组织制片技术概述

组织制片技术

组织制片技术的概述组织制片技术的方法组织制片技术的基本程序苏木精—伊红染色

组织制片技术的发展史

从16世纪60年代Hook发明显微镜，开始观察和描述软木塞中的细胞至今，组织制片技术随着生命科学的发展而不断进步。

组织制片技术的发展史

在19世纪中期，随着生物、物理和化学等学科的飞速发展，以及显微镜和切片机的逐步完善，组织学也建立起一整套完整科学的组织制片技术。组织雨制片段技术也的发献展史特别邻是20世纪50年代陡以来发，由飞于组套织化克学、毛免疫张组织爆化学建等新旧技术亡和新鸦仪器避的出墨现，从使组酷织制圾片技桂术的盒应用飞领域舌进入鞠了一鼓个崭尸新的浓时期讨。利用柳组织痛制片者技术鹿的方腔法所架制出浴的标胀本，担显示碑了组宝织细晓胞的法结构币和形龟态、哨组织夺细胞析之间梅的相言互连翁接及障组织馅细胞找中的悟某些稻化学呢成分怖的种布类和会含量顾。提供违最直惭观的母依据安。组传织制挨片是菊研究色医学萄和生礼物学刻的一拿个最基到本的手旺段。组织他制片源的意竟义和绸目的组织喷制片躺技术陶的方革法非组恼织切括片法组织貌切片魔法非组纹织切幻玉片法组织诞不经栏过切污片制隶成观士察标谋本的没方法史。非组羡织切断片法猪的种躬类涂片先、压孙片、欠铺片五、磨飞片、厨消化努分离迈标本辩、活兄体标浴本、富整装卡标本传、血反管注悼射标毕本。涂片栋将所买采的职血液农、骨爆髓或为者脱肚落细松胞涂新抹于欣载玻角片上巴经瑞改氏、碰姬姆经萨染储色、创常规HE染色爬。压片先将坦组织毕处理央成小斯块物躁质，夫然后阻用化蚀学药骂品进盖行软厕化和糕染色忠，再蓬用盖筐玻片渗压封医于载是玻片治上。指例如甜运动断终板驰和寄外生虫丸标本宅等。铺片汪：将袖需要系观察坝的薄戴片组唉织用响手工削的方都法直阶接铺欢于载台玻片骂上，纷然后桃经过誉固定飞、染络色等蚂程序楼制成山。例柜如蛙逼的肠怎系膜塔铺片概，大垂白鼠火的皮筛下组妨织铺班片等肠。磨片昼：对无于骨匙，牙却齿等蜘组织篮，不扫经脱魂钙和袖切片等，直吐接在周磨石师上用缴手工唤磨成枯大约50微米捏左右透的薄贸片，置然后适再进播行染艘色封板固在绝载玻洋片上班。消化懂分离买标本似：先扣将组跌织分达离成稿小块盖，然皱后利民用相舅应的绢化学桐物质绵将细国胞间渴质消跪化溶青解，昨再用厕机械低分离治的方状法，病如水曲的震酸荡冲梯击力购，使斑小块聋组织灶分离泽成单昏个而慎又完致整的表细胞宝，经旋染色锋后涂愿于载居玻片醋上进维行封熄固。断例如情平滑奴肌分文离标份本，遥脊髓供的运乖动神巷经细善胞等供。活体臣标本浙将洞所采依的观捡察标左本加犯生理取盐水储后直芳接滴脏于载辣玻片依上在绩显微央镜下炉观察册。整装岩标本①将胚笛胎或爸小动扇物经茶前期顿固定犬后整遣体封纪藏于付盛满上固定称剂的殃透明连容器替中。②将发乎育至麦某一时阶段慢的鸡影胚整沸体取尸出，消经固娃定、斜染色冠、脱狂水、蛾透明掀后封都固于院载玻贵片上串的标蹲本。血管递注射说标本①将有动色物拘质注驼射进贯血管畏，用光酸或黑硷将挥血管棉周围岂的组绘织腐庆蚀后叶做成仗的整持体封膏藏的柄血管础标本扰。②将有文色物昨质注嫂射进弟血管奇后，捐经一里系列店制片赌技术掉处理田后封棵固于忘载玻徐片上订供显罩微镜佩下观汁察的乒标本药。组织水切片群法利用鲁化学锯试剂蹈将组略织经石过一饶系列蓄的固针定、穴脱水村、透土明后底，再吴利用煮石蜡苗、火荷棉胶正或者钥明胶宪等支腔持物导渗透拼进组悉织内否部，颠使组悟织保律持一拐定的练硬度掀，并概包埋真成块远，然师后依坛靠切专片机公将包塘埋好喘的组欧织块拾切成尝以微剑米计派的薄照片，叶再根咬据需策要进否行各看种染肿色得辣到的刺供显谅微镜察下观舍察的伐标本悼的方鹿法。组织摆切片艺法的誉种类冰冻挡切片石蜡霉切片忘、火锄棉胶光切片桃、明嫩胶切罚片冰冻颂切片将所黑取材震的新刷鲜组项织，晚经快存速冷灰冻后碰再切箱片，薄以保阳持组富织内贺所含冲的脂演类或兔某些间酶类锈的活帮性。为观清察急领待结暗果的婆组织暮，如采临床陷手术小所取皮组织附，也素可用咏这种莫方法企。组织申切片降标本沉制作雨的基凡本程蓝序:1.取材→2.固定凯和固肥定后捏处理→3.脱水→4.透明→5.浸蜡扣与包埋→6.切片→7.染色→8.封固取驰材一、烟动物催的处更死手法缠迅速朗、快文捷。常用岛方法涌：1.麻醉若法：陷吸入醒麻醉浆（乙辽醚）普和注查射麻攻醉（厉乌拉怪坦或静者戊订巴比免妥）植。2.空气贩栓塞燃法：耳逃静脉医，20－30圣ml空气3.击头旧法：鸽重物哥猛击前，迅殊速致罩死。4.颈椎烟脱臼墙法：小白还鼠5.破坏园脑和望脊髓崖：金把属探嘱针，童蛙6.股动徒脉放晓血：馆麻醉励后放公血使侮大动需物迅释速死肺亡。二、筹取材苍的步佣骤选择谋动物选择水取材柴部位选择晋切面仁方向应根碎据实组验工仔作的默目的嗽和经帽济能雕力选叛择实驳验动段物肝脏—猪肝卵巢—猫胃—狗运动确终板—爬虫先类动感物肥大求细胞—大、济小白和鼠的舱皮下衬组织间皮摇和内膏皮—蛙的忧肠系养膜根据州器官斗组织梨的结泳构特旅点选夫择取仆材部援位胰腺—胰尾盾部脊髓锅的运夫动神冰经元—颈膨瓶大和然腰膨胀大处肺—肺门胃—胃底气部根据泳器官瓦组织延的结名构特天点选算择取敞材时稻切面绩的方晕向肾脏—肾门灯处作逃纵切头皮—顺毛房诚根的优方向群纵切大小顷肠的程环行扎皱襞—纵切气管瓣和食砖管—横切三、呜取材脑时应嘱注意下的问颠题：组织快新鲜娇：取混材动仓作快忙捷，莲迅速搬投入欣固定拿液注意装环境缠温度汇的影斗响：叠冰上孤取材辛或者高冷固掌定材料走应小垄而薄锈：俭不馆超过1.球5×落1.美5大×宋0.涉5c熟m3固定港液会泡造成陡组织天收缩困，注僵意保勿持组钞织原恭有形圈态取材储手术贺器械束锋利氧规范苦操作摧，防束止组亮织损猜害注意戴取材率环境拘和器射械干俱净，丢防止幸组织隆污染固定叫和固狮定后舱处理一、茧固定塞的目崖的甜：固定袭剂使异细胞勿的成夏分凝胜固，箭防止逃组织瓣细胞井自溶寨和腐护败，芝保持额细胞良生活圈时的谦状态倒。固定熟剂的锋酶染包作用骗使细屡胞各块成分档易于厦被染暑料着斯色。使组照织适顿度硬喝化，把利于伞制作黄薄片龟。二、锈固定薄的方古法：1.直接联固定销：最拿常用稻。2.蒸汽垃固定镰：1－2％锇党酸或中者甲廉醛挥犯发的期蒸汽狱，多企用于码涂片早固定环。3.灌注花固定笛：（违必须庄进行酷后固肿定）局部摩灌注忘固定不：肺饮、肾睬脏、粒眼球律、肝及脏全身威灌注遵固定亭：神节经系暑统三、烈固定浴的注唯意事毙项：固定负剂的抢用量一般尘为组刑织块惭体积侄的15倍左播右固定净剂的怒配制现配迷现用固定芹的时日间受较诱多因亲素的疯影响届。一俩般过雁夜或尽者24小时睁可达销到固孕定要怎求。四、酒常用犹固定胃剂单纯茂固定仙剂甲醛、乙醇、冰乙花酸、振升汞扶、苦季味酸猾、何重铬糖酸钾傲、丙墨酮、投铬酸捐、四答氧化久锇固定妹组织愚时，圆只单粉用某码一种屋试剂怪尚难雾对各温种组怎织成闻分有季较理樱想的屡固定蜡作用窝。因棚此，块常加甜入其伞它试器剂，脖根据细对组艘织的喷作用旋与反阔应，关配成楼混合践固定竖剂，斥以求冻得补门偿某班试剂默对组仗织所赏致的丈缺陷撕。混合碍固定洞剂中性祥甲醛布液、乙醇—甲醛阿液、Bo挑ui犯n氏液、苦味援酸—硫酸槽液等、Ca注rn孕oy氏液粱、He闪ll禾y氏液甲醛(F展or狗me秒ld鸭ed纹hy否de掠)固定效浓度悠：4%甲醛厕溶液固定摔时间劫：12小时—2趣4小时固定盐后处慰理：舍流水昏冲洗12小时—2葱4小时配制阔方法白：付甲醛10台ml染+生理根盐水/蒸溜碰水90显ml特性遭：说甲醛祖放置状时间设过长留易产瓣生白甚色沉已淀“锻三聚箱甲醛府”，拒氧化绢后变株为甲请酸，串使溶械液变侄为酸险性，似严重亮时可旦影响机到细猴胞核颗着色帆（＜）。乙醇(E值th姜yl削a散lc则oh飘ol并)固定枣浓度遵：80临%-获-9蛛0%乙醇蓬液固定只时间锦：聋一般4小时—1轻2小时固定冤后处煤理：带直富接入鹅脱水婆剂配制呆方法佳：文无水绢乙醇+蒸馏袋水特性右：厅乙罩醇具京有固怎定、妹脱水炸等多盲种功向能。批组织蜜在高权浓度仗乙醇恐中放铜置时萄间过联长时纳，易色发脆罢。50掠%以上骑浓度壁的乙级醇可步溶解虫组织盼内脂盒肪、谱类脂登体、溉色素突等，惜注意改制片拌的目脑的（＜）。中性学甲醛作液配制匠方法灯：40乎%甲醛12捆0m拜l蒸馏型水88牧0m板l磷酸庄二氢兽钠4g磷酸朴氢二仰钠13求g固定薄时间明：24小时固定马后处曲理：颜流露水冲湾洗24小时适用逼组织邪：它常用息固定亮剂，邮适用斗广泛（＜）乙醇—甲醛侄液（A—料F液）配制研方法谜：95胃%乙醇90温ml40奋%甲醛10春ml固定忧时间盯：组介织块慈固定4—莲12小时舰，铺片沉固定5—垦10分钟乓。固定英后处闷理：捆直接踪蝶入脱花水剂造。适用芬组织值：肥伞大细告胞，柱糖原鬼的固弄定（＜）。Bo沟ui绩n氏液配制安方法糟：饱吩和苦请味酸芹溶液75城ml40变%甲醛25染ml冰乙锁酸5m螺l固定需时间进：12围—2临4h固定娘后处情理：70假%乙醇凳脱去序苦味些酸产敌生的脆黄色适用盟组织涌：常幻玉备固伞定液阶，特萌别适折用于键固定液皮肤埋和胚最胎组讯织。五、扭固定洁后处祸理除去虏组织凝中渗午入的蹄固定喊液和序一些离由固微定液吵产生逮的沉岛淀、秒结晶崖和色面素的牌步骤撕称为来固定退后处狮理。主要钻有以晒下六禁种方乡丰法：流水务冲洗：重恐铬酸游钾、世甲醛萍固定仗的组俯织，体要经芦过流污水冲仓洗24荷h。酒精桃脱黄:含有悄苦味踢酸的恒固定泪液固气定的壤组织脉，必行须经唱过70％乙苹醇洗辫涤脱微去黄奏色。碘酒乏脱汞：氯身化汞伟固定永的组弃织有盗汞结击晶，温碘酒售浸泡浴除去婚。脱甲追醛色扬素：甲朋醛长常期固畏定的部组织耗易产勒生黑之色结些晶，70％乙队醇－汉浓氨块水溶杯液除富去。组织宫漂白舒：甲锇酸描固定营的组飞织为纳黑色粥。漂旋白液零漂白束才上世色。脱钙怀：含移钙组昂织骨磨、牙刷齿和炮内耳拔。脱芬水一、腊定义用某纳种能龄与透视明剂男互溶母的化六学试锡剂将踪蝶组织惑内的撞水分只逐渐历置换厌出来时的过绩程。要点引：缓蚊慢、捞彻底至、勿冒过度粒。二、习常用脱水懒剂乙醇、丙酮书、正芦丁醇乙醇固定剂+脱水它剂上行元酒精沫脱水70部%（30山%）→10男0%，以10％递敲增。丙酮脱水砖强，竖但对始组织登的收傻缩脆俯化作浑用也令强；主要脏用于有组织戚的固阻定兼犬脱水层或切环片的部快速抄脱水踩，以砍保护挨某些朴特殊废染色集的标鉴本不糕被褪第色。透裂明一、千定义对组抚织的迈最后苹脱水冈处理农。在经辜过前忧一阶速段的匠“脱咱水”芬后，肥还要忧借某饥种有肺机溶谷媒将肠酒精奶完全点置换境，使扣组织宁与所害用的土包埋笨介质报相溶盗而浸林渗。二、从常用题透明相剂二甲撇苯、苯甲导酸甲屿脂、三距氯甲局烷亡、冬培青油二甲估苯为无胳色透飘明的雾液体锤，易是挥发垫，长扭期接丽触对没呼吸骄道粘遭膜有傲较强讽的刺美激作拢用20分钟—1个小传时，匆大块崭组织撞可适暗当延布长时皮间。作用明迅速驻，浸瓜泡时裹间过汽长易遗发生旨过度企收缩欣和脆馅化苯甲童酸甲亦脂为无墙色透葡明的双液体浙，易东挥发透明含作用荒较二诵甲苯姻缓慢计，透美明时蝇间12坑--扩24小时致。对组朽织块刚的收小缩和伤脆化安的影锅响较危小。苯甲袭酸甲幕脂与傅火棉脱胶互摘溶，健用于蹈火棉瓜胶切拘片的蹄透明用石想蜡做妨为支迟撑剂例将组甲织包估埋成归块使案其硬速化的惨过程包括泪浸蜡父和包勿埋两舒步一、籍浸蜡组织串透明趋后，裕用石沿蜡置石换组艰织内闭部的啄透明村剂的得过程叼称为浸蜡。组织示块浸词蜡一撕般先摔经过碰低熔伏点蜡诵，再筑经过覆高熔抱点蜡劈燕。包物埋高溶辜点蜡险也称硬蜡溶点版在60甚℃-妨-6嗓2℃硬蜡腔箱的灾温度乞控制都在62酱℃-惠-6谢4℃之间组织耽浸蜡展时间险一般饭不超馅过1小时低溶盐点蜡威也称软蜡溶点唤在48浑℃-是-5茄0℃软蜡蠢箱的绳温度翼控制兔在52摸℃—扎54贝℃之间组织斑浸蜡侍时间甚一般袄可达2—占4小时二、铅包埋组织象浸蜡避完成叉后，逗接着酷进行娃组织报块包席埋。娇用于房诚包埋唇的是醋硬蜡声。包言埋在然包埋岛器中杜完成爆。修整型蜡块才时，可组织桂块应缩慧距蜡财块边莲缘2—3毫米垫，以自利于盒连续捧切片墙。切鸣片石蜡碗切片组织弯切片个中应圆用最台为广寄泛的畜一种升切片警就是图用石慨蜡作堪为包疲埋剂泻制作灭的切晒片。讽易于伍制作跃大量禁菲薄真的组宅织标橡本，区而且杨包埋猴块可昆长期提保存衡。一、焦仪器滤及器赞材二、赞切片芒过程屿：调节灶恒温画水箱单水温晶至47助℃左右苹；固定甜蜡块蛾于固型定器粥；快修兴装置企修整是包埋岗面；调节军切片闹厚度墨至4—伪6微米箭；连续陡切片慌；摊片侵于水剪箱内根；将蜡雨片贴舰于涂压好粘留片剂晚的载辆玻片绢上；置于把温箱墓内烤粮片。三、厕切片骄的注禽意事汤项①鹅切片龙前要率将切缓片机状各部正位的锋螺丝炼旋紧炭，否工则会扛引起素切片樱机各排部件托震动悔，造等成切青片厚央薄不允匀。②巧包埋裤块的爆切面授和切粥片刀半的倾磁斜度棚之间惠的夹尼角应筑按切静片机颈刀台笔上的筐刻度颤作适舍当调雹整。③喊恒温较水箱分的温唱度应垄比包卸埋蜡炸的溶光点低5℃警--展6℃。染柴色一、染料指分处子中晋含有发色煮团和助色山团的有待机化患合物效，有子鲜艳雹的色阴彩，近对于恶组织论有极届强的古亲和垃力。根据来源可分景为两拒类：天然窃染料密（卡蚂红、贼苏木女精）人工焦合成洽染料和（苦陪味酸矩、桔涂黄G）根据施其化学辫性质分为胸：碱性颜染料(b识as家ic李d吸ye走)酸性兰染料(a谁ci蚕d据dy狱e)中性(n钩eu在tr掩op蛮hi贤li绸a)染料二、坟染色亮的原钢理染色就是滤染料套和组访织细蒸胞的赤分子稿相互袄结合台，使翠组织莫和细坏胞着余色。化学粪反应在组多织细慢胞内联含有窄酸性住物质进和碱页性物千质。阴染色警时酸响性物眯质与酷碱性掩染料莫结合蠢；碱漆性物欲质与饼酸性挠染料六结合戚。细妄胞核钥中主龙要由出酸性苏物质睛组成戚（如羊核酸爸等）特，所赵以与充苏木也精等置碱性耳染料翼有很巡寿强的贞亲和剖力。滚细胞烦质主慢要由器碱性喝物质妄组成昆，所帐以与欺伊红订等酸哗性染孤料有凯很强苏的亲畏和力颈。能被扬碱性莲染料长着色祖的物轻质：拒嗜碱衬性(b急as督op母hi眠li孔a)；能被造酸性刮染料格着色毫的物榴质：捉嗜酸制性(a转ci谈do灾ph蹦il斧ia湖)。物理族反应细胞哑中有齐许多或微小押的毛依细小约孔，满染料君的色虾素离扶子通沿过这抱些小私孔渗纲入细赶胞内漠，染鞭料与宋细胞篇没有测牢固勺的结胞合，很但分殖散的指色素朴离子辆和组匆织细幻玉胞分兰子之岛间通忠过分样子间铁相互遥作用伞使细提胞着谊色。三、堵染色抖的注但意事魄项：1.溶媒览：水壤和乙弯醇。2.浓度缠：低跨浓度遮，长娇时间盾。3.温度惹：高长，染指色效殊果明纵显。4.适当归使用扮媒染妖剂、梨促染址剂和愿分化掏剂。媒染标剂：能增令强染精料对淘组织烛的着梳色能竖力，夸其本杰身与递染料并或组充织发誉生结中合的丈试剂蒜。如暖配制话各种救苏木破精染湾色液榨时添也加的缓钾明晋矾、先铵明妥矾等谈。促染从剂：能增册强染皆料对耽组织翁的着躁色能兼力，悄本身议并不映参与扮染色道反应菌。如巴伊红守染色涛液中灾添加千的冰肉乙酸而等。分化允剂：能台除去米组织稼上和洗切片都上过犹染的饮染色蜻液，判使染扭色部紧位与裙周围意组织秀对比培鲜明仇，着椒色深尝浅适浙当；虏例如携低浓辞度的虾盐酸预、醋涛酸、疏高锰果酸钾玩、重司铬酸脊钾等勇。封短固一、漫定义最后否一道纹程序袄是滴炕加封掏固剂诱，用狼盖玻萝片覆泼盖，诵以利口于镜讽下观殊察。阻断奴组织尿片与医外界碎的接敏触，筒防止泥组织亚片脱著片、豪受潮茅、干资裂、笑机械钟