消毒液微生物检测研究

消毒液微生物检测研究摘要：本文描述了一种葡萄糖醛酸苷酶生物检测法，用于从在硬质表面上使用消毒剂来检测残留的杀菌活性；在此分析中，使用了甲醛，乙醇，异丙醇，氯和包含2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇的制剂。消毒后一周，氯和市售制剂均显示出杀菌活性，分别为53.5％和98.2％，具有良好的微生物检测效果。关键词：消毒液；微生物；检测由于微生物检测法易于操作且可提供快速结果，因此已广泛用于评估化学制品的毒性。大肠杆菌产生一种酶，即b-葡糖醛酸糖苷酶（BGU），该酶能够水解含氟底物，例如4甲基伞形酰-bD-葡糖醛酸（MUG）。通过使用这种酶，有可能设计一种快速简便的生物检测法（荧光表面测试），用于检测和定量检测可能在液体介质中容易释放的惰性材料上微量消毒剂的存在。前提是在将预先消毒的载体引入装有MUG和大肠杆菌的试管中后，只有在没有活性细菌（因此也没有BGU活性）的情况下，荧光才会消失，这表明存在痕量抑制浓度的消毒剂。如果仍然存在活性细菌，则试管将显示荧光。如果此荧光低于未使用消毒剂的控制管发出的荧光，则可以相对于已知的测试消毒剂浓度定量残留的消毒剂活性，因为这种抑制作用与有毒物质的浓度成正比。消毒液微生物检测方法鉴定复杂样品中存在的细菌和病毒可用于疾病诊断，产品安全性，环境表征和研究。已证明基于阵列的方法可用于以合理的成本在单个测定中检测数千种已测序的微生物。我们设计了一种泛微生物检测阵列（MDA）以检测所有已知的病毒（包括噬菌体），细菌和质粒，并开发了一种新颖的统计分析方法，可从与该阵列杂交的复杂样品中鉴定出生物的混合物。与文献中的其他微生物检测/发现阵列相比，该阵列具有更广泛的细菌和病毒靶标覆盖范围，并且基于最新的序列数据和每个靶标的探针更多。为所有测序的病毒和细菌完整基因组，片段和质粒选择家族特异性探针。探针经设计可耐受某些序列变异，从而能够检测与测序生物具有同源性的趋异物种，并且与人类基因组序列无显着匹配。在对带有一种或多种病毒的加标样品进行的盲法测试中，MDA能够正确识别物种或菌株。通过PCR证实，在临床粪便，血清和呼吸道样品中，MDA能够检测和鉴定样品中多种病毒，噬菌体和细菌至家族和物种水平。MDA可用于识别复杂样品中存在的病毒和细菌。将大肠杆菌W3110thyF2在37°C摇动下在10ml补充了葡萄糖（20mg/ml）和胸腺嘧啶（0.05mg/ml）的Vogel-Bonner基本培养基（VB）中摇动生长。毫升）（均来自Sigma），直到达到对数后期（根据生长曲线，大约在18小时）。然后将培养物以3,0303g离心5分钟以消除残留的葡萄糖，并将沉淀物重悬于仅补充有胸腺嘧啶（0.05mg/ml）（VBT）的10mlVB中。该细胞悬液在使用前保持在4℃。微生物测试是化妆品安全性的关键方面。为了满足化妆品法规（EC）1223/2009的要求，必须确定原材料，散装产品和配制的最终化妆品的微生物质量。Intertek的微生物测试套件包括质量控制测试和研发支持，可帮助我们的客户确保产品质量和安全性。防腐剂测试测试涉及根据相关国际标准评估防腐剂系统的抗菌功效：国际标准ISO11930欧洲药典（EP）第5.1.3章法国标准NFT75-611美国药典（USP）第<52>章可行总数按照ISO16212和ISO21149标准或欧洲药典标准控制用于批次释放的微生物清洁度。中温细菌的定量测试（NFISO21149）酵母和真菌的定量计数（NFISO16212）微生物的研究与鉴定ISO18415：2007：特定和非特定微生物ISO18416：2007：白色念珠菌ISO22718：2006：金黄色葡萄球菌ISO21150：2006：大肠杆菌ISO22717：2006：铜绿假单胞菌特定生物微生物分析测试了以下消毒剂：2％甲醛（A.Matachana，SA，巴塞罗那，西班牙），20％乙醇和70％异丙醇（默克），2％次氯酸钠（Sigma）和CR-36MURAL（J。Collado，SL，西班牙马德里），由0.1875％2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇，0.0675％2,2,49-三氯-29羟苯基醚和1％N-烯丙基-N组成的商业制剂，N-二甲基氯化铵铵。除使用未经稀释的CR-36MURAL外，每种消毒剂均用灭菌和蒸馏水制备。然后将总共30个载体（直径1厘米，长0.8厘米的玻璃半圆柱体）与硬表面载体测试中使用的载体类似，引入装有50ml消毒剂的无菌摇瓶中。振摇以消除任何气泡后，将摇瓶在室温下放置10分钟，然后将载体移出并放在衬有灭菌滤纸的皮氏培养皿中放置30分钟，直到完全干燥。之后，立即将五种干燥的载体分别引入试管中，每支试管中均含有1.8ml的VBT并补充有MUG（0.01mg/ml）（Sigma），并剧烈摇动10s。将在每个实验之前立即从保存于4°C的悬浮液中制备的，在600nm处具有0.0560.002（CS0.05）吸光度的大肠杆菌细胞悬浮液添加到每个试管中（每管0.2ml）并在在37°C下摇动水浴。重要的是预测并避免在产品的运输，存储或处理过程中可能发生的成品物理状态变化。通过将产品暴露于变化的温度，湿度，紫外线，机械应力等各种条件下，我们可以预测产品在货架期内可能会遭受的条件，并查看这些条件是否对产品的质量和性能产生负面影响。安全。进行稳定性测试的另一个重要原因是确定产品的最小耐久性及其打开后的时间（PAO）。除了产品制剂的物理稳定性外，还在稳定性测试过程中检查了制剂与初级包装之间的相容性。包装的类型可能会影响成品的稳定性，例如将包装中的物质浸出到产品配方中。因此，应该在惰性包装（例如玻璃容器）以及将要出售产品的最终产品包装中进行稳定性测试。如果使用不同的包装类型，建议在每种包装类型中测试产品。稳定性测试分为两种：实时测试和加速测试。实时稳定性测试会在产品的整个保质期内对其进行监视（如果要声明为一年的保质期，则必须对产品进行一年的监视）。另一方面，加速测试是在加速条件下进行的，例如高温。因此，缩短了测试周期，并且这种测试通常需要3个月。在某些情况下，必须再次进行稳定性和相容性测试，例如产品重新配方，主要包装材料的更换，制造工艺或所用设备的任何重大变化等。最后，我们需要强调测试报告的重要性。该报告必须提供有关测试的所有必要信息；它必须包括一个明确的结论以及负责测试的人员的签名。210分钟后，用Perkin-ElmerLS30荧光计在340nm激发和445nm发射下测量每个管中的荧光。干燥后24小时和7天，通过相同的程序分析其他干燥的载体。以相同的方式同时制备对照，但没有消毒剂。通过计数胰蛋白酶大豆琼脂平板（类毒素）上的微生物，将每个实验开始和结束时存在的微生物数量确定为CFU。通过最小二乘线性回归由每CFU每分钟释放的甲基伞形酮的量计算BGU酶活性。通过使用溶解在VBT中的甲基伞形酮（Sigma）的标准曲线确定释放量。如前所述（3）计算痕量消毒剂对载体产生的大肠杆菌BGU活性的抑制作用，结果表示为相对于对照的抑制百分率：抑制百分率5（EAc2EAs）3100/EAc，其中EAc和EA分别是对照（不含消毒剂）和样品（含消毒剂）的EA。在不同的日子分析三个重复，每个重复带有五个载体，以获得抑制手段。载体释放的每种消毒剂的平均浓度计算如下，制备一系列装有VBT-MUG（1.8ml）和CS0.05（0.2ml）的试管，每支试管中均含有已知浓度的消毒剂。将试管进行孵育，并如上所述测量其荧光。如上所述计算抑制百分比，并且获得剂量-响应曲线，其中在x轴上的log10浓度和在y轴上的相应抑制百分比。通过使用这些剂量反应曲线的回归线，并了解浸没在每种消毒剂中的载体所获得的抑制百分比的平均值，可以通过使抑制百分比回归对应于已知log10的浓度来计算出载体释放的消毒剂的平均浓度。同时，通过学生t检验，以百分抑制值的算术平均值，将含有已知浓度消毒剂的试管的抗菌效力确定为MIC。由上述剂量反应曲线计算50％有效浓度EC50，作为抑制50％所需的物质浓度（ppm）。二、消毒液微生物检测结果分析所测试的五种消毒剂的EC50和MIC指的是与无消毒剂的对照组相比的BGU活性，氯，甲醛和CR-36表现出高毒性，而乙醇和异丙醇表现出较低的毒性。所有实验均在密闭的试管中进行，以避免在检测过程中因挥发而损失消毒剂。根据实验结束时执行的CFU计数，在与每种消毒剂的MIC相对应的浓度下未观察到细菌生长。CR-36起初似乎不如氯和甲醛活泼。不过，考虑到CR-36的杀菌成分（2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇（溴硝醇）仅占其成分的0.1875％），MIC和EC50可能分别为0.62和0.022ppm，如果仅考虑溴硝酚的浓度，则分别为333ppm和11.6ppm（而不是333ppm）。在这项研究中，没有尝试检查由CR-36引起的抑制是否仅由溴硝酚产生，并且材料对CR36的良好吸收可能有助于这些结果。氯，甲醛和CR-36浓度的增加导致BGU活性的逐渐抑制。但是，测试的其他两种物质，乙醇和异丙醇，在低浓度下会刺激BGU活性（抑制率低于对照组）。在这两种情况下，这种效果均与测试结束时观察到的CFU的增加或BGU活性（每个细胞的BGU活性）的刺激不一致，因此，这可能是由于细胞通透性增加引起的，类似于在BGU活性方面观察到的对二甲亚砜的影响。亚毒性浓度下BGU活性的这种刺激可能与基质或其酶解产物的不渗透性降低有关。只有浸入CR-36和2％氯溶液中的载体显示出BGU活性的残留抑制（P，0.05）。对于CR-36，这种抑制作用持续了至少一周，实际上没有损失容量，而2％氯溶液的抑制活性在7天后下降到其容量的一半左右（53.5％）。至于其他三种消毒剂，零时零时只有2％的甲醛显示出一定的抑制作用，尽管与没有消毒剂的对照组相比，差异没有统计学意义。在每次测试结束时确定相对于接种物的CFU数量时，在所有情况下都发现荧光的全部或部分抑制与微生物数量的减少相吻合。这表明BGU活性的降低是由于细菌数量的减少，而不是由于某些BGU抑制剂能够抑制该酶，但对细菌无毒，因此产生了BGU的特异性抑制。氯的百分抑制值的标准偏差远大于其他四种消毒剂的标准偏差。在一项关于氯对大肠杆菌BGU活性影响的研究中认为低浓度氯引起的细胞通透性的改变可以通过在CFU数量减少的情况下促进酶或底物的运输来促进EA。在讨论中的测试中，每毫升CFU的数量比所观察到的BGU活性的预期值小2.3至4.5倍。初步结果表明，通常还可能以比在玻璃载体上检测到的浓度更高的浓度检测化合物（例如戊二醛或甲醛）的残留物。因此，该方法可用于控制可能导致健康问题的材料上的残留消毒剂或灭菌剂。这种方法在环境上的应用还可以是评估农药或其他粘附在表面上的物质的持久性。另外，其具有简单，快速和便宜的优点。关于其他酶促荧光底物的方法的开发，可以将其应用于除大肠杆菌以外的其他微生物，从而扩大该生物检测的范围。结语：本文主要分析消毒液微生物检测方法，通过实践分析，消毒液微生物检测效果非常好，具有简单和快捷的优点。参考文献：[1]孙廷丽,黎玉莲,周少璐,谢小保.消毒产品消毒效果检测方法及其影响因素分析[J].中国洗涤用品工业,2020(Z1):98-106.[2]赵奇韬,周如玉,梅予锋,王娟.过氧化氢银离子消毒剂控制微生物污染的效果检测[J].口腔