正交设计法优选翻白草中总黄酮的提取工艺

正交设计法优选翻白草中总黄酮的提取工艺【摘要】［目的］探讨翻白草中总黄酮的最佳提取工艺.［方法］采用正交设计法以提取物中总黄酮含量为评价指标，以乙醇浓度、提取时间、固液比及提取次数为考察因素，筛选翻白草的最佳提取工艺.应用分光光度仪测定提取物中总黄酮的含量.［结果］最佳提取条件为在乙醇浓度为700mL/L,固液比为1∶12，提取时间为150min，提取2次，其中乙醇用量为主要影响因素.［结论］所优选的提取工艺合理,操作简便,可行.

【关键词】黄酮类提取工艺植物药用

ABSTRACT:OBJECTIVETostudytheoptimumextractiontechniqueoftotalflavonoidsinthePotentilladiscolororthogonaldesign,totalflavonoidsinextractwasasevaluationindex,andethanolconcentration,extractiontime,ratioofmaterialtosolventandextrationfrequencywereasinspectingfactorstoscreenedtheoptimumextractiontechnique,andtotalflavonoidscontentinextractwasdetectedbyoptimumextractingconditionswerethattheethanolconcentrationwas700mL/L,ratioofmaterialtosolvent1∶12,extractiontime150min,andextractionprocesswastwotimes,inwhichtheethanoldosewasimportantinfluencingprocedureisconvenient,appropriateandfeasible.

Keywords:flavones;extractiontechnology;plants,medicinal

翻白草为蔷薇科委陵菜属干燥全草，全草含鞣质，植株各部分均含有黄酮类化合物［1］.它具有抗溃疡、解痉、消炎及降血脂等功能，广泛应用于制药及食品加工业［2］.本实验对影响翻白草黄酮提取的主要因素进行了正交试验，以黄酮含量为指标，采用方差分析法进行分析，筛选了翻白草的最佳提取工艺，为进一步开发利用翻白草提供了依据.

1材料

原料为翻白草全草，于2005年6月采集于吉林省延边朝鲜族自治州铜佛寺镇，经延边大学药学院生药学教研室吕惠子副教授鉴定为翻白草正品.芦丁购自中国药品生物制品检定所;电子天平为上海精密科学仪器有限公司产品，REE52C型水浴锅为北京市医疗设备总厂产品，紫外分光光度仪为上海精密科学仪器有限公司产品；所用试剂均为AR级.x【摘要】［目的］探讨翻白草中总黄酮的最佳提取工艺.［方法］采用正交设计法以提取物中总黄酮含量为评价指标，以乙醇浓度、提取时间、固液比及提取次数为考察因素，筛选翻白草的最佳提取工艺.应用分光光度仪测定提取物中总黄酮的含量.［结果］最佳提取条件为在乙醇浓度为700mL/L,固液比为1∶12，提取时间为150min，提取2次，其中乙醇用量为主要影响因素.［结论］所优选的提取工艺合理,操作简便,可行.

【关键词】黄酮类提取工艺植物药用

OptimizationofextractionprocessoftotalflavonoidsfromthePotentilladiscolorBungebyorthogonaldesign

JINQuan,LIANLihua，LUOHuishan*

(YanbianUniversityCollegeofPharmacy,Yanji133000,Jilin,China)

ABSTRACT:OBJECTIVETostudytheoptimumextractiontechniqueoftotalflavonoidsinthePotentilladiscolororthogonaldesign,totalflavonoidsinextractwasasevaluationindex,andethanolconcentration,extractiontime,ratioofmaterialtosolventandextrationfrequencywereasinspectingfactorstoscreenedtheoptimumextractiontechnique,andtotalflavonoidscontentinextractwasdetectedbyoptimumextractingconditionswerethattheethanolconcentrationwas700mL/L,ratioofmaterialtosolvent1∶12,extractiontime150min,andextractionprocesswastwotimes,inwhichtheethanoldosewasimportantinfluencingprocedureisconvenient,appropriateandfeasible.

Keywords:flavones;extractiontechnology;plants,medicinal

翻白草为蔷薇科委陵菜属干燥全草，全草含鞣质，植株各部分均含有黄酮类化合物［1］.它具有抗溃疡、解痉、消炎及降血脂等功能，广泛应用于制药及食品加工业［2］.本实验对影响翻白草黄酮提取的主要因素进行了正交试验，以黄酮含量为指标，采用方差分析法进行分析，筛选了翻白草的最佳提取工艺，为进一步开发利用翻白草提供了依据.

1材料

原料为翻白草全草，于2005年6月采集于吉林省延边朝鲜族自治州铜佛寺镇，经延边大学药学院生药学教研室吕惠子副教授鉴定为翻白草正品.芦丁购自中国药品生物制品检定所;电子天平为上海精密科学仪器有限公司产品，REE52C型水浴锅为北京市医疗设备总厂产品，紫外分光光度仪为上海精密科学仪器有限公司产品；所用试剂均为AR级.

2方法与结果

对照品溶液的制备及标准曲线的绘制精密称取105℃条件下干燥至恒质量的芦丁对照品，用700mL/L乙醇溶解定容于100mL容量瓶中，即得质量浓度为/L的芦丁对照品溶液.精确吸取芦丁对照品溶液0，1，2，3，4，5mL,分别置于25mL容量瓶中，各加入50g/L亚硝酸钠溶液，摇匀，放置6min，加入100g/L硝酸铝溶液，摇匀，放置6min，再加入40g/L氢氧化钠溶液10mL，加入700mL/L乙醇至刻度，摇匀，放置15min，于510nm处测定吸光度［3,4］.得回归方程y=+，芦丁质量浓度在20～50mg/L范围内，与峰面积呈良好的线性关系.

图1芦丁标准曲线

翻白草中总黄酮提取量的测定精确称取翻白草100g置于锥形瓶中，按比例加入一定量的提取溶剂回流提取总黄酮，在80℃条件下回流提取一定时间，流水冷却后过滤，合并过滤液，定容至100mL，即得总黄酮提取液［5,6］.精确吸取总黄酮提取液置于100mL容量瓶中，按标准曲线的要求测定吸光度，通过标准曲线得总黄酮含量.

翻百草中总黄酮提取工艺的正交试验主要对乙醇浓度、提取时间、固液比及提取次数等4个因素进行四因素三水平L9(34)正交试验，考察因素和水平见表1，结果见表2及表3.由表2中k1，k2，k3，R分析见，乙醇浓度、提取时间、固液比和提取次数4个因素对总黄酮提取率影响的主次顺序依次为乙醇浓度、提取时间、固液比、提取次数，最佳提取条件为在乙醇浓度为700mL/L.表1因素水平表表2正交实验设计及结果表3方差分析结果

最佳条件重复性验证试验为证实上述筛选法提取工艺的稳定性，以优选工艺，重复进行3次实验，测定翻白草总黄酮平均提取量为/kg,RSD为%，提示该工艺稳定，重复性好.

3讨论

正交实验结果表明,在乙醇热浸提取翻白草中总黄酮时，各因素对提取量的影响大小依次为乙醇浓度、提取时间、固液比及提取次数,其中乙醇浓度的影响最大.在选定的水平范围内，随着回流温度和固液比的增大,提取量亦提高，但由于本试验中使用的固液比值较大，提取充分，故对翻白草总黄酮提取量的影响较小．从极差分析中可直观见，乙醇提取翻白草总黄酮的最佳工艺条件是A2B3C3D2，即乙醇浓度为700mL/L,固液比为1∶12,提取时间为150min,提取2次，以最佳提取工艺测得翻白草中总黄酮含量为/kg.

【参考文献】

［1］钟海军.翻白草的化学成分［J］.中草药，2000，31：488.

［2］邹俊利.翻白草的研究进展［J］.黑龙江医药科学,2006，29:104.

［3］许松姬，韩春姬，许妍姬.轮叶党参降血脂保健