免疫胶体金技术

免疫胶体金技术

Immunecolloidalgoldtechnique

胶体金标记技术的相关定义免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金标记实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。胶体金技术的发展

DevelopmentofImmunecolloidalgoldtechnique

1939-----雏形Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察金离子呈高电子密度。1971------作为标记物应用于免疫组织化学研究Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗原。1974------实现间接免疫金染色法Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上，实现了间接免疫金染色法胶体金技术的种类及优点快速免疫金渗滤法(immuogoldfiltrationassay,IGFA)

即穿流式(flowthrough)的固相膜免疫测定。主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。前者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴放置一片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜，标记结合物为免疫金。A：金标记抗体B：标本中的抗原C：包被抗体D：NC膜E：吸水材料F：塑料盒

免疫层析法(immunochromatogra-phy，ICA)

是继IGFA之后发展起来的另一种固相膜免疫测定，与IGFA利用微局限性膜的过滤性能不同，免疫层析法中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于层析作用的横流（lateralflow）)向另一端移动。移动过程中被分析物与固定在膜上某一区域的受体(抗原或者抗体)结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被分离，然后通过标记物显色来判定试验结果，以胶体金为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。免疫胶体金技术的特点优点：检测方法简单而快速，数分钟即可得出结果；不需仪器设备，操作人员不需特殊训练；试剂稳定，适用于单份测定；无污染。GICA的特点是单一试剂，一步操作。小型实验室即有条件开发生产。干燥包装的试剂可在室温保存一年以上。

成为目前“病人身边检验”（point-of-caretesting，POCT）中广为应用的方法。最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的GICA试剂和匹配的简便测读器CardiacReader，其精密度和准确性均符合定量测定要求。不足：

金免疫测定中应用的是单份试剂，难于进行质量控制。即使是同一批生产的试剂，也很难保证每个试剂的同一性。因此金免疫测定一般只能用于定性试验。其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料的开发与应用。ColloidalGoldSynthesisSolutioncolorvariesextensivelywithparticlesizeUsuallyadeepred,butalsodarkbrown/purpletolightorange/yellowColloidsizecanbecontrolledbyAu:CitrateratiosAnywherebetween1nm-100nm+CitrateiseasilysubstitutedbyothermoreAu-philicmolecules(i.ethiols)H2O,100OCH2AuCl4Cit-Cit-Cit-Cit-Turkevich,et.al.DiscussionsFaradaySoc.1951,No.1155-75.Pr活oc模ed价ur态e碍ofCo偿ll校oi欧da踩l缺Go检ld棒S战yn立th垂es昏isAd魄d程10萍0mLof短1凳.0略%颤H贺Au珠Cl4to荣a葱2暴00mLEr或le贩nm汗ey嫂er展f芳la铲sk钻o炼n炉a悲st碑ir揭ri食ng刃h叉ot文p仇la秒te鼻.仁Ad窗d执a途ma尺gn地et析ic律s封ti旅r岔ba申r法an哄d而br匆in烧g闭th处e花so去lu到ti污on片t扶o磁a促bo压ilTo姿t拉he托b股oi禾li惰ng华s尖ol浸ut裳io探n,零a勿dd胶1夺.5mLof菜a撤1减%爹so粉lu穗ti压on谊o揭ftr磨is俩od坚iu揪mci渗tr越at没edi赚hy胖dr梢at淡e,扮Na3C6H5O7.2再H2OSt亚op康h社ea前ti王ng捞w节he锦n哪a凯de说ep驻r鸦ed第c尽ol晶or朽i壶s在ob芝ta写in觉ed浙.Sy样nt叼he晒si昂s毫an划d滋pro易pe竖rtie盏s马of计d让if斥fe浓re衫nt肾p狱ar雪ti馅cl玩e裹si印ze胶体金粒径(nm)1%柠檬酸三钠加入量(ml)胶体金特性呈色λmax162橙色518nm24.51.5橙色522nm411红色525nm71.50.7紫红535nmTE油M庄Im乖ag金es乖o孟f货Co还ll变oi尾da腐l氧AuAv站er活ag嘉e气pa慈rt没ic脚le胜s标iz爱e昆~没17艘nmGo以od盏g换ol遣d血co坝ll吸oi龟ds匙a追nd讽b访ad驾(榴un舰st抬ab得le匆)悟go执ld可c柱ol逐lo回id娘s.劣质返金外检形不神均一将，且患非球左形，锡有凝超集现生象，握颗粒荣间变畜异系锤数较火大Ho斩w隔ar液e冬th典e将an好ti餐bo结di沸es杆c卵ou萌pl咱ed悦t朋o挤th滔e攻go兽ld许?Co湾nj杜ug辨at绘io阀n至of赴a溉nt借ib怪od殖ie校s萄to烦g钓ol毕d悦pa办rt捧ic繁le锐s扔de瘦pe萄nd殃s逐up吃on单t麦hr掏ee丸s仍ep俩ar狮at耀e击bu含t芽de拍pe府nd武en冠t装ph肝en汪om钟en陡a:a)罪.矛io鼠ni姐c胸at抢tr裕ac拣ti承on喇b肾et陕we洗en腥t附he非n锣eg券at旺iv厕el跑y雹ch真ar陶ge病d悠go段ld蜘a煤nd遥t绸he宜p桶os毕it饥iv弓el俊y默ch阅ar梢ge火d既pr边ot鸭ei也nb)载.鞭hy羞dr使op炉ho煎bi恭c钉at险tr怠ac浴ti叔on利b摸et咐we迅en净t恶he抛a叼nt常ib锐od绑y偿an元d掀th乒e托go亦ld宗s热ur呼fa喇cec)症.膝Su暖lf非ur雄b邮in帅di喂ng幼(Cy蝇st哈ei简nean崭dMe种th珍io垃ni倦ne)St雁ro冈ng摇es牙t牙bi约nd蚁in丈g向su畏gg满es屡te渐d废to版b阿e装th乒e集su盼lf抓ur串"垒hi硬ng总e"殖j殿oi罚ni蔑ng县t命he掩t梯he剖t拳woFcre逢gi宏on黎s胶体由金颗立粒带浸电情筛况尼抗湾体和评金颗样粒的灯耦联岂（图坛出处昼：IV舱D寒Te述ch周no徐lo坝gy）SA解MP上LE勺GO神LD岔C窑ON迟JU修GA结TI纲ON睛P仰RO属TO覆CO众LAd秧ju仁st远t均he既g元ol半d金co嗽ll疾oi稼d筹to行t蝇he飘p腊ro哈pe越r每pH觉;De宿te慌rm铜in挨ed培t励he厅m锻in锡im绵um每a找mo钉un加t岗of蕉p愉ro虾te庙in;Fi柄na樱l适co翠nj陡ug桨at六io丹nPu塘ri拳fi口ca藏ti译onAd糖ju简st叛t损he躬g卡ol霜d顾co虽ll葵oi妥d萍to辫t分he打p疤ro茂pe京r马pH胶体岛金与雨蛋白昌质的放结合贼成功嫩与否级，取轰决于pH值，泉一般尿只有罗在蛋躁白质消等电彩点(P检I)略偏稻碱的添条件遣下二言者才泻能牢顺固地草结合烤，因咱此，衣标记拴之前誉须将戴胶体到金溶奸液的pH值调婚至待分标记点蛋白粗质的氏等电战点略坊偏碱友。需要结提高泻胶体确金的pH值时折可用0.猛1m限ol幅K2窃CO捞3，需由要降惰低胶涂体金谁的pH值时垫可用0.毁1NHC悉l。测锯定金搬溶液独的pH可能兆损害pH测定拆计的慨探头隔，因变此，角一般州用精给密的pH试纸荣测定芳其pH即可.蛋白与胶智体金压结合竞的最恐佳pH测定取若貌干1.脖5m话l的试宜管，脏分别只加入1m帆l胶体马金用K2断CO泛3将pH分别衡调为3，4，5，6，7，8，9，10；去96孔培堵养板嘱，按pH从高呈到低仿分别怠将上嫁述胶名体金加分别匙取10你0u另l加入踩孔中肯，重素复三仪次；每孔肥分别炮加入20跃ul浓度译为10赶%的Na闲Cl溶液教，混除合，足室温搏下放宰置10铲mi糕n；观察劝胶体妹金颜拆色变拉化，墓记录咐保持恭红色陕的最父低pHAd钻ju令st念t登he柜g昏ol老d幸co岂ll川oi软d栗to狐t钟he薪p楚ro维pe枯r捧pH常用揪几种敏蛋白兆质标揭记时剩胶体允金所够用的pH值De劣te补rm荣in华ed系t斩he围m武in扇im挡um捎a砍mo悔un种t炸of悔p吨ro帖te可in（1）光钱电比尝色法犁：制聋备一义系列痛不同略浓度球的等掘体积惜蛋白愧质溶湾液（1m驱l），圣分别喂加入5m温l胶体浆金中奏，迅代速混幻玉匀，掌然后野，各盘加入1m款l躬10聋%Na焦Cl溶液善，摇盐匀，泡静置5m悔in后测瘦各管深。根洽据胶协体金受颗粒泥的大真小，OD在52拔0～58寇0n习m之间做测定顷，以OD值为戒纵坐轮标，云蛋白绸质用跑量为眨横坐省标作望一曲沙线，夕取曲安线最全先与远横轴尽相接晚近的既那一督点处聋的蛋搂白质威用量晒为最消适稳遥定量待。图5.换2中10雄nm的胶塘体金津溶液畏中蛋俱白质破的最洗适稳邪定量孝为45谦μg枝/m眠l。（2）目照测法倘：以税目测春法确么定胶纤体金照与待记标记猴蛋白乱质用统量比森例，机将标新记的庭蛋白膊质逐润级稀忆释后沟（由5μ冤g～45踢μg另设能对照梢管）牲，各睁取等涌体积熊顺序等加入左一系灶列装叫有1m塘l胶体诸金的虫试管成中，5m酱in后，决在上技述各判管内暂分别捕加入0.磁1m升l展10点%氯化刻钠，辅依表5-睬5顺序牢进行浩。1.抬P与ip犹et融te灶1厦ml逝o府f黄co商ll夸oi奇d死in捕to后e匆ac船h拴of方a荣s逝er朗ie夸s奏of董3雹ml宗c广le徐an早p动la屠st覆ic精t木ub雷es妖.2.漫A物dj象us些t勇th甲e岩an蠢ti战bo挨dy欢(善0.辆1u手g/为ul诉)尚to骡t为he督p克ro解pe腊r绝pH柔w困it仔h晓10涝0n百M崇K2最CO侧3卡or道1决00遥mM不H暑C1扣.3.棕A座dd斜t杨he贴a在nt届ib聪od穗y勉to抗e统ac幕h叛tu夹be庭i不n肥a脑se赵ri择es畏f用ro杜m秃0-昼15颂0u旬l倘(ie0-礼15源ug游i裹n得st阔ep冲s垄of腿0丢,饺1,序2递,辈3偿..泡..喂15溜ug逝).4.崭S洒ha颗ke胳e蔑ac省h谱tu象be蠢a戒nd烛l筝ea警ve浇f伤or营a兽pp比ro窝xi润ma蛛te末ly杀5贝m糕in游ut赔es葱t齐o著co陆nj远ug话at指e.6.御T纷o镜ea替ch班t纺ub脱e之ad谱d可10的0u墨l熔of考1慨0%龄N芝aC浑1疮an起d录ag政it间at钱e闻fo初r敞1炭mi南nu洽te保.7.稀T毒he被T淡ub耳e蚂co璃nt株ai疑ni沉ng步t固he汉m渴in享im租um梦a浅mo仿un费t阻of左p阔ro枝te耽in盗r院eq践ui移re帮d贫to篮s槐ta年bi简li祥ze硬t帜he惑g溜ol幼d棉so纺l激is应i签nd相ic损at衣ed梢b咸y均th宜e崭on廉e粒in钱w茅hi爷ch周t舞he加c碌ol顺or慎o位f复th槽e撞go彩ld禽s茎ol值d伯oe经s庭no隐t疏ch计an萄ge辛f磨ro候m井re赠d全to络b朱lu估e同up劝on栋t迅he放a默dd上it模io筛n旦ofNa踩Cl.Fi稳na垂l书co翠nj订ug筒at辫io绸n拾(Ig叔G)Ta赔ke衣1每00毕ml弟o调f季go双ld控s哈ol景a戒nd旦a昌dj迟us筝t作to府P崇h9Ad念ju带st唤t国he阵d容ia但ly原ze弃d愿an油d棚ce玻nt解ri扒fu芦ge隶d汁an味ti鸽bo芦dy臣s均ol供ut猫io略n互(0盲.1荒ug酸/u久l)麻t削o打pH备9.填2Ad旷d暗th注e竟de想te薄rm玩in脉ed死a健mo嚼un泛t桶of肉a凯nt刑ib格od吼y钓so姐lu蛾ti汪ondr魂op紧wi链seto棋t浸he弊g巧ol按d外wh涛il谁e绵st往ir肢ri稿ng红r朗ap孟id子lyAf险te悟r婶5鸦mi准nu唤te阿s轨ad统d片10强ml者o借f爱fi弓lt划er兴ed夏1帅0%自B热SA抛a析t蝴pH女9炕an雄d渐st且ir东g倚en逝tl毕y盟fo柄r民10随m邻in滋ut款es脑.Pu踢ri集fi唉ca飘ti平onTh煮e锁go第ld许c兆on奖ju琴ga森te榆m凤us刑t屈be立p回ur忠if树ie维d馒fr糖om叨e半xc住es变s割an化ti钞bo聪dy惕a安nd亲a动ny泥s宫ma枕ll尊c吊lu明st培er杏s茧re洲mo兄ve板d绝be锣fo河re痒c锅on盲ce惜nt轿ra厉ti剂ng英a彼nd狱s学to跨ri刚ng域.Sp棵in奶t辜he涝g企ol紫d注co通nj吗ug参at眠e庸at岁s绝pe开ed健s咸ac献co析rd损in清g品to魂g兆ol科d眯pa艺rt篮ic护le坊s谎iz粪e浙.Th测e敲go缺ld僵c极on侧ju箭ga查te菊w贝il夏l脊fo宏rm颗a痛l团oo活se透p车re逐ci耻pi祸ta倡te赶a毒t庆th艳e留bo粱tt斗om俭o晴f护th喷e锻tu例be烟.递Di舞sc们ar链d蹄th续e腾cl只ea厌r掌su谣pe鸭rn盼at慢an石t枣an金dre志su陵sp白en君dth婶e堡pe悦ll纷et羊w输it供h她pr夏op由er雹b躲uf柄fe计r.Th灿e妈go摧ld贡c尚on狸ju破ga坊te沿,袍if眨c扑or忧re取ct每ly咳m赚ad然e,蓝w俯il省l厌be键s饮ta地bl秃e茶at残4℃fo屯r袖se巩ve翅ra弓lmo包nt拐hs活.I仁flo苹ng泥t轿er绣m拼st范or钥ag竹e当is絮r膊eq搜ui敞re扔d钥is回s俭ho宣ul夫d魔beal妥iq也uo裕te择din着to愈1扯ml角v流ol翁um非es剂a愈nd察2吃0%淡g喝ly耻ce轰ro吵l夸ad越de吵d.锹I茧t恳ma恼y言th催en咽b沾e横fr卡oz住en冶a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