沙棘总黄酮抗角叉菜胶诱发大鼠血栓形成作用的研究

沙棘总黄酮抗角叉菜胶诱发大鼠血栓形成作用的研究【摘要】目的观察沙棘总黄酮对角叉菜胶所致大鼠尾静脉血栓的影响，并分析其作用机制。方法采用后足跖部皮下注射角叉菜胶mL/100g制备SD大鼠尾静脉血栓模型，观察24，36，72h大鼠血栓发生率与黑尾长度。将60只大鼠随机分为沙棘总黄酮高、中、低剂量组及模型对照组、阳性对照组和正常对照组，每组10只。各实验组动物均灌胃1次/d。30d后测定各组大鼠凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间、125I-血栓素B2(TXB2)、125I-6-keto-前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)水平以及血清一氧化氮含量。结果沙棘总黄酮能显着缩短大鼠黑尾长度，增加血浆PGI2/TXA2比值，延长TT，APTT时间，并可升高NO含量。结论沙棘总黄酮对角叉菜胶所致大鼠炎性血栓形成具有预防作用，其作用机制可能与提高PGI2和NO水平有关。

【关键词】沙棘总黄酮血栓形成角叉菜胶血栓素B26-keto-前列腺素F1a

Abstract：ObjectiveToobservetheeffectsoftotalflavonesofHippophaerhamnoidesonCarrageenaninducedthrombopoiesesinratsandstudyitsmechanism.venousthrombosisratmodelwasestablishedbyinjectingCarrageenanml/100gsubcutaneousintopawofSDratsandtherateofthromboembolismandthelengthofblackentailwereobservedat24,36and72h.2.60ratsweredividedrandomlyintogroupsofTFH(high、mediumandlowdose),model、asprinandcontrol(n=10).Theyweretreatedintragastricallyonceadayfor30days.PT，APTT，TT，TXB2，6-Keto-PGF1aandNOinserumweremeasured.ResultsTFHcouldsignificantlyshortenthelengthofblackentailandraisetheratioofPGI2/TXA2aswellasprolongTTandAPTTandincreasethecontentofNO.ConclusionTotalflavonesofHippophaerhamnoidescanpreventthrombogenesisinducedbypossiblemechanismmayrelatedtotheincreaseofPGI2andNO.

Keywords：TotalflavonesofHippophaerhamnoides；Thrombogenesis；Carrageenan；TXB2；6-Keto-PGF1a

血栓相关性疾病严重威胁人类健康，由心肌梗塞、脑卒中等血栓栓塞性疾病导致的死亡已占到全球总死亡的51%。血小板在血栓形成中起着重要作用，人们希望应用具有抗血小板作用的药物来防治血栓栓塞性疾病。沙棘总黄酮对心血管系统具有多种药理作用，能显着降低实验性高血脂大鼠血清胆固醇、甘油三酯含量；显着增加前列环素(PGＩ2)水平，提高PGＩ2/TXA2(血栓素A2)比值；也能显着降低血小板内CAMＰ含量，抑制血小板聚集反应，延长凝血时间［1，2］。本实验采用大鼠后足跖部皮下注射角叉菜胶建立炎性血栓模型，研究沙棘总黄酮对大鼠体内血栓形成的作用，并对其作用机制进行初步探讨，同时考察其对凝血系统的影响。

1器材1药品与试剂

沙棘总黄酮由青海康普德生物制品有限公司提供，批号20070107。肠溶阿司匹林片，由山西三九同达药业有限公司提供，批号H14023223，生理盐水由宁夏启元药业有限公司提供,批号0511114-2，NO测定试剂盒购自于南京建成生物工程研究所，批号20070423，TXB2测定试剂盒由北京北方生物技术研究所提供，批号20070420，6-keto-PGF1a测定试剂盒由北京北方生物技术研究所提供，批号20070400，角叉菜胶为SIGMA公司产品，批号G1023-25G。2仪器

SYSMEXCA-1500全自动血凝分析仪，RFJ-2008PS－免疫计数器，UV-9100分光光度计，可调式移液器，800型离心沉淀器，台式离心机。

2方法

分组与给药方法

SD清洁级健康雄性大鼠g60只，由本院实验动物中心提供，合格证号SCXR(宁)20070004。自由进食饮水、适应性观察1周后随机分为６组：正常对照组、模型对照组、阳性对照组、沙棘总黄酮高、中、低剂量组，每组各1０只。沙棘总黄酮用蒸馏水配成浓度分别为50%，25％，%的溶液，阿司匹林用蒸馏水配成浓度为1%的溶液，1次/d灌胃，模型对照组和正常对照组给予等量容积的蒸馏水灌胃，1次/d。连续灌胃30d。最后1次给药前两天开始造模,将角叉菜胶以生理盐水配成2%浓度，于大鼠后足跖部皮下注射，ml/100g，分别在24，36h，72h后测量大鼠黑尾长度，之后以2%乌拉坦腹腔注射麻醉，心腔取血检测相应指标。

黑尾测定

直尺测量大鼠黑尾长度。

指标测定

严格按试剂盒说明书，用放免法测定血浆TXB2和6-keto-PGF1a含量、免疫比浊法测PT，APTT，TT时间，硝酸还原酶法测定血清NO含量。

统计学方法

采用统计学软件处理，各样本均数比较采用单因素方差分析。

3结果

沙棘总黄酮对角叉菜胶大鼠血栓形成的影响注射角叉菜胶后，24h各组大鼠尾部均有血栓形成，大部分出现不同程度的淤血和黑尾，且黑尾长度的增长与时间呈相关性。36h后与模型对照组相比，沙棘总黄酮中剂量组大鼠黑尾长度明显缩短；72h后与模型对照组相比，沙棘总黄酮中、低剂量组大鼠黑尾长度的增加明显抑制。结果见表1。表1沙棘总黄酮对大鼠黑尾形成的影响

沙棘总黄酮对角叉菜胶大鼠血浆TXB2和6-keto-PGF1a含量的影响与正常对照组相比，模型对照组大鼠血浆TXB2含量，TXB2/6-keto-PGF1a比值显着升高，6-keto-PGF1a含量降低。用药30d后，与模型对照组相比，大鼠血浆TXB2含量、TXB2/6-keto-PGF1a比值明显降低，6-keto-PGF1a含量明显升高。其中阳性对照组最明显，沙棘总黄酮各剂量组以中、低剂量为最显着。结果见表2。表2沙棘总黄酮对大鼠血浆TXB2和6-keto-PGF1a含量的影响

沙棘总黄酮对角叉菜胶大鼠血液PT、APTT、TT的影响与正常对照组相比，模型对照组大鼠血液PT，APTT，TT明显缩短。用药30d后，与模型对照组相比，各剂量组大鼠血液APTT，TT明显延长其中以中剂量组为最显着，且优于阳性对照组。但各剂量组对PT没有明显影响。结果见表3。表3沙棘总黄酮对大鼠PT，APTT，TT的影响

沙棘总黄酮对角叉菜胶大鼠血液NO的影响与正常对照组相比，模型对照组大鼠血液NO的含量显着下降。用药30d后，与模型对照组相比，各剂量组大鼠血液NO的含量明显增高，其中阳性对照组最明显，沙棘总黄酮各剂量组以中剂量为最显着。结果见表4。

4讨论

血栓形成常涉及血液、血管、血流等多种因素，为一综合性病理过程。目前以德国病理学家virchow的三联制血栓形成学说即血管壁损伤、血液成分改变、血流异常贾乘.沙棘总黄酮对大鼠血栓形成的研究［J］.中医药学刊,2001,19(9):258.

［2］葛志红，梁毅，陈运贤，等.沙棘汁对环磷酰胺所致大鼠血小板减少的影响［J］.中国病理生理杂志，2003，19(5):693.

［3］王振义，徐也鲁，王鸿利，等.血栓与止血基础与临床［M］.上海：上海科学技术出版社，1988：1.

［4］胡三觉，田巧莲，顾建文，等.一种新的体内血栓形成动物模型［J］.中华血液学杂志，1993，14：541.

［5］纪文岩，吉中强.葛根素对大鼠血管内皮损伤后P-选择素、TXB2、6-酮-PGF1α的影响［J］.中国中医急诊，2005，14∶254.