病毒的形态学诊断

1实验十病毒的形态学诊断、培养方法和血清学试验目的〔一〕观察病毒包涵体，并掌握其诊断意义。〔二〕掌握病毒的形态并了解病毒包膜的获得。〔三〕了解病毒培养的三种方法。〔四〕掌握病毒学中主要血清学反响的原理〔五〕熟悉病毒血凝抑制试验的测定过程哨内躁墨骄容范〔一禾〕病渐毒的愿形态劫学诊揭断颂1.争病德毒的粪电镜虚照片饱〔示你教〕葵2.旺狂醋犬病猪毒包供涵体乏〔示备教〕罗3.利麻裤疹病驳毒包铃涵体皱〔示白教〕馆〔二爬〕病覆毒的股培养螺法〔悄录像泻〕省乐1抱.股病毒跳的动圣物接秃种法判示2店.书病毒床鸡胚好培养荡法达独3坝.罢病毒铁的组纺织培油养法画犁廊〔三摸〕懂血凝湖抑制滚试验特〔操倚作〕数病毒晶的形薄态学赵诊断达 摇病毒芦形态绍学研卫究方娘法可狼分为格两种容：一气种是咳应用椅电子腰显微资镜技故术，岩观察没其大晨小，睬形态福及排妻列特凝征，劈以帮截助诊沿断；因另一杀种是晒应用仙光学游显微贴镜通偿过涂倚片染共色或选切片贴染色返，观顺察包刑涵体抗。病伪毒感胀染细落胞所通产生吹的包世涵体且，其许特征按根本男是固取定的终，故病对病纵毒性估疾病翁的诊枣断具段有一裹定价灰值。菊【方西法】疑〔一专〕病登毒的乓电镜种照片趟〔示酸教〕秒 颜观察须腺病负毒、挖疱疹更病毒滑的电两镜照缘片，比注意誉其形违态结宝构、斩大小何、排什列、蛛及其眼包膜述的形家成。借 峰〔二约〕狂暑犬病弹病毒震内基扰〔N抄eg裤ri边〕包排涵体蹄〔示西教〕悟 享用高凶倍镜猾或油踩镜观唇察经浪HE掠〔苏遗木紫洪-伊锤红染涉色〕抽染色侮的死掀于狂勤犬病意的犬汪脑组脾织切拦片，声注意晌包涵招体在版细胞语内的楚形态茎、位吓置及执染色镇性。召 代〔三圈〕麻冻疹病李毒包降涵体戚〔示怪教〕曲 倒用高勾倍镜剂或油拿镜观鹅察经熊麻疹敲病毒招培养偷后，福HE添染色卸的人玻胚或延羊膜另细胞船标本险片，映注意兵包涵岔体在具细胞抽内的勇位置完、形畅态、惧染色烂性以后及细烈胞融稻合情纸况。菜病毒乞动物肺接种殊法浆 址实验很动物挺在病宅毒学皇研究遥中有售四方贯面用蒙途：残①睡别离通鉴定戒病毒辆，如很乙脑酱病毒猫；寨②样连续李传代返通过步，以泄减弱季有毒晌株对迎人的矛致病吃力，常如狂曲犬病漏病毒育；扬③菜制备须抗血育清；尿④即病毒旗致病岔机理购的研没究。愁 无常用缴的实仿验动堤物有主小白坚鼠、锻地鼠巩、豚搂鼠、为家兔陶、绵历羊、术鸡、虽猴等笔。在宏病毒腥学研雅究中谷，动叉物接惰种时携为避跨免动缺物本恳身可趋能带虫有病啊毒，评多采麦用实押验室锻自己疲繁殖睁的动鱼物。孟首先辅根据失研究恶目的匆选择迎动物贵种类陕，对导病毒底致病弓机制昌的研刚究，泥那么选氧择愈水接近俯人类叙的高麦等动栗物〔怖例如注灵长楼类〕塘研究排结果构愈有如价值鸭；其奸次要听注意节动物斤的年妹龄、狸性别支和接溜种的僚途径波等各搅种因芽素，妹一般妥年幼灿的动显物比逆成年荐动物咬对病赔毒的意敏感河性高捕。至瓣于接掉种的西途径开应根茧据病哨毒的弓嗜性镰决定龄，例泉如脑塞炎病械毒以品脑内输注射穿最敏锁感。厕 逗〔一上〕小锁白鼠武尾静阔脉接迟种〔荷录像捞〕起 押【材厨料】注 阵1.暂动善物：乱小白疼鼠吧 牺2.皱病墙毒悬鹅液哑 短3.赞碘双酒、拜酒精探、二草甲苯震、无港菌0腾.2挤5m滚l注被射器福、4继号针朵头及绍小铝彻匣毁 授【方咱法】干 终1.页将迟小白贞鼠固赔定在掏小铝望匣内姐，露事出尾赴部，颗用碘饥酒消亚毒尾劣部，享然后贝用酒抬精棉踪球连吧续擦奶尾部各皮肤窑〔必埋要时驳用二波甲苯谈擦〕哪使血观管扩廊张。仿 律2.僻尾牙背和包左右难两侧旨三根拖血管毒皆为个静脉肝，可感选一跑根扩砌张较妨好的扁静脉时作接骄种用侄。左域手拇渣指捏祥住尾胡部的昂远端秋，向雀下弯偷45敏°菊，右取手持畅注射种器，亿于弯探处进杜针静洁脉，贩推液算0.刚1毫帮升。绞 迫注意律：推蕉注时京遇阻砖力且哨皮下仅隆起冠发白侍时，触表示顷针头志不在光血管像内应趋拔出把重新街进针推；如夏针头幻在血押管内眠，推鸦注时疏不感椅阻力驳，且壁可看习到血唯管中烦血液辽由于泰注入钳液体丝而后枯退。怒 筝接种指后逐顿日观煎察动臣物发瓣病情搭况。胖〔二秩〕小搏白鼠偏鼻内慰接种仰〔录钞像〕应 当【材顷料】厉 拥小白脂鼠、蜡流感院病毒顿鼠肺识适应屠株病抖毒悬篇液、煎无菌服小试隙管、舍无菌赠毛细行管、冻麻醉抛用乙抓醚、乳棉球蹄及小盏玻瓶店。米 章【方速法】症 填1.如首际先将竞沾有集乙醚聚的棉杀球放泽入一塌清洁芽小玻轨瓶内凑。左泛手握祖小瓶星，右途手抓诊住小切白鼠益，将肢其头重部塞厉入瓶递口，坑进行晴全身摔麻醉拢。注句意麻侮醉深巾度，返不宜外太浅跃或太贯深，览太深驾时易倡遭致撇麻醉葛死亡斧或非逗特异毯性吸讯入性谈肺炎吩，太孕浅那么瓜易在驾滴种萝时打递喷嚏蜻。瞒 警2.秩用混无菌庸毛细羽吸管武吸取见病毒马悬液尤少许拍，连次同毛辽细吸顾管插刚在无暮菌试酷管中疾备用罪。箭 赢3.柜用港左手编将小珠白鼠仁握在拜手掌石中，疮大拇杜指及脏食指领抓住梳小白相鼠耳牌部使栽其头民部朝众前并只呈仰蛇卧位袜置，未另一维手取蜂事先球吸有誉病毒拜悬液膜的吸围管，纳慢慢历滴出厉一点齐于滴熟管口犯而不堡使其弄自然记掉落泥，呈训悬滴驼状。错将悬映滴靠命近动边物鼻川尖，剑动物摊在呼抛吸时带自然遭吸入那么，一乐般为炊0.貌03叹～0年.0长5毫墨升，镜不宜吃过多蜘。凶 羡4.述小荐白鼠项慢慢杂苏醒雄，在喇饲养赴盒中荒逐日肝开始离发病三，发疾病的魔病症旱常为专毛耸悉、咳抄嗽、泳不食俱、甚豆至死其亡。哨解剖垂尸体快可观约察到铅肺炎执或血元性病声灶。帜 鬼〔三分〕小以白鼠炭脑内常接种东〔录降像〕代【材类料】驼脑炎娱病毒玩〔小域白鼠关脑脊乏髓炎订病毒壮〕悬屋液。显脑组迎织先便用无那菌生躺理盐坚水洗狱去血茅液，设再加守10俗％脱伴脂奶榨盐水瑞研磨瓦成1傍0拌－1晋悬液煮，然菊后用轮30柜00寻转/瑞别离抱心沉已淀3替0分鹊钟，讯吸取租上清享液供剂接种乎用。蚁小白铜鼠：久3周脚龄，仙体重摄6～膨8克之。果无菌臣0.文25差毫升垄注射揉器及诞针头纪〔4塑号〕粪、煮旬针锅通、碘假设酊、推棉签停。跑 禁【方酸法】迫 践1.骡以等无菌哄0.炭25逆毫升皇注射钻器抽兰取脑板炎病音毒悬员液0咬.1冲毫升偶，去列除注贞射器活内的符气泡哀。属 全2.抹取雷出小侨白鼠获，左著手将促小白乘鼠固神定，恭固定慧时用壤大拇秋指和鼻食指芳捏住遮小白息鼠的辞头部金，左回手手毅掌轻障轻按斑住小窗白鼠伍的体欧部。贩 闪3.支右惯手以苏棉签迫蘸以萄碘酒柔，消创毒小录白鼠刊颞部赠皮毛宪〔不涨碰到捞眼〕壤。挺 耐4.贵右坝手拿索注射眨器在墓小白责鼠颞羽部〔岗眼与型耳根拥连线叙的中血点略蝶偏耳叮朵的芹方向筑〕刺舌入，托进入着颅腔按，进融针2森～3款毫米据，不层要插范得太返深，廉注射恼量为洒0.山02捧～0暖.0炕3毫煌升。黄 灶5.别注大射完胜毕，妖将用既过得饥注射装器放哄入煮槽针锅萄内煮汽沸消乎毒。教动物各一般蛇在3垫～4牌天后成开始沉发病睛，食胳欲减怎退，膀活动偶迟钝期，毛法耸，痕震颤琴，慢竞慢发饮展为维麻痹历，瘫砍痪而愤死亡钞。犹 测本法容适用榨于一煮些脑闹炎病青毒的链别离面培养棍。君病毒晌鸡胚芦培养腔法驱 再鸡胚夕培养陵法常律用于充痘类奋病毒还、粘舞病毒坛和疱临疹病摇毒的饿别离熔、鉴企定、垃制备本抗原兽、生季产疫网苗以纽及研廊究病叉毒性宽质等业。展 汪鸡胚萝和实眠验动乖物一绢样，妨为一惯整体坟动物冶，有淹神经火血管所的分淡布及历脏器谢的构晓造；躁鸡胚功的组千织分销化程忠度低宣，病石毒易组于繁否殖，野感染皂了病属毒的戴膜结剃构和床液体研中，献含有找大量层病毒润；鸡衔胚来腔源充乳足，曾操作崇简单稳、通阴常本涛身是辫无菌演的，肤对接撇种的陕病毒躲不产烦生抗炉体为掌其优诞点，稠但除格产生妻痘疱顶的病设毒及予引起成鸡胚厚死亡曲的病咽毒外京，通币常不抽产生压特异演性的岔感染钩指征瓶，必是须利喘用第却二个县试验共系统询来测窑定病组毒的趁增殖单。据 我常用斧的鸡曾胚接雾种方历法有蝶四种斥，即琴绒毛吵尿囊洽膜上沿接种咽法、殃羊膜龟腔接税种法执、尿就囊接表种法腊及卵群黄囊蚕接种烫法。壶根据勇不同辅病毒球和不粉同目晋的采塞用合幼适的场接种苗方法柔。斧〔一你〕尿梅囊腔蜂接种蜜法〔难录像男〕便 理【材扒料】果 披副流祥感病星毒1足0司－3息稀释物液，誓10喝～1放2日躲龄鸡屋胚、妹无菌增1毫凭升注吊射器涌及7蜂号针单头、尽电动彩磨蛋曾器、涛检蛋掘灯、钥弯头毕小镊雹子、夏蛋架蜡、碘业酒棉级球、尸胶布蜂、大胃头针室、无呢菌试响管、粥无菌涂毛细舰吸管行。咬 步【方盾法】终 咽1.浊选姜用1维0～芝12清日龄廉鸡胚绣，在发照蛋多灯上妙照视康观察描鸡胚划是否丑存活枝，根闹据如剂下：师①醉小血懒管是尽否清欺晰；睡②漏胚胎云是否变活动钟，观店察小份鸡的菌眼睛委黑点待是否避移动拒；盯③匹蛋白吨一边护和胎凡盘一系边是链否界场限分抬明，勿蛋白套一边霞较亮杯，胎兴盘一期边暗护红色薯，如喜果胎絮盘一定边发营黑或搅苍白娇都表川示胚叔蛋已宿死亡伞。袋 阶用铅畅笔标暴明天画然气母室，清鸡胚缺及大屋血管梨位置助，然轰后在庄绒毛数尿囊涝膜发逐育区敏避开乏大血哀管的击地方堤作一际记号石，定羊为注梦射入屡口。猾绒毛零尿囊拥膜区释血管鲜丰富院，在冰照视消时呈箭现红蜜色，辅几乎径占据以鸡蛋应的二刻分之厕一。啄 共2.甜用犹碘酒贡消毒纲注射普入口昨和天巧然气快室端必的蛋容壳，亡再用绵电动茅磨蛋逝器于臣注射油入口软和天粪然气榜室端忌的蛋愚壳上盐磨一携小孔关，勿倦伤及朴卵膜号。坡 果3．沿用大少头针询通过努火焰廉消毒哀后刺作穿气烈室端葛所开开小孔禁的卵槐膜，意这样熄可避控免在桥注射暗时液馋体回盖流出很来。病 叶4．豪将鸡糊胚横挨卧于挖蛋架庆上，虏用无袋菌1捧毫升摸注射碧器抽宝取病奉毒液坝体，盼针头贸于卵叹壳成蛛30岁°碗交角剂，由像注射袄小孔浊刺入闻0.们5～泽1.顿0厘淡米，摊注射框0.遵1～纹0.君2毫贿升〔涉图1嫁0-吵1〕究。积 泰5．慧注射旁完结杨用胶吴布封历口。庄封口猎前胶巴布用煎碘酒鞠消毒兔，并次通过店火焰份烧去适余碘庄。用钟过的及注射虫器用盟煮沸搅法消侍毒，陕鸡胚嫂放入籍35牙～自37应℃韵培养档。祸 土6．瞧注射既后次滋日，接逐日消观察著鸡胚寄生活埋情况宗，孵暴育4三8～赖72啄小时派后移膨入夸4斤℃催冰箱垂。注冒意鸡骂胚必蜻须直姿立，我令气判室端隐朝上锋。分 悄7．冲收获避尿囊旧液之宾前取南出鸡阵胚，第用碘箩酒消借毒气宁室端窑，并偿用镊虾子击旗破气燕室端视卵壳虑，沿讨气室式边缘蓄小心蹦翻开炼一大职缺口杨，然欣后用拍小镊部子撕惨去卵蜡膜及摸撕破犯绒毛元尿囊悬膜，聚最后来用毛薯细管嗽吸取欢尿囊别液，枪一般佣可吸远得4限～5植毫升秩。彼 迫8．掩滴定厕尿囊践液的摔病毒温血凝娇效价袜。须尿囊绿接种费法适茫用于筑某些茅呼吸虎道病眯毒，伟如流笛感病碑毒、挣副流日感病壤毒、豆新城镰鸡瘟肝病毒霞等的春培养陈，惟于别离盾培养圆不如曲羊膜孝腔接闹种法攻阳性煌率高丛。羊水卵白羊水卵白气室气室卵黄囊尿囊液卵黄囊尿囊液图10-1鸡胚尿囊腔接种法图10-1鸡胚尿囊腔接种法唯〔二偿〕绒及毛尿侦囊膜刺上接遇种法础〔录危像〕膨【材表料】汪牛痘亭苗病燃毒1数0阅－3疼稀释铜液、痛10魔～1窗3日较龄鸡搭胚、索橡皮锤乳头祖、眼胁科镊扭子或宵小剪答刀、煤无菌绿培养榨皿、监无菌绝生理庙盐水允，其护余同睬?尿壁囊腔都接种户法?纱。皆【方袋法】走1．甜选用扰10够～1童3日旨龄鸡健胚，岁在照描蛋灯澡上照营视观泡察是哥否活似胚蛋繁，用认铅笔寄划下出绒毛蚂尿囊假膜发真育的宽界限怠。吴2．淡将胚包蛋横衰卧于怒蛋座性上，多使其计绒毛名尿囊商膜部抗位朝谋上，茧用碘箩酒消贞毒绒盗毛尿血囊膜恢部位写和天追然气廉室端引的中让心部题，待胞干后理即用盒磨蛋伴器轻罗轻在影绒毛兄尿囊泪膜中贺心部松磨一逆三角押形窗顽口〔小每边指一厘谣米许乱〕，糟磨破相卵壳厕而不咐使卵淘膜破僻裂，烫同时习用磨话蛋器沸于气能室端钱开一累小孔滑。注插意：巧已磨祥好之站鸡胚干必须每于1艰～2从小时狸内接申种，获否那么俗绒毛宗尿囊桐膜易件与卵竹壳粘捡着。稻3．揉用分俘离针筝或大亭头针全通过攀火焰肢消毒捧，穿患通天播然气嫁室端非所锯府小孔筋；并鸣用分鼓离针鄙或大圾头针纷轻轻丘划破劲卵壳棒，露顷出三污角形喉卵膜签，最晌好将庆别离道针或窝大头障针3商0寄°印角度刻自上丽往下浅压迫医卵膜判一个膏小口祸，这计样不南致损础伤绒奸毛尿网囊膜顺。年4．口立即使用橡偶皮乳裹头在见天然匙气室新一端露小孔棵吸气负2～悲3次桃，目且的将映天然浆气室袍的空妻气吸口去，隔而上委面所弟开的袋洞口钳进入悲空气岂，形西成一墨个人普工气单室，聋可在株照蛋跳灯上费照视凯一下任，看倦天然袍气室情是否陵消失里，如广未消非失那么秤尚需凉再吸栽气数邻次〔晴图1烧0-能2〕录。滔5．收用小肾镊子现通过骗火焰旨灭菌洋，稍敲待冷闭却后跑将三眯角形漠窗口匪的卵驼膜撕撇去、借暂时欧盖以朝无菌恼培养灵皿防碗止污拖染，肺然后偶用消炮毒注委射器努吸取岗牛痘端苗悬腰液〔迈10尸－3殃稀释宜液，棉内加雁适量益的链另霉素傲及青志霉素它〕，在揭去崇培养更皿，左于窗抛口滴令入0利.1端～0单.2暮毫升泳病毒兄液，熟注毕灿后窗掠口用瞧胶布三封口券，封袖口前底胶布剖用碘未酒消痰毒，少并通散过火丝焰，容烧去勒余碘粥。用马过的伶注射讲器煮徒沸消佛毒。缸6．猪孵育被于辈37蕉℃些温箱远，每谣日观炭察生芬活情帆况，拍接种勉10临－3遗稀释蠢的牛询痘苗忙后的钓鸡胚扯一般姿不死有亡，笛但也才可能跃在3卧天之驳后发匪生死登亡，齿如发遣现死匹亡那么粘立即内放入掀普通锄冰箱近，如兔不死缓亡那么肾培养勒4～斜5日鞋后放掉入普鸦通冰扎箱，肚等待古观察俭检查雷。伯7．掏将感丈染病莲毒的患鸡胚碗自冰磨箱中输取出碌，用仅碘酒病消毒啦人工旁气室瞧面，析然后榴用镊狐子撕蝴去胶典布并丈将卵碑壳的递三角罩形窗话口扩类大，址以便山剪取役绒毛劈膜，宾此时霞在明昨亮处买可清傲楚地颜看到砍牛痘规斑，膀呈白婚色点敲状，乡有时既融合抽成一抵堆或捡一片筛。逐8．般左手岭用小阶镊子周镊起迅绒毛怜尿囊趟膜，待右手划用小汽剪顺包卵壳赏四周翠剪下愤绒毛俩尿囊危膜放辩入无朽菌培育养皿恰内，蜓并用捆无菌己生理堆盐水谅洗涤挡1～传2次沟，再饭将膜假张开郑，膜循上牛没痘斑购就看麻得更唐为清谁楚。陈绒毛帮尿囊形膜上撞接种涝法，峡除适冷用于困天花兽，牛事痘等揪病毒真外，边尚适售用于重单纯居疱疹粮病毒光和其段它一这些病勇毒，罢但其片它一碧些病评毒不躺如天池花、阴牛痘晃、单哗疱疹视病毒物那样佛具有竭明显印的病兰斑。绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜羊水羊水卵白卵白卵黄囊卵黄囊尿囊液尿囊液图10-2鸡胚绒毛尿囊膜上接种图10-2鸡胚绒毛尿囊膜上接种较〔三雨〕羊昆膜腔帅接种赔法〔笼录像设〕抵【材摘料】纹副流雀感病酷毒1虏0着－3业稀释虑液、排9～御10侨日龄铁鸡胚伞、灭猪菌液投体石雀蜡、议其余脊同?毯尿囊殿腔接轿种法属?。辆【方轰法】植1．肌所用牺鸡胚膏在使奏用前壮一天竟，将辈鸡胚锅直立源卵盘叶培养恨，使打其胚菜胎向泰上，凯便于尾操作唉。洒翼供2．联接种朗前检机查鸡罩胚生愿活情深况，兽并用锄铅笔剖画出建天然撕气室友和胚匪胎的略位置代，然宅后用舌磨蛋凡器沿客天然删气室胖的边局缘和酱胚胎修位置及近处抚，锯预一方糟形小债窗〔于每边寿约1瓦厘米例许，貌如图童10牛-3扮〕细。胞 夹3．啦用小员镊子薯挑去贱方形霸卵壳返和撕仗去卵叛膜，丸再用冶无菌列吸管姜，吸严取石刮蜡油协少许完，滴膊入2男滴，毯石蜡典油在棚气室生面的码卵膜鸣上很动快散播开，区使膜状透明搜，这爹样在松鸡蛋刷照明存灯或闲检蛋歼灯上落，可致清楚壳地观们察到蝇整个未鸡胚峡。滥 只4．滋用无晃菌1袜毫升农注射伟器抽网取少受许流然感病匪毒液恋体，场将鸡雷蛋直狠立于谷照明逆灯或尘检蛋毯灯上裕，针限头自编窗口益对着金鸡胚丛直下胁，穿饿过绒撞毛尿绳囊膜汤，羊呀膜腔笔、推忆动注汽射器铃，注为入0雹.1烦～0妖.2灾毫升裤，针召头刺啦入时袭注意拴勿伤烤及鸡及胚本涨身，第最好主从小恩鸡的吸颈部动空隙沫中插采入。适 假设5．蕉注射绞完毕语后，种用胶船布封政口〔悲胶布缺先经赔碘酒询消毒乏和通详过火伤焰烧粘去余宫碘处蚊理〕吉。用仿过的咬注射于器煮控沸消搞毒处文理。幻鸡胚姥放入健35无～堤37枕℃宝培养粱48律～7非2小句时。皂 搭6．如自注皇射后弹次日嫂起逐绞日检享查鸡裂胚的王生活纲情况门，2抗日以减内死席亡者当多为状非特料异性宪损伤卧而致烫死；廉2日跌后死弱亡者乞视为蝇特异亦性死胞亡，昌流感障或副拜流感度病毒允10满－3晋稀释邀注射猪时，乘一般响不引相起死膜亡。旗收获延病毒宪之前求将鸡蚂胚移侵入普蛇通冰迁箱1耍8～迷24搁小时须，将叶鸡胚盾冻死强，以淋减少膜收获奶时的连出血妙。管 学7．承冰箱称取出舟鸡胚裳，碘遮酒消器毒鸡矛蛋气差室端冻，撕梁去胶宪布并站将蛋戏壳窗辫口扩冈大，烫用小帜镊子娇撕破拍卵膜勾及绒胳毛尿切囊膜哄，然盆后用行毛细苦管吸撕出尿稼囊液纠弃去战，尿形囊液分吸完绣后，缎左手事持镊格子镊茅住羊渡膜腔慕，右速手以况毛细役吸管淹插入骆羊膜尝腔吸恭取羊洁水，益一般议羊水倡可吸间出一蹈毫升叉左右罢。治 好8．虚滴定吊羊水追的病筒毒血敬凝效颠价。蓝 画羊膜旷腔接剂种方劈法适属用于烈一些论呼吸树道病很毒，水如流兼感病虏毒、屋副流桑感病盼毒及咐流行余性腮却腺炎高病毒崭等的丘别离德。悦壶严干沃傻丢垦欺轮扬抄铁卵黄囊卵黄囊气室卵白气室卵白羊水羊水尿囊液尿囊液图10-3图10-3羊膜腔接种法左四、示病毒拜细胞某培养捆法及跃病变腥观察傻〔录班像〕砖细胞始培养霉法是劝目前收培养怒病毒核应用园最广稳的一栋种培锡养方求法，挖其优济点是最〔1缘〕经晶济适脾用，你结果霉正确眼且敏航感；喝〔2管〕较锅实验粉动物打易于窄控制闻。细蜘胞培桐养法遭多应包用于详病毒半的分克离培徒养，会进行赌血清馆中和张试验碧及制射造疫坦苗和鸦抗原腰等方趋面。拦很多炼组织饰细胞矮，包肠括鸡渴胚、眨鼠胚仿、各辰种动仿物的供肾组醒织细淘胞，挪人胚勉羊膜卡组织亩细胞嚷或流芒产胎见儿组酬织细醒胞〔盏应在奏死后搁6小侍时内辨采取点，因斩时间纤过长躁，组迹织细举胞生史长成考功率口下降卷〕等颜均可姜作细赢胞培裂养的暂来源鸦。搅细胞筛的选消择主比要依扑据组那织细淋胞对薪病毒偶的敏励感性淋。能谷引起欣病变辉的组计织细苏胞，届往往愧取自医病毒甘的自忙然宿检主，梨特别烤是引毛起疾币病的愈宿主饥的某吓些脏壤器组灯织细颜胞。温人类团病毒顽，用枪人或陵猴的俩组织拌细胞著较敏首感，楚但这宿不是锻绝对秋的，意如地警鼠肾产细胞勒较人扮肾细叹胞对励流行什性乙膜型脑滴炎病事毒敏刚感。文原代布细胞甩培养辉法厉【材仙料】霸9～浊10扶日龄蝴鸡胚恭、H清an灶ks诊氏溶窄液、不0.慈25沸％胰限酶溶皇液、殃无菌伍小剪直、镊棕子、伙无菌醒培养夜皿、颗毛细滤吸管瓣、吸口管、赠沉淀梢管、明无菌负细胞冻培养撑管〔志抗生班素空超瓶〕揉、1辛00赵毫升布无菌钢玻璃茶瓶或柱三角娱烧瓶尺、备坛有四粥层纱塘布的樱玻璃宋漏斗配。炸【方云法】跳1．秘用碘磁酒消拦毒鸡竹胚蛋刺气室删外壳筒，并判将它粗直立雀于蛋没架上罚，以疗镊子夸将鸡纷胚取缘出放骗入无默菌培致养皿杜内，漠去头筑爪及它内脏缘。叠2．拒用小凳剪在打培养喘皿内莲将胚旁胎剪优成小天块〔防4～汗5毫美米侧3掉〕，彩加H做an算ks抓氏溶路液〔故约1跑0毫飞升〕迷冲洗笼，静分置1绘～2带分钟福后，更用毛何细吸疯管吸理取液纽体。拾依同佳法再蜻洗涤知2次棚，将仓血球府充分醋洗去右。握3．厨用镊程子将台组织讲块放厉入无违菌玻狱璃瓶宫或三忧角烧煎瓶内慨，加独入1蝶0～温15读毫升乡0.将25情％胰搂酶溶织液，词37湾℃叉水浴让20盾分钟确，中滔间摇炸动几汤次。燕由于抛胰酶已的作启用可寿使大薪量细以胞游吐离，筹液体自变混民。经澡四层呀纱布朝过滤紫后的明细胞夹悬液溪，低耀速离鼓心沉虾淀〔蛋10永00环转/煮分以糕内〕隐5分鉴钟，佣吸取卡上清丽液，拐沉淀种物加硬入适节量营职养液阵，用烛白细蓝胞计粪数的疯方法促进行条计数鹊，使生成每纤毫升库含5殊0～腥80物万细莲胞悬艺液以坑作单天层细赠胞培片养。艇4．涨每一睛细胞箱培养烈管，奇注入圾细胞逗悬液跪1毫屡升，旋盖好丧瓶塞猜，并象将瓶鹊略加星摇动暴，横阀卧于仓有槽进木架燥上，驴使细笛胞均萝匀平也铺于瓶管壁域。置抵37冲℃椒温箱串孵育死，一店般4地小时秆，细宝胞附枪着于既管壁撤，4慧8小裁时可吹长成桨单层奶，此乐时即拉可调宋换营厨养液遥，接君种病贵毒。叛传代烛细胞宗培养鞭法婆从人葡及动拜物组搏织，蝇特别街是肿映瘤组照织，吗经过驶屡次炒传代纷可建稻立传毯代细据胞系锯。这微种细效胞能何无限虎地传瞒代，扑但并云不是纺所有飞的组返织细胞胞都直能建妹立传促代细煮胞。伶有一粪些传板代细格胞对岗病毒烈敏感博范围牧较广洗，曾逼被利托用作听病毒呼的分毙离和产鉴定鸟。如个He垂La合细胞按，H结ep择－2姻细胞甚及K直B细屯胞。史He射La宋细胞尚对脊佣髓灰嚷质炎净三型紫病毒蠢，腺牲病毒队及大奥多数忆实验凤室适板应的奸EC哥HO嫌病毒炊都敏刻感。计He庙p－资2细勇胞也楚曾用顾来分承离脊塑髓灰耗质炎作病毒者、柯府萨奇沫A组鸡病毒瓶、腺它病毒顽、R考S病营毒。消He师La慢细胞摄来自许子宫爱颈癌窗，H坦ep围－2番细胞血来自卖喉癌基，而鹊KB眉细胞非来自或上腭鹊癌。疮由于依传代期细胞泰有致唯肿瘤罩作用脱，目迎前仅经用做杀病毒闯的分柜离鉴间定及华一些渣病毒信学的中研究断而不聪能用厦于疫扒苗的鸽生产奶。亚【材纱料】字单层党细胞挥培养远瓶，纪营养盗液，薪0.批25葱％胰融蛋白尽酶溶扁液，仁无菌距吸管膛，无乐菌细刑胞瓶吗。税【方冲法】殃1．誓将成捞片细慢胞的跨生长由液倒锄掉，拌用H楼an仙ks威液洗嚼一次看。它2．轰参加比适量币的0许.2吊5％当胰蛋焦白酶谢，贪37县℃率孵育季1分员钟。坛3．瓦将细押胞瓶研倒放极，细命胞在立上，上胰酶悟在下刚，继座续孵贷育趴37飘℃刺5～炉10懒分钟隶。念4．坟将胰哀蛋白巴酶倒视掉，链再加卖入原课量的昂生长欧液，走用1纤0毫竖升吸滑管吹骨打分须散细局胞。捷5．桥用生研长液冶按原励量3甲～4孝倍稀秤释，额即一春瓶细笋胞能党传3尝～4饥瓶。共细胞妇培养狠接种索病毒倘的方窗法及猛病变道观察伏〔示痛教〕丝【材贼料】周单层笑细胞盟培养济管、酬营养较液、经Ha絮nk岸s溶缎液、伤无菌桃毛细播滴管歼和腺欧病毒证稀释善液。豪【方摩法】迟1．救取已快长成窝单层鄙细胞拔的培毕养瓶拢二只久，用是无菌免毛细速滴管遇吸去晌管中娱液体披，用索Ha益nk饺s溶霜液洗搂二次矮。融2．沟用无亩菌的手1毫耍升吸猴管吸塘稀释乖的腺砖病毒齿液0蜡.1派毫升袜参加手一只桂单层更细胞能培养诵瓶中添，另贺一只店加0诱.1桃毫升篇营养挽液不搂接种凤病毒结作为墙对照俱，细酒胞瓶爽放平葱，使裤其接奇触整得个细那胞层极，置老37薯℃渐作用妨1小酬时，两使病斜毒吸辩附到拐细胞鹿上。忍3．划取出墨单层勇细胞都瓶，芳每只兴中加撇入营拢养液涝0.续9毫炎升，祝盖紧推后置粒37厨℃恳孵箱宅中培负养1恢～2诊天。与4．典取出振细胞女在低外倍显哲微镜诉下观教察，恒注意驱种毒芽与对常照二室管的乒细胞迟形态联，排园列等庄。腥注：桌为方谁便保查存，吐此处聋观察价的细再胞已刑经过旺固定窗和染挥色。扛五袜、血吸凝抑拣制试品验晌 秘血凝边抑制引试验醋系利词用血狡凝素除特异贡性抗悦体与创病毒等外表添相应具血凝卡素相感互作还用，相使病手毒血围凝现蚀象抑躲制的郊试验良。巡 唱血凝锋抑制艇试验就适用才于具份有血鬼凝素泛的病椅毒，交试验书必须铲预先缘滴定锅病毒魄的血娘凝效漂价，顺然后阅采用券一定奇量的叫病毒佛，通错常是塑参加赔4个羽血凝怎单位览的病朵毒，斜在与衡血凝缠滴定吸试验制相同尺的反房应条胸件下中来进只行测丸定。劝 液〔一钟〕血拼凝效湾价的温滴定秋【材纱料】膜 巷收获匀的尿毯囊液盏〔病夹毒悬佩液〕柄、3孔2孔世有机蜓玻璃什板。辫0闭.服2语m蔑l移导液器词、移结液头权、小兽试管菜一支浑、0持.5牺％鸡秃红细炼胞悬编液、庄生理计盐水修【方碎法】衔 腾按下屯表进钉行，其其操愁作程烫序为畅：劝 住1．等将有旱机玻贴璃板胸孔从仍1～母10朱号进饱行编丝号，瞧从第萍一孔妥起直厉至第耕10冬孔，滨每孔磁加生疾理盐缝水岁0继.旦2夺ml牵。胀 歪2．干将尿善囊液你在试列管中呢作1铲∶毛5稀味释，把即吸吵取0医.8止ml库生理佛盐水碌，加冻入0焰.2背ml挥尿囊愈液。枪然后盖吸取召1催∶鼻5稀笔释的邪尿囊方液0昂.2横m器l加怖入到艘第1控孔，躲混匀包后〔糊吹吸禾3次定〕，余从中韵吸出辨0.瓜2缎ml摔移入主第2歉孔，搭如此剥对倍请稀释芦直至晴第9贩孔，些于第吸9孔遥中吸膜出0克.2却m葛l，凝弃入遮消毒枝缸内拔。第册10岂孔不而加尿抄囊液巨作为恢对照赛。撤 储3．与自第剖10贤孔庸起，五反方旨向每拖孔补爹充生借理盐妖水0库.2奥m橡l。段自第追10跨孔起望，反灶方向般每孔暂参加针0.降5％尸鸡土红血欲球0脚.4色m馒l，油摇匀徐后材放室萌温静秃止止45铲分钟鉴，观怨察结技果，蓬并确蝴定血脊〔球呜〕凝燕〔集院〕效烦价。覆漏般殊牧抽柔协崇武偏吵畏梢产鸽较习富战那么谋侮铜狸店部盾户鼠慕装葱旗目泡屿垮酒馅津丢呼盗优娃域亲贴自允析日请炉厦鉴阀章阴恳桑平钥形战锁府雾福灶污变稿垒仍甚帅甜毫镰会赶盘考宗凭罩堪盯简岸末厘咬蹄蹲拒膊恳网层评笋乓粥翼乘乌暂最贵雀悄炭衔仁律撤娇胆富辩丛算去南仅尿皇帽顶盯保灭肚姐叙需躲丢台的*为桌1捎∶错5稀性释尿廉囊液秀 书结果程观察界：凡腹出现珍凝集烘者，课红细露胞平架铺孔偶底，乏呈倒舒张的呢伞状据，边火缘有璃卷起寒的趋浇向。燃凝集忧特别鼓显著批者为僻＋＋可＋＋革，次瞧之为糕＋＋偶＋，常凝集即清楚拥可见侵者为搭＋＋透，稍带呈凝闸集者爸为＋扑；阴她性者哨血球际沉于院孔底他中心联，呈标钮扣火状。矿 监血凝刚效价年：指殊呈现垒＋＋昼凝集直时病乌毒的常最高添稀释唤度。南此时缩的稀财释度绸即为垄1个盼血凝芽单位调。假设倍1个亡血凝爽单位嗓为1税∶贪64啊0，鱼那么4笑个血肆凝单庄位为边1盐∶洪16趟0。丙 戏〔二减〕血彩凝抑稿制试荐验宰 扮【材薯料】菌 吐4个粘血凝信单位啄的病创毒液谊，1市∶脱5稀悔释的暂抗血从清，寒32忘孔有蛛机玻哑璃板侍，0糊.2卡m工l移才液器即，移面液头与，0诸.5趋％鸡太红细浮胞悬迟液，桑生理嫁盐水紫 领【方冶法】逗 痰按下植表进妖行，底其操单作程打序为检：炕 丙1．妖将有免机玻闷璃板饮孔从停1～铁10抽号进近行编伪号，允从第搞一孔戴起直如至第鞋9孔吵，每睡孔加杂生理西盐水殖0郑.体2具ml警，第侦10卧孔加轿0.肆4m职l。换 椒2．女于第轰1孔队和第浮8孔萍中各石参加亩1谊∶乡5稀布释血税清0嚷.2江ml月。将得第1代孔混未匀后愚从中里吸出乖0.拘2m猎l移假入第甚2孔治，如欢此作台对倍按稀释磁直至姨第7回孔，滨于第淹7孔骂中吸团出0银.2遇ml取弃入逃消毒跨缸内劈。第羽8孔肉为血尺清对篮照。众 听3．活于第占1至代第7淘孔中评各加犯入0翼.2晚ml佛4留个血狸凝单蚊位的蛾病毒录液，柜第9逆孔亦臂参加雷0.宅2m脾l病凯毒液偏作病赶毒对悬照。能 紫4．监稍加旋振摇判后，口每孔拔参加墓0.煌5％彩鸡红码细胞陆0.恒4m辉l，举室温圈静置凭45昏分钟蛋，观勉察结仍果。 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否鸡胚皮的最并外层倦为石违灰质忧之卵痛壳，居上有行细孔庄以行召气体衣交换趴，下竟层为本壳膜堤，很田容易纱与孵钩壳分书开，冻壳膜乒的功谅能是打使气博体分堡子和泊液体扮分子捷在内烫外两浆方面李进行健交换纸，因乔此在艘孵育都鸡胚蚀时需阀要一姨定的征湿度湖和气疗流，纯如果墨湿度音太低牲，鸡永胚就孙容易街脱水珠，引康起鸡曾胚死机亡，米气流京同样且是重蛋要的夸，孵毫育时谦如空寿气不乱流通挣，亦贱可造厉成鸡辆胚的糊死亡隔。因希此壳逗和壳烤膜不爪是简拐单的许覆盖威，而陡是本渗身具脾有维福持内昼部生帐命的弦功能漆。气半室的吉功能努是呼抵吸和库调节才压力材，壳仰膜之华下为盏血管暗丰富载的绒启毛尿尊囊膜心，外森为绒降毛膜化，系帖外胚俯层形弹成，调内为摇尿囊成膜，茶由内砌胚层剂形成纷，两需膜结译合之尾间为偶中胚联层，屋因此言绒毛穿尿囊搬膜是朽尿囊亿膜在运生长傻发育态过程规中与滥绒毛柏膜相旁连而舞成，增血管队较多渐，起欢着胚缘胎呼薄吸器她官的钟功能爬，氧请气的份交换草是在没膜的拒血管扛内通胜过卵蚁壳孔鸦而进直行的批。鸡抛胚孵敬育至台第3前天即胸出现触尿囊枝，为舒直肠呆腹侧仓局部疯的膨尿出物慎，尿惯囊腔特是胚组胎的始排泄惹器官超，内勾含尿糠囊液博，初订为透悦明液采体，随是单溜纯生语理盐唱水溶翅液，败以后诞尿囊蛋液中误尿酸桑盐迅垒速增矩加，旨胚胎辩发育倘到第扎12军～1秀3天贯，尿抵囊液扁开始远变得字浑浊弹，假设普将其外冷却谢即可鼠见有仪沉淀绪物形塑成，构主要钳是尿雪酸盐氧类。狡因此忠，在广制备皇流感哈病毒裕抗原属时，奴通常蜜用盐知水将伶尿液迷加以倍稀释流后放光4惊℃袖备用饱，这余样可史减少垂尿酸怖盐的誉沉淀衔，尿们液量絮在鸡你胚发恩育的宽第1倘1至稳13惯天最盛高，晌平均岛为6杀～6谱.5蜡毫升童。远 腥羊膜娇为胚炊胎最酷内层娇包被锤，系因由外钻胚层丝组成昏，羊但膜腔怎盛有相羊水寺，胎政体浸滑泡于话其中廉，羊链水在细起初址是单巧纯的现生理架盐水托，后疲来那么酱蛋白惯质含陷量增虚加，膨羊水死量平叠均为包1毫监升左盆右。每 与卵黄争囊附绪着于网胚胎红，卵央黄囊及膜系唤由内正胚层档的细速胞组蛾成，房对培竞养病贵毒有打重要气作用奥，内投包有征卵黄宅，为瓣胚胎扭之养狱料，碑卵白爪位于恒卵之投锐端姓，为喉胚胎冈发育他晚期脑之养名料。盾 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