输血科操作规程

目 录1、输血前检测实验程序2、改良低离子聚凝胺法实验操作规程3、冰箱维护程序4、ABO 血型鉴定5、Rh（D）血型鉴定6、抗体筛选和鉴定试验7、临床自体输血标准操作规程8、冰冻血浆溶化操作规程输血前检测实验程序1、实验要求血清和血浆都可以用于交叉实验和抗体检测，最好是血清标本，标本使用限制在3 天内，含有肝素等抗凝标本可以用凝血酶或硫酸鱼精蛋白处理使其凝集析出血清。允许通过静脉输液口采集标本，但必须丢弃受残留静输液影响的5ml 标本。一般不允许使用溶血标本，对急性溶血性贫血和烧伤病人的溶血标本，在实验前后必须做溶血程度的比较。标本和输血申请单上的所有资料必须填写清楚并完全符合，否则应重抽标本。对所有用过的血员和受血者标本必须在 1-6℃冰箱至少保存7 天，所有实验都必须保证观察和记录同时进行，且记录和资料都必须至少保存 5 年。2、血型检测要求完成病人ABO 正反定型、R（D，献血员血型ABO 正定型（要时做Rh 血型，D 阴性病人必须做Du 实验确定。3、交叉试验受血者交叉配血时所用的标本必须是输血前 3 天之内的。配血时要逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO 血型（正、反定型），并常规检查患者Rh（D）血型（急诊抢患者紧急输血时Rh（D）检查除外正确无误时可进行交叉配血。凡是输注全血、浓缩红细胞、红细胞悬液、洗涤红细胞、冰冻红细胞、采浓缩血小板、冷沉淀、新鲜血浆应与ABO血型同型输注。凡遇有下列情况时必须按《全国临床检验操作规程》要求完成凝聚胺交叉试验和检测不完全抗体的交叉试验（酶法、聚凝胺法、抗人球蛋白法） 除紧急输血和自身输血外，所有输入红细胞的其他制品均要求做血交叉试验。其他试验另外必须开展的试验有抗人球蛋白试验，抗体筛选、抗体鉴定、新生儿溶血病的全套实验。改良低离子聚凝胺法实验操作规程1、目的：减少交叉配血试验的假阳性。2、适用范围：交叉配血、血型鉴定、抗体筛检血型血清学试验。3、试剂来源：(台资)珠海贝索生物技术有限公司4、采集与处理：静脉采血3-4ml做记录。检查留样试管、标签、标号、姓名、血型是否齐全，如有遗漏应拒收。将血标本试管放37℃水浴中10分钟，离心。5、标准操作：主（次）管加入受（供）血者血清2滴，加供（受）血者4%水悬液1滴。各管加LIM0.8ml混匀静置1分钟各管加PolybreneReagent1 滴混匀，3000转/分离心15秒，倒出上清液（残留约0.1ml，轻摇，肉眼可见明显的凝集状（如无凝集须重做），加假凝集清除液1滴于管底，轻摇，凝集1分钟内消失呈均匀混悬液，为阴性，凝集 1分钟内不能被消除，即为阳性。5、结论：阳性表示受（供血者血清中含供（受者红细胞血型Ag相应的IgM，供受血者不相容，阴性表示供受血者相容。6、注意事项：间、离心速度等均可影响试验结果。灵敏度。试验操作方法如下：检测管中加试验血清24%红细胞盐水悬液1滴。加LIM0.8ml，混匀，静置1分钟，各管加Polybrene2 滴混匀，3000转/分离心15秒，倒出上清液（残留约 01ml），轻摇，肉眼可见明显的凝集状（如无凝集须重做），加假凝集清除液1滴于管底，轻摇，凝集分钟内消失呈均匀混悬液，为阴性，凝集 1分钟内不能被消除，即为阳性。检测标本应为非抗凝血，如标本中含抗凝成分的含量过高明显干扰凝反应，可适当调加Promoter 的滴量，以中和抗凝成分的干扰。试验温度以20-30℃为宜，若为寒冷凝集，375观察，凝集消失，说明冷凝集素存在。肉眼直观判断的结果应确保与显微镜下观察结果一致，直观不能明确判断的可疑结果须镜检，镜下：阴性结果应该是单个RBC均匀分布，有RBC凝集状散在的即为弱阳性。试验质量检验：取自身血清与自身红细胞用本试剂盒试验方法作自身阴性对照试验，取IgG抗D血清与RhD（+）RBC阳性对照实验，对照实验符合，试剂有效。疑难结果以抗人球蛋白实验（AGT）作最终判断试验，试验操作参照经AG（AGTLIM0.8ml37℃孵育时间可缩短至分钟。本试剂盒适宜大多数血型抗体的检测，但对 kell 血型系统抗体（主要存在白种群）检测效果较差，由于我国黄种人群中 kell 血型系统抗体阳性者罕见，因此适合在国内推广。可补充抗人球蛋白试验，以提高对 kell 血型系统抗体的检出率。冰箱维护程序1、目的：对冰箱进行适当的维护，以确保冰箱的正常使用。2、适用范围：本实验室使用的各种品牌、型号的冰箱。3、负责人：科室值班人员4、操作方法4.1储血冰箱高低温度报警装置完好；4.2 储血冰箱温度记录每天 3次(8:00/AM,14:00/PM,20:00/PM), 冰箱温度持在2-6℃，温度计应在冰箱的上、中、下层轮流放置一天，从而测量出冰箱内温度的变化情况。如果温度不在 2-6℃之间，冰箱发出报警声，应记录可能的原因和采取的措施（将血液转移到 2-6℃中的冰箱中所有备血存放在2-6℃储血专用冰箱中；不同血型、品种、规格的血液分别储存；不同日期的血液依次储存并登记；储血冰箱内不得存放其他物品；袋密闭状态，应查明原因，立即处理；尽量减少冰箱箱门的开启次数；储血冰箱每周用2%戊二醛擦拭冰箱内表面；200CFU/m3合格。应急措施：①如遇停电，立即通知医院电工房发电；②冰箱如温度不在2-6℃之间，立即通知输血科主任采取冰箱维修，将库存血尽快使用，在未使用完毕前另存于其它冰箱（做好冰箱的消毒及温度监测） 。ABO血型鉴定1、测定原理根据红细胞上有或无A抗原或／和BABAB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗—AB分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或／和BA细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—AB。2、标本种类及收集要求受检者血清；枸缘酸钠抗凝血或未稍取血，受检者血液制成 5％红细胞盐水悬液用，制备方法见本节附注。标本出现中度溶血者，为不合格标本，不能用于检测。3、仪器、试剂、校准品、质控品、培养基、以及其他所需物品 抗A、抗血型定型试剂（单克隆抗体）：上海血液生物医药有限责任公司，产品注册号：国药准字S10980059，包装:抗A、抗B各1支/盒，塑料瓶，规格：10ml/支，储存要求：2℃～8℃避光保存，主要成分：分泌抗人 A型和抗人B型血型原单抗的杂交瘤细胞培养上清液并补加一定量小鼠腹水抗体。0.9/%的生理盐水：石家庄四药有限公司。离心机，显微镜。4、操作步骤、试管法取洁净小试管(内径10mm×60mm)3 支，分别标明抗—A、抗—B抗—A十用滴管分别加抗—A抗—B和抗—A十B分型血清各l（约50ul）于试管底部，再以滴管分别加入受检者 5％红细胞盐水悬液1滴，混和。(内径10mm×60mm)3支，分别标明AB和O胞。用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入ABO5％试剂红细胞悬液l滴，混和。立即以1000r／min离心3min。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于 AB型、类B或cisAB 的发现。凝集强度判断标准4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+ 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2+ 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝集而极大多数红细胞仍呈分散分布。- 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。玻片法取清洁玻片1张(或白瓷板1块-A-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。(或白瓷板1块AB细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加ABO型试剂红细胞悬液1滴。将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约 min，先以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应；再在低倍镜下观察结果。5、结果判定ABO血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞 受检者血型 受检者血清+试剂红细胞抗-A+抗-B-抗-A十B+AA细胞-B细胞O+细胞--++B+-----O++-+++AB---+-6、注意事项：分型血清必须为批批检试剂，且在有效期内使用；质量性能符合要求。细菌污染。试剂开封后有效期为一周。试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤 1次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。或使用合格的商品诊断红细胞。试剂红细胞有效期：自制的为15天，商品的为试剂有效期。试剂开封试剂开封后有效期为一周。生理盐水启用后，有效期为二周。换新的试剂进行检测工作。试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。核实是否漏加血清。按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以 4℃为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温(20—24℃)37反应减弱。结果。别。判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。检验不完全抗原的存在。对于可疑结果，必须更换所用的试剂，重新检测。5%红细胞悬液的配制：用生理盐水洗涤红细胞 3次根据下表进行红细胞悬液的配制悬液浓度（%）压积红细胞（滴） 盐水（滴）2 1 2ml(40)5 1 0.8ml(16)7、操作性能概要正反定型结果不一致的原因：原因：有技术性问题或红细胞和血清本身的问题，常见者有以下几种：A血清效价不高，可将A型误定为OAB型误定为B型。判为阴性反应。受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型)或抗原性减弱(见于白血病恶性肿瘤：以及类B或cisAB 等。受检者血清中蛋白紊乱()红细胞呈缗钱状排列。受检者血清中缺乏应有的抗-AB症。血型物质中和了相应的抗体.原因。血清中有意外抗体，如自身抗—I，常引起干扰。老年人血清中抗体水平大幅度下降正反定型结果不一致的解决办法如发现ABO正反定型结果不一致，先要重复作试验1次。严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题，对一些疑难问题必须进一步研究。检查步骤：另从受检者采取l份新鲜血液标本这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。5A、抗—BAlABH做试验可以得到其它有用的信息。被抗体致敏。用A1A2BOI，用O型(或ABO相合的)脐血红细胞检查。如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和 4℃置30min，用显微镜检查核实。如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗—A或抗B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作 A、B、H血型物质测定。后者只对80％HAB分泌型的人有用。如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水 l滴，混和，往往使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水 l滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。如受检者为A型血而疑为有类BABAB的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗— B不凝集自红细胞上的类B抗原。检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出 A物而无B物质。核对患者的诊断，类B杆菌感染有关。如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶TTK受体；或产生机制不太明了的Tn胞具有以下特点：能被人和许多家兔的血清凝集。能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。不被脐带血清凝集。通常不与自身的血清凝集。8、临床意义用于检验人的ABO 血型归属。9、参考文献全国临床检验操作规程（第 3版）Rh（D）血型鉴定1、实验原理红细胞与抗D抗体发生凝集反应表明该细胞有 D抗原，反之，无集现象表明试验的红细胞缺少正常强度的 D抗原。2、标本收集和制备无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。如果不能立即实验,应将样品贮存于2-8℃。收集在ACD、CPD、CPD－2A本,不超过21天仍可进行实验，但是加EDTA、肝素和凝集的血液标本，实验应在2天内进行。3、仪器、试剂、校准品、质控品、培养基、以及其他所需物品：RhD(IgM)血型定型试剂（单克隆抗体）：上海血液生物医药有限责任公司，产品注册号：国药准字S20060018,包装、规格：每盒内装有1支试剂，10ml/支，储存要求：存放2—8℃，有效期内使用。4、操作步骤玻片法：干净玻片上加1滴抗D。14%-5%也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。在圆形的玻片区域中混匀，前后缓慢摇晃玻片。 2分钟左右肉眼判结果。不要将试剂的干燥与凝集相混淆。如果是阴性，需要试管法重做一遍实验。盐水试管法加一滴抗D试剂于预先标记好的试管中再加1滴约3%—5%红细胞生理盐水悬液于试管中。混匀。离心，速度和时间可选择以下二种之一：转速1000rpm，时间1分钟或3400rpm，时间15秒。检查是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染） ，然后轻摇晃，使细胞再悬浮起来。观察凝集状况，并立即记录结果。必要时可借助显微镜。若是阴性结果，需在37℃孵育15分钟-30果。结果若呈阴性需进一步确认是否是弱 D。微量板法（U型板）加一滴抗D试剂于U型底的微孔中。再在微孔中加一滴约 3-5%的被检红细胞悬液，细胞悬液需事先制于生理盐水中。用机械的方法将U型板混匀。用板式离心机离心：2000rpm,时间30秒。不同的离心机，不同的微板产生清晰的细胞扣及透亮的上清液。检测溶血情况（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染）。结果判断：用机械震荡U凝集。阳性反应，出现红细胞凝集，而阴性反应在微孔中会出现均匀细胞悬液。可用肉眼和自动化判读结果。如果呈阴性，需要试管法重做一遍实验。5、参考值范围阳性反应：出现红细胞凝集，为 RhD阳性。阴性反应：红细胞不出现凝集，为 RhD 阴性6、产品性能指标抗D（IgM）效价大于等于1：64（ccDeeO 型）7、方法的局限性本实验不能凝集CategoryDVI细胞，对于阴性和弱阳性结果，按有关安全输血规范进行确认实验，必要时送血型参比实验室进行确认。8、注意事项试剂含有0.1%W/V 叠氮钠，如果摄入会中毒。试剂如出现混浊则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知RhD阴性、RhD 阳性红细胞检查结果是否符合，以防制品污染、变质失效，造成错误。及时贴上开封时间标签，在效期内使用。由于人红细胞的D免错判结果，特别是阴性结果时。Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因 Rh抗原、抗体及反应凝块较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。9、操作性能概要假阳性反应原因分析：试剂中存在具有其他特异性的抗体（指不完全抗 D 抗体因此，疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份实验。因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检验人员意识到有进一步实验的必要。多凝集红细胞与任何人血清会发生凝集。引起假阳性结果。9.14 试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染。假阴性反应原因分析：搞错抗血清 每次试验时应细心核对抗血清瓶子上的标签。试管中漏加抗血清 在加入细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗清。某种特定的抗血清不能和其他相应抗原的变异型起反应。如某种抗血清含有主要对抗 Rh 复合抗原的抗体，则可能与独立的基因产物的个别抗原不发生反应。这在抗C 血清最为常见，因为很多抗C 清含有反应性更强的抗Ce 成分。温度和时间不正确。抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。10、参考文献：全国临床检验操作规程（第 3 版）抗体筛选和鉴定试验1、原理红细胞血型抗体分子的物理特性与血清学的反应性之间有着直接的关系。可分为IgM和IgG球蛋白抗体IgM为天然抗体，在盐水介质中能直接凝集相应的红细胞，使之发生肉眼可见的凝集反应。IgG为免疫抗体，常经妊娠或输血等免疫产生。在盐水介质中不能凝集而只能致敏抗原的红细胞，且必须通过特定的方法使致敏红细胞发生凝集。如牛血清白蛋白、酶、抗球蛋白、凝聚胺、凝胶（或玻璃）等方法。2、方法待检血清需要使用多种方法进行鉴定。一般使用盐水法、酶方法、抗蛋白法、凝聚胺法或凝胶卡法检测抗体。在检测到弱抗体时，可以利用适当增加血清的细胞比例、适当增加孵育时间、加入低离子强度溶液增效剂或PEG 聚氧乙烯乙二醇等方法增加反应的敏感性。不同的抗体在不同的方法和条件下可以有不同的表现。这些特性为判定抗体特异性提供了参考信息。3、试剂、红细胞：选取三个以上的O型红细胞组成一组筛选细胞（已知抗原。、谱细胞：选取八个以上的 O型红细胞组成一组谱细胞（已知抗原）。4、操作、不规则抗体的筛选：用筛选细胞（1、2、3号），同患者血清在三种介质中（盐水、凝聚胺、抗球蛋白）反应，需做自身细胞对照。、不规则抗体的鉴定：对筛选阳性的患者应检查其抗体的特异性。用一组谱细胞（1-11）同患者血清在三种介质中（盐水、凝聚胺、抗球蛋白） 进行抗体的筛选，需做自身细胞对照。5、结果判断阳性反应：出现红细胞凝集。表示红细胞上有相应抗体存在。阴性反应：出现红细胞不凝集。表示红细胞上没有相应抗体存在。结合谱细胞反应格局，确定抗体特异性。6、临床意义、定血型；、测效价、可能几率：正确的抗体鉴定，必须有充分的谱细胞支持。7、标本要求、按照一般的血液样本采集步骤采集血液标本。该标本可于 4℃或0℃以下冷冻保存三周或数年。一般不需特殊处理。、应用EDTA抗凝标本，可反应体内红细胞被补体致敏的真实情况。、需要一管新鲜收集的凝固的血液标本用作血清研究。若怀疑冷抗体引起的直接抗球蛋白试验阳性，其血液标本凝固应保持在 37℃，直到血清分离出来为止。8、注意事项、仅用于体外诊断、试剂贮藏温度2-8℃；、试剂有效期两个月。临床自体输血标准操作规程1、原理或目的：自体输血是手术前或手术中收集自己的血液，需要时输回到自己的身体。这样既可以保留输血的优点，又可以避免感染和溶血反应的危险，癌症患者可减少肿瘤复发、转移的机率。2、自身血液采集有几种形式、择期手术病人自身储血：临床经管医生根据择期手术患者的身体基本情况(Hb＞120g/LHct＞34%，心功能Ⅱ级以上)，预计手术中出血和需输血量，与输血科一起制定患者术前采血计划，动员患者采集血液储存，以备手术中、后输用。、急性稀释性自身输血：是在手术患者麻醉后采出一定量的血液，同时输注晶体及胶体溶液，使患者血液稀释， 而维持正常的血容量，患者在血液稀释的生理状态下进行手术，术中所流失的是稀释血液， 手术中、后回输自己的血液。、回收式自身输血：回收式自身输血是以机械吸引装置将患者手术中流失的血液(如肝脾破裂、宫外孕大出血、各种大手术的创面出血等 )收集滤，分离清洗、净化后再回输给患者。目前国内外有血液回收机生产销售，血液回收后在封闭的管道系统中分离清洗，安全可靠。3、操作步骤、采血程序对无误后方可采血。滑动的静脉进行穿刺。3.1.3、在肘窝上5cm处系好压脉带，使静脉充盈可触及。3.1.4、选择皮肤无损伤、炎症、皮疹及新针眼的区域为穿刺部位，以穿刺点为中心由内向外螺旋式旋转擦拭，用 2%的碘酒消毒皮肤待干，用 酒精脱碘，消毒面积不得小于 10X10cm，遵守无接触采血原则，执行采用无菌操作技术进行静脉穿刺。3.1.5、去掉护针帽，采血者右手拇指、示指、中指持采血针柄，针头斜面向上或稍侧斜，减少皮肤阻力，针与皮肤呈 30°-50°角刺入皮肤。当针刺入皮肤后改变角度呈10°左右，沿静脉走行方向平稳刺入静脉，进入静脉后，阻力明显减少时再推1cm左右，可见血液流出，此时保持针头位置稳定，视血流通畅，即可固定针头位置，用消毒棉球覆盖针眼，并用胶布固定。3.1.6、将血袋摇动后放于血袋摇摆器上，嘱患者不停的做松握拳动作。3.1.7、采集过程中，密切观察血流情况，血液采集过程中必须将血液与抗凝剂保存液充分均匀混合，遇有血流不畅时，应及时处理校正针头位置，以防中断采血，当不易观察血流时，则注意观察穿刺部位有无异常，以及血袋重量是否递增。3.1.8、在采集过程中，采血者在血型标签、体检表和献血证上加盖采血者工号章、血液采集量章，在每个血袋上按要求贴上带编号的血型标签，并分别将血型标签贴在标本管和保存血清标本管上。顺利采血 200ml 一般在3分钟内完成，400ml 在6 分钟内完成。3. 1.9、采血到达采集量时，采血者嘱患者松拳，用止血钳在针尾部 处夹住血流导管，松开止血带，用无菌棉球覆盖穿刺针眼，拔出针头，再嘱患者用三个手指压住棉球约 5 分钟以上，采血完毕。3. 1.10、以无菌方法留取标本液（注：防止空气进入血袋），并使抗凝剂与标本管内的血液充分混匀，保证标本应来源于相对应的血液。3.1.11、采血结束后，再次检查献血者身份、血袋、血液标本和相关记录，确保准确无误。3.1.12、对采不足量的血液，在采血袋、献血证和体检表上分别标明实采血量，并通知献血者。3. 1.13、如需第二次穿刺时应征求献血者同意,并更换采血袋和献血者手臂,方可采血。3.1.14、采血结束后，再次检查献血者身份、血袋、血液标本和相关记录。3.1.15、应采用惟一的条码标签标识献血记录、血袋（含主袋和转移袋） 标本管。应对贴标签过程控制，确保同一献血者的血袋、标本管、献血记录一一对应，贴签无误。3.1.16、建立血液标本留取程序，并严格执行。、血液热合操作规程血袋和季节的不同调节热合时间至合适位置。、检查血袋原始编码、血型、血量、管段是否符合标准。、按照血站质量标准进行热合（以质量控制科文件为准）。、血液采集后，热合封口，并按要求热合数段，供复检血型、交叉配血（靠近血袋一端热合漏血，将此血标识并隔离放置，回站后由包装科交质检科检测