAO单位。【参考范围】12～40U/ml(12×103～40×103U/L)。【临床意义】：肝硬化时，肝纤维化现象十分活跃，MAO活性明显升高。

CompanyLogo讨论：胆酶分离现象？CompanyLogo肝炎患者肝脏受损时，血清谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST和胆红素升高是同步的。但有时会出现另外一种情况，患者谷丙转氨酶升高与胆红素升高“不同步”，或是谷丙转氨酶升高远不如胆红素升高明显，即出现所谓胆酶分离现象。表明肝细胞大量坏死或淤胆型肝炎CompanyLogo血浆蛋白质紊乱检验一、血浆蛋白质的组成、功能及分类1、血浆蛋白质的组成：

2、血浆蛋白质的功能：

①

营养作用

②维持胶体渗透压③维持正常PH

④运输作用⑤免疫与防御功能⑥催化作用⑦抑制组织蛋白酶⑧代谢调节⑨凝血、抗凝血及纤溶作用。免疫功能:

IgA、IgG、IgM、C3、C4、Kap、Lam、IgGsubclasses1-4、IgE、C1抑制物肾脏功能:

白蛋白、转铁蛋白、IgG、a1-微球蛋白、B2-微球蛋白、a2-巨球蛋白、

Kap-轻链、Lam-轻链、CystatinC炎症:

CRP、a1-酸性糖蛋白、触珠蛋白、a1-抗胰蛋白酶、铜兰蛋白、纤维蛋白原、SAA类风湿性疾病:

RF、ASL、CRP、ADNaseB心血管疾病: ApoA-I、ApoB、ApoAII、ApoE、Lp(a)、肌红蛋白、纤维蛋白原、hsCRP

营养监测:

前白蛋白、白蛋白、视黄醇结合蛋白、转铁蛋白、铁蛋白出/凝血疾病:

纤维蛋白原、AT3、纤溶酶原贫血:

触珠蛋白、转铁蛋白、铁蛋白、可溶性转铁蛋白受体

涵盖最广泛的临床检测指标氨基酸性质：两性电离及等电点、紫外吸收、呈色反应。生物大分子：胶体性质、变性、沉淀和凝固等特点。

蛋白质性质蛋白质的分离透析、沉淀、盐析、电泳、层析、超速离心血浆蛋白质的分类根据分离方法：①盐析法：白蛋白和球蛋白两大类（各种蛋白质的亲水性和所带的电荷均有差别。）②电泳法（醋酸纤维素薄膜）：白蛋白、α1－球蛋白、α2

－球蛋白、β

－球蛋白、纤维蛋白原、γ－球蛋白。

3、血浆蛋白质的分类白蛋白（40－60％）α1-球蛋白（α1-抗胰蛋白酶、血清类粘蛋白、α1-酸性糖蛋白、甲胎蛋白）α2-球蛋白（α-脂蛋白、触珠蛋白、铜蓝蛋白、α2-巨球蛋白）β-球蛋白（转铁蛋白、血红素结合蛋白、β微球蛋白、纤维蛋白原、

β脂蛋白、补体）

γ-球蛋白（各种免疫球蛋白主要位置及C-反应蛋白）电泳法分类根据生理功能分类：1、白蛋白（albumin,Alb)

肝实质细胞合成，分子量66458，

半衰期15～19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占40～60％。

★二、一些临床常检测血浆蛋白质

由于白蛋白在血浆中浓度高而且分子量小，其主要生理功能是维持血液胶体渗透压。

另外，白蛋白能结合诸如胆红素之类的疏水分子。在体内担负转运各种离子、酶类、脂溶性物质、激素和药物的功能。在机体营养作用中也起重要作用。

参考范围：血清白蛋白35～55g／L

1）血液中的白蛋白2）脑脊液中的白蛋白CSF中白蛋白全部来自血液。

CSF中白蛋白增高与血脑屏障通透性增高有关。可见于多发性硬化症、病毒性脑炎或脑膜炎、细菌性脑膜炎等颅内和椎管内炎症性疾病和某些神经系统疾病。参考范围：CSF白蛋白134～237mg／L3）、微量白蛋白尿（MA）尿ALB

正常成人尿ALB大约3.90～24.4mg/24h

儿童尿ALB0～13.3mg/24h

尿Alb／Cr(肌酐)<2.5mg／mmol

尿中蛋白超过以上数值则称蛋白尿。

肝细胞合成，分子量54000，半衰期1.9天。2、前白蛋白（prealbumin,PA）参考范围生理功能

临床意义PA0.18~0.45g/L1、组织修补2、运载功能降低具有意义：营养不良、急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化、肾炎时血清浓度降低。Alb36~46g/L1、营养2、胶体渗透压3、维持PH4、运输作用增高：严重失水、输入过多减少：丢失、肝脏疾病、消耗性疾病、腹水形成、肾病、严重感染、胶原病。★3、转铁蛋白（transferrin,TRF或Tf）由肝及单核吞噬细胞系统合成，分子量76500，位于β－球蛋白区带，负责运载消化管吸收的及红细胞降解释放的铁，以转铁－Fe3+复合物的形式进入骨髓，用于合成血红蛋白。半衰期7天。【参考范围】2.5-4.3g/L【临床意义】①属急性时相反应蛋白②并用于贫血的诊断,缺铁性低色素贫血血浆转铁蛋白含量增高,但铁的饱和度很低；红细胞对铁利用障碍引起贫血时，血浆转铁蛋白正常或降低，但铁的饱和度增加。3、转铁蛋白（transferrin,TRF或Tf）

由淋巴细胞合成，存在于所有有核细胞的表面，特别是淋巴细胞和肿瘤细胞。可自由通过肾小球滤过膜，但在肾小管几乎全部重吸收，被重吸收的β2－微球蛋白在肾小管细胞完全降解。4、β2－微球蛋白（β2－microgluobin,BMG或β2－m）【参考范围】1.0-2.5mg/L(血清)；尿：0.2mg/L以下【临床意义】血浆β2－微球蛋白含量升高见于炎症、肿瘤、各种类型白血病及肾功能衰竭，尿毒症患者血清β2－微球蛋白可达40mg/L。4、β2－微球蛋白（β2－microgluobin,BMG或β2－m）

2微球蛋白（2m）血清升高：肾小球滤过功能低下，慢、急性肾炎，肾功能不全肾前性：病毒感染，免疫疾患（SLE，Sjogren），恶性肿瘤。

尿中升高：

肾前性

肾小管障碍：

Fanconi，氨基甙类抗生素，重金属中毒，

Wilwon，烧伤。

肾小球障碍5、C-反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)★第一个被认定为急性时相反应蛋白,★由肝细胞合成,可结合多种细菌、真菌及原虫体对内的多糖。★能激活补体，引发调理作用，增强细胞的吞噬功能，对血小板凝聚和血块收缩有抑制作用。γ-球蛋白（各种免疫球蛋白主要位置及C-反应蛋白）★5、C-反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)【参考范围】＜8.0mg/L【临床意义】作为急性时相反应的一个敏感指标,C-反应蛋白在心肌梗死、创伤、感染、外科手术、肿瘤侵润时其血浆含量在24－48小时内迅速升高，可达到正常水平的2000倍。

6、1酸性糖蛋白（1-AG）

升高：急、慢性感染，AMI，肾炎，结缔组织病，自身免疫，过敏，恶性肿瘤。0.25-2.0g/L,是电泳1-球蛋白含量最高部分,

但着色很浅。7、1抗胰蛋白酶（1-AT）升高：感染，肿瘤，胶原病，妊娠，术后药物服用（口服避孕药，激素……）降低：遗传性：1-AT缺乏症后天性：ARDS，重症肝炎，肾炎，肺损伤，蛋白丢失，营养不良，早产儿，肾移植早期排异。0.83-1.99g/L，是电泳1-球蛋这一区带显色的主要成分8、铜兰蛋白（ceruloplasmin,CP）

血清中降低：先天异常；

Wilson病，

Menkes综合症，营养不良，肝疾患，蛋白丢失，新生儿。血清中升高：肿瘤，感染，

AMI，贫血，胆道梗阻，胶原病，妊娠，肺气肿，药物，吸烟。199、触珠蛋白（haptoglobin,HP）血清中降低：血管内、外溶血，合成减低，手术（开胸术）自家输血ABO不适合骨髓移植，烧伤后肾功不全，疟疾，慢性丙型肝炎，自身免疫性溶贫；肾功能不全，自尿中漏出。

血清中升高：

AMI，内源性发热，肿瘤……。10、2-巨球蛋白（2-macroglobin,2MG）血清中2MG降低：恶性肿瘤，RA，DIC，溶栓疗法，AMI，COPD，尿毒症，肌萎缩性侧索硬化，胰腺炎，溃疡性结肠炎，术后。遗传性2MG缺乏。升高：慢性炎症，肝炎，肾炎，慢性肝病，糖尿病。

纤维蛋白原4.0%

α2-巨球2.93%

触珠蛋白2.2%

铜兰蛋白0.53%

α1抗胰蛋白酶1.99%

α1酸性糖蛋白2.0%前白蛋白0.45%

转铁蛋白4.3%白蛋白55%

其他26.59%细胞遭到破坏合成减低异常表达1、炎症、创伤:

在急性炎症或某些组织损伤时,有些血浆蛋白质含量会增高,有些会降低,这些血浆蛋白质并被称为急性时相反应蛋白(acutephasereactants,APR)。包括：1－抗胰蛋白酶、1－酸性糖蛋白、结合珠蛋白、铜兰蛋白、C3、C4、C－反应蛋白、纤维蛋白原、前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白等。三、疾病时的体液蛋白质

临床常用炎症的标志物

(急性时相蛋白)

CRP

a1-酸性糖蛋白触珠蛋白

a1-抗胰蛋白酶铜蓝蛋白纤维蛋白原CRP

特性正常含量低（<5.0mg/L）炎症反应快（6–10h）变化幅度大（>1000倍）半衰期短（24h）1、炎症、创伤:CRP临床应用<10mg/L无急性炎症

10–99mg/L轻度或中度炎症

>100mg/L重度炎症1、炎症、创伤:CRP参考范围炎症的诊断炎症与非炎症的鉴别炎症过程的监测疗效考核预后1、炎症、创伤:CRP在感染和组织损伤时可升高100～1000倍，半衰期4～6h，对机体有益。CRP和炎症1、炎症、创伤:在发热、各种炎症状态、和创伤时，血清CRP水平升高1000倍。肝病,自身免疫失调和癌症,血清CRP中度升高。运用高灵敏的CRP方法（hs-CRP)对吸烟、肥胖、老年、以及表面健康的对象的检测，原先认为是正常的CRP（如：＜3mg/L)，研究发现在“正常”水平内的hs-CRP

浓度的高低，和未来发生冠脉综合征的危险有关。引起普遍重视。<10mg/L无急性炎症高敏C-反应蛋白(hs-CRP)

采用乳胶增强的比浊技术大大提高了分析的灵敏度(检测低限为0.005-0.10mg/l),

在低浓度

CRP(0.15-10mg/l)测定范围内有很高的准确性.

用这些方法所进行测定的CRP称为高敏感(high-sensitivity)或超敏感(ultra-sensitive)CRP,缩写

hs-CRP1、炎症、创伤:高敏C-反应蛋白(hs-CRP)动脉粥样硬化的血栓形成除了脂肪堆积过程外,也是一个慢性炎症过程,而CRP是动脉粥样硬化血栓形成疾病的介导和标志物。对表面健康的人群预示未来发生管脉

综合征的可能性。

1、炎症、创伤:CRP（C反应性蛋白）参考值：用WHOCRP标准品定标，测定468名健康人的均值为0.68mg/l，90%和99%百分位分别为3.0mg/l和10mg/l。多数主张将临界值定为1-2mg/l者有临床意义。1、炎症、创伤:

1、肝脏疾病肝脏合成大多数血浆蛋白，肝枯否细胞参与免疫细胞的生成调节，肝脏疾患可以导致多种血浆蛋白质发生变化。

2、肾脏疾病肾脏病变时早期就可以出现蛋白尿，而导致选择性血浆蛋白质丢失，严重肾病时肾小球失去分子筛的作用，可导致非选择性蛋白丢失。3、风湿病：免疫球蛋白IgA、IgG、IgM升高等。4、遗传性缺陷：某些蛋白质发生变异或量缺乏。与疾病的关系体液蛋白质测定方法:免疫化学法电泳法化学方法四、体液蛋白质测定学习方法：【测定方法】【实验原理】【参考范围】【临床意义】1、血清总蛋白（totalprotein,TP):【测定方法】双缩脲法（目前推荐方法）【实验原理】蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结合而成的，二价铜离子在碱性溶液中与蛋白中的肽键（-CONH-)发生反应形成紫红色络合物，在540nm有吸收峰，并与蛋白含量成正比。蛋白+Cu2+→Cu–蛋白络合物（紫红色）【参考范围】60－80g/L【临床意义】

血清总蛋白升高：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、冷沉淀球蛋白血症等多克隆性或单克隆性免疫球蛋白病，多发性骨髓瘤患者的血浆球蛋白大于50g/L，总蛋白大多都大于100g/L。血清总蛋白降低：反应白蛋白合成减少或蛋白质的丢失肝细胞损害合成减少：肝炎、肝硬化、肝癌总蛋白＜60g/L,白蛋白＜25g/L，低蛋白血症营养不良：摄入不足丢失过多：肾病、烧伤、大出血消耗增加：结核、甲亢、恶性肿瘤2、白蛋白（Alb）的检测【测定方法】溴甲酚绿终点法（推荐法）【实验原理】血清中白蛋白与溴甲酚绿（BCG）在pH4.2环境中结合生成绿色复合物，溶液由黄色变为绿色，在630nm有吸收峰，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，从而测出白蛋白含量。白蛋白+BCG→白蛋白－溴甲酚绿复合物【参考范围】35－55g/L【临床意义】

增高：严重失水、输入过多。

减少：丢失、肝脏疾病、消耗性疾病、腹水形成、肾病、严重感染、胶原病，血清白蛋白小于20g/L，临床可出现水肿。3、血清球蛋白（globulin）【检测方法】现多用血清总蛋白减去血清白蛋白

【参考范围】20-30g/L

白蛋白/球蛋白(A/G):1.5-2.5/L【临床意义】血清球蛋白升高见于某些自身免疫性疾病、炎症或感染，还见于恶性M球蛋白血症。降低见于合成减少，有低γ－球蛋白血症或无γ－球蛋白血症。4、血浆纤维蛋白原（fibrinogen，FIB）测定【测定方法】：①纤维蛋白原凝固法②免疫化学法【实验原理】：纤维蛋白原在凝血酶催化下形成纤维蛋白，纤维蛋白原含量与形成纤维蛋白所用时间成反比。【参考范围】2.0-4.0g/L【临床意义】

血浆纤维蛋白原为急性时相反应蛋白之一,其血浆含量增高常见于某些感染、严重组织损伤、休克、外科手术后、肾炎、风湿热、恶性肿瘤等。其他放射治疗、月经期和妊娠期亦可增高。血浆纤维蛋白原含量减少常见于营养不良、严重肝功能损伤、弥散性管内凝血、胎盘早产剥离、分娩时羊水渗入血管使在血管内形成血栓、先天性纤维蛋白缺乏症等。5、前白蛋白测定【实验方法】免疫比浊法(透射比浊)【实验原理】抗原抗体反应形成免疫复合物，340nm测定。【参考范围】0.18~0.45g/L【临床意义】能迅速反映营养摄入处于正平衡或负平衡。而白蛋白的半衰期长,达21d,即使肝脏停止合成白蛋白,8d后外周血中的白蛋白比浓度仅降低约20%,敏感地反映早期肝损害情况；PA是一种非特异宿主防御物质,所以在急性感染时,PA在血清中浓度可迅速降低,尤以细菌性感染时更为明显。

散射浊度法依Rayleigh光散射理论

简式：I=knv2

n：单位容积内粒子数目

v：粒子大小

I：散射光强度光源I0浊度样品I检测器A检测器B（透射浊度法）（散射浊度法）透射浊度法和散射浊度法的光路B

IB检测技术的应用6、C－反应蛋白【实验方法】免疫比浊法(散射比浊/透射比浊)【参考范围】<8mg/L【临床意义】：最重要的炎症和组织损伤指标，敏感的急性期蛋白。比血沉，白细胞计数更敏感。细菌性感染，心肌损伤，风湿性疾患……与疾病的进程和愈后有关。

7、尿总蛋白测定【测定方法】1、磺基水杨酸－硫酸钠比浊法。

2、干化学法

3、尿蛋白电泳法【参考范围】儿童：﹤40mg/24h

成人：30－130mg/24h【临床意义】生理性蛋白尿、病理性蛋白尿（肾前性、肾后性、肾性蛋白尿（肾小球、肾小管、混合性蛋白尿）。8、尿微量蛋白质测定目前临床生化常做检测的尿微量蛋白质有：白蛋白（Alb）、

β2

－微球蛋白（β2

－m）、α1－微球蛋白（α1－m）、视黄醇结合蛋白(RBP)、转铁蛋白（TRF）、本周蛋白（B－JP）、α2－巨球蛋白（α2－MG)等。9、脑脊液蛋白质测定【测定方法】：浊度法－－磺基水杨酸－硫酸钠比浊法。

【参考范围】150－450mg/L【临床意义】

脑膜炎：化脓性脑膜炎蛋白质含量显著增高，结核性脑膜炎时中度增高，病毒性脑炎时轻度增高。出血性脑病：脑室及蛛网膜下腔出血时脑脊液蛋白质含量中度增高。脑部肿瘤或椎管梗阻如脊髓肿瘤、蛛网膜下腔粘连脑脊液蛋白质含量增高。132以%表示：Alb:57%~68%α1:1.0%~5.7%

α2:4.9%~11.2%

β:7%~13%

γ:9.8%~18.2%以g/L表示：Alb:35~52g/Lα1:1.0~4.0g/L

α2:4.0~8.0g/L

β:5.0~10.0g/L

γ:6.0~13.0g/L血清蛋白电泳的正常组分133（二）异常电泳图谱的临床意义

异常血清蛋白质电泳图谱的分型及其特征图谱类型TPAlbα1α2βγ肾病型↓↓↓↓↑↑↑不定肝硬化型↑N↓↓↓N↓N↓β-γ融合急性炎症NN↓↑↑N慢性炎症↓↑↑↑蛋白质缺乏型个别区带出现特征性缺乏

M蛋白血症型在α-γ区带中间出现M蛋白区带134(1)急性和慢性炎症主要特征：白蛋白减少或正常，α1和α2球蛋白增高，当有明显的急性炎症病灶时，可显著增高。炎症转为慢性时其增加程度减低。γ球蛋白增高不明显，当炎症转为慢性时，可明显增加。↓/N↑↑急性炎症型代表疾病：慢性胆道感染、慢性泌尿系感染、结核病、自身免疫性疾病、过敏性疾病、恶性肿瘤等。↓↑↑↑↑慢性炎症型135（2）肝脏疾病↓β+γ(↑↑)主要特征：清蛋白在所有病例中均有不同程度的减低，α1、α2和β球蛋白正常或降低，γ球蛋白常明显增高，γ区带的宽度也明显增加，可见β-γ桥，为本病的特征。根据β-γ桥的程度可将其分为三型。Alb带:PA，Alb明显降低α1-带：AAT增高显著,AAG偏低α2-带：Cp轻度升高，AMG明显增高；Hp偏低β-带：TRF明显降低γ-带：IgG弥散性增高，IgA明显升高；CRP轻度升高。肝硬化136第Ⅰ型：

β和γ区带连成一片，难于分开，称为β-γ桥。此型除见于极少数结缔组织疾病外，几乎全见于肝硬化，如见到β-γ桥，并伴有α1和α2球蛋白减少时可确诊为肝硬化，故将此型称为肝硬化型。第Ⅱ型：有β-γ桥存在，但在β与γ区带之间仍可见一浅谷，两者可分开，称为不完全性β-γ桥，但仅据此尚不能诊断为肝硬化，仅能作出提示诊断，故将此型称为提示肝硬化型。第Ⅲ型：为非特异型，β与γ区带能明显分离，没有形成β-γ桥，与其它原因所致的高γ球蛋白血症完全不能区别。137病理分析:β-γ桥的出现与血清免疫球蛋白,特别是IgG、IgA、IgM同时增加有关,其中又以IgA影响较大,IgAIgM泳动在β2与γ之间时,使

β与γ区融合而形成β-γ桥。138原发性肝癌型主要特征：白蛋白和α1球蛋白之间有一小的甲胎蛋白带。↓↓AFP↑↑139（3）M蛋白血症M蛋白血症：浆细胞病时，异常浆细胞克隆增殖,产生大量单克隆免疫球蛋白或其轻链或重链片段，病人血清或尿液中可出现结构单一的M蛋白。三种类型：免疫球蛋白型：IgE、IgA、IgM或IgD的一种轻链型：由于K或λ轻链合成超过重链，而游离于血清重链型：浆细胞只产生免疫球蛋白的重链或有缺陷的重链140主要特征：在电泳图形上，出现异常浓集色泽深染的窄区带，此区带多出现在β或γ区，偶见于α区。用光密度计扫描，可见到尖锐的高峰。

（其宽窄是与ALB区带相较，若大致相等或窄，应考虑M蛋白）检验学部属于蛋白质的实验项目

生化室：总蛋白，白蛋白，球蛋白，载脂蛋白A1，载脂蛋白B，前白蛋白，脂蛋白（a），高密度脂蛋白，低密度脂蛋白，极低密度脂蛋白，血清蛋白电泳（白蛋白，α1、α2、

β、γ球蛋白），血尿β2微球蛋白，糖化血红蛋白，肌钙蛋白-T，24小时尿蛋白定量，尿微量白蛋白，酶类。血凝室：纤维蛋白原，AT-Ⅲ（α2-球蛋白），各种凝血因子除第Ⅳ因子（Ca2+）均为蛋白质，FDP,D-D是纤维蛋白降解产物。

免疫室

免疫球蛋白IgM,IgG,IgA,C反应蛋白，前S1蛋白、类风湿因子

肝炎抗原抗体类：HAV-IgM，HBSAg,HBSAb,HBEAg,HBEAb,HBCAb-IgM,HBCAg-IgG,丙肝抗体，戊肝抗体

肿瘤标志物：细胞角质素抗原211，铁蛋白，甲胎蛋白，激素类:催乳素(PRL)，促黄体生成素(LH)，促卵泡生成素(FSH)，促甲状腺激素(TSH),胰岛素，补体类：C3,C4检验学部属于蛋白质的实验项目小结：了解血浆蛋白质组成、功能及分类。熟悉一些重要血浆蛋白质。掌握疾病时血浆蛋白质变化掌握体液蛋白质测定CompanyLogo回顾案例3肝活检结合影像学诊断为

原发性肝硬化案例4一棕黄色标本为给出胆红素结果，仪器标识为：高；说明超过仪器测试范围，检验师稀释标本再次测试，计算为31.5mg/dL;ASTALT均升高

最常见为病毒性肝炎、其次可能为酒精性肝炎、服用药物引起

肝炎病毒往往采用血清学免疫测试CompanyLogo案例5一8岁儿童患者EDTA血浆血氨结果为120ug/dL(参考范围为29-70），比较前一次结果为100ug/dL

检查质控及仪器维护询问临床确定其为急性肝衰竭血氨升高表明可能导致肝昏迷发展为肝性脑病

血氨主要由蛋白代谢产生通过鸟氨酸循环生成尿素

CompanyLogo部位——肝脏细胞鸟氨酸瓜氨酸瓜氨酸精氨酸代琥珀酸ATPAMP+PPi延胡索酸鸟氨酸精氨酸H2O尿素天门冬氨酸NH3CO2氨甲酰磷酸+H2O尿素循环Company