菊花的组织培养47

扦插嫁接压条

本文档共45页；当前第1页；编辑于星期二\21点2分营养繁殖扦插嫁接压条

通过必修课的学习，我们已经了解到大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？组织培养本文档共45页；当前第2页；编辑于星期二\21点2分专题3植物组织培养技术本文档共45页；当前第3页；编辑于星期二\21点2分课题一菊花的组织培养本文档共45页；当前第4页；编辑于星期二\21点2分一、课题背景二、基础知识（一）植物组织培养的基本过程在植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。离体的植物组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成排列疏松而无规则的高度液泡化的呈无定形状态的一群薄壁细胞。1.细胞分化：2.愈伤组织：3.脱分化：4.再分化：本文档共45页；当前第5页；编辑于星期二\21点2分人参的愈伤组织本文档共45页；当前第6页；编辑于星期二\21点2分菠萝的愈伤组织本文档共45页；当前第7页；编辑于星期二\21点2分一、课题背景二、基础知识（一）植物组织培养的基本过程在植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。离体的植物组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成排列疏松而无规则的高度液泡化的呈无定形状态的一群薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。1.细胞分化：2.愈伤组织：3.脱分化：4.再分化：本文档共45页；当前第8页；编辑于星期二\21点2分本文档共45页；当前第9页；编辑于星期二\21点2分一、课题背景二、基础知识（一）植物组织培养的基本过程在植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。离体的植物组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成排列疏松而无规则的高度液泡化的呈无定形状态的一群薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。由脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。1.细胞分化：2.愈伤组织：3.脱分化：4.再分化：本文档共45页；当前第10页；编辑于星期二\21点2分本文档共45页；当前第11页；编辑于星期二\21点2分5.植物组织培养过程：本文档共45页；当前第12页；编辑于星期二\21点2分离体的植物器官、组织、细胞脱分化愈伤组织再分化根芽植物体植物组织培养的基本过程:脱分化和再分化过程是组织培养中的关键。本文档共45页；当前第13页；编辑于星期二\21点2分指植物的离体部分（包括任何器官、组织、细胞或原生质体），在人工控制的培养基及环境条件（温度及光照）下，得以生长和分化成完整植株的一种无菌培养技术。又称：植物离体培养6.植物组织培养：本文档共45页；当前第14页；编辑于星期二\21点2分细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质。7.植物组织培养原理：植物细胞的全能性（1）概念：（2）原因：本文档共45页；当前第15页；编辑于星期二\21点2分（二）影响植物组织培养的因素：1、外植体的选取

a不同植物的组织培养难度不同b对于同一种植物材料，材料的年龄、保存时间的长短等也会影响实验结果。2、培养基的配制(MS培养基)大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素：生长素、细胞分裂素等未开花植株的茎上部新萌生的侧枝本文档共45页；当前第16页；编辑于星期二\21点2分MS固体培养基成分及比例本文档共45页；当前第17页；编辑于星期二\21点2分微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。思考以下问题:1.同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？2、你认为组织培养过程中，成功的关键有哪些？这些步骤的适宜条件是什么？组织的脱分化及愈伤组织的再分化。植物组织培养过程中，影响植物细胞脱分化、再分化的最重要因素是植物激素，细胞分裂素与生长素之间的浓度比可以调控植株组培过程中芽和根的形成。本文档共45页；当前第18页；编辑于星期二\21点2分3、不同植物激素使用顺序使用顺序实验结果先生长素，后细胞分裂素先细胞分裂素，后生长素同时使用有利于细胞分裂但不分化细胞既分裂也分化分化频率提高

本文档共45页；当前第19页；编辑于星期二\21点2分4、不同植物激素使用量生长素/细胞分裂素比值结果比值高时比值低时比值适中促根分化，抑芽形成

促芽分化，抑根形成促进愈伤组织生长本文档共45页；当前第20页；编辑于星期二\21点2分5、pH、温度、光照（菊花组培）

pH=5.8温度控制在18—22℃每日光照12h6、消毒在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境本文档共45页；当前第21页；编辑于星期二\21点2分1、实验操作流程制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培移栽三、实验操作本文档共45页；当前第22页；编辑于星期二\21点2分2、实验具体操作（1）制备MS固体培养基实验室一般使用_____℃保存的配制好的培养基母液来制备①配制各种母液配制母液时，大量元素浓缩__________，微量元素浓缩__________。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照__________的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。1mg/ml410倍100倍三、实验操作本文档共45页；当前第23页；编辑于星期二\21点2分②配制培养基。按配方称取琼脂、蔗糖以及各种母液，配制MS培养基。2、实验具体操作（1）制备MS固体培养基实验室一般使用_____℃保存的配制好的培养基母液来制备4植物激素在菊花组织培养中，可以不添加_________________，原因是菊花茎段组织培养___________________。比较容易三、实验操作本文档共45页；当前第24页；编辑于星期二\21点2分③灭菌将分装好的培养基连同其他器械一起进行_________________。2、实验具体操作（1）.制备MS固体培养基实验室一般使用_____℃保存的配制好的培养基母液来制备4高压蒸汽灭菌三、实验操作本文档共45页；当前第25页；编辑于星期二\21点2分此时的组织或细胞为离体的，即细胞所生活的环境为液体有机物营养环境，而不是能体现其整个植物体的光能自养。高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？思考本文档共45页；当前第26页；编辑于星期二\21点2分2、实验具体操作（2）外植体消毒

①选取菊花茎段时，要取________________。流水冲洗酒精无菌水氯化汞无菌水②消毒流程：浓度______摇动_____次时间_____s浓度______时间_____min至少清洗___次漂净_______生长旺盛的嫩枝70%2～36～70.1%1～23消毒水三、实验操作本文档共45页；当前第27页；编辑于星期二\21点2分不是。对外植体进行表面消毒时，既要考虑到消毒效果，又要考虑到植物的耐受能力。在外植体消毒过程中，是不是强度越大越好，为什么？

思考本文档共45页；当前第28页；编辑于星期二\21点2分旁栏思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。本文档共45页；当前第29页；编辑于星期二\21点2分2、实验具体操作（3）接种

①前期准备：用_________________消毒工作台，点燃酒精灯。所有工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用_________________灭菌。②接种操作：插入外植体时_________________端朝上，每个锥形瓶接种_________________个外植体。70％的酒精火焰灼烧形态学上6～8三、实验操作本文档共45页；当前第30页；编辑于星期二\21点2分2、实验具体操作（4）培养

接种后的锥形瓶最好放在__________中培养。培养期间定期进行_________，温度控制在_________℃，并且每天用日光灯光照_________h。无菌箱18～2212消毒三、实验操作本文档共45页；当前第31页；编辑于星期二\21点2分在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的能力，是由细胞到一个个体的演变过程培养过程中为什么需要进行光照？思考本文档共45页；当前第32页；编辑于星期二\21点2分2、实验具体操作（5）移栽

移栽生根的试管苗之前，应先打开封口膜，在培养间生长几日；然后用流水清洗___________，将幼苗移植到____________________等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。根部培养基消过毒的蛭石或珍珠岩三、实验操作本文档共45页；当前第33页；编辑于星期二\21点2分固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培珍珠岩,珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩。蛭石是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。本文档共45页；当前第34页；编辑于星期二\21点2分（六）栽培幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花本文档共45页；当前第35页；编辑于星期二\21点2分制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培移栽冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上配制各种母液配制培养基灭菌实验操作流程本文档共45页；当前第36页；编辑于星期二\21点2分1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）4、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？思考本文档共45页；当前第37页；编辑于星期二\21点2分2.是否完成了对植物组织的脱分化和再分化3.是否进行了统计、对照与记录4.生根苗的移栽是否合格1.外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造成污染的原因有哪些？培养基灭菌不彻底；外植体消毒不彻底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。四、结果分析与评价本文档共45页；当前第38页；编辑于星期二\21点2分一般说来，容易进行_________繁殖的植物，也容易进行组织培养。如芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季等。无性五、课题延伸本文档共45页；当前第39页；编辑于星期二\21点2分一.课题背景（一）植物组织培养的基本过程二.基础知识（二）影响植物组织培养的因素三.实验操作四.结果分析与评价五.课题延伸制备MS固体培养基外植体消毒接种培养移栽栽培课堂小结本文档共45页；当前第40页；编辑于星期二\21点2分菊花的组织培养再分化材料性质、营养物质、调节物质、环境条件外植体的消毒接种基本原理:细胞的全能性基本过程:脱分化愈伤组织影响因素：操作流程：配制MS固体培养基培养移栽栽培本文档共45页；当前第41页；编辑于星期二\21点2分课后练习：1.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。本文档共45页；当前第42页；编辑于星期二\21点2分1.下列那组符合菊花组织培养的基本步骤（）A．制备MS培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培B．制备MS培养基→外植体消毒→接种→培养→栽培→移栽C．制备MS培养基→外植体消毒→接种→栽培→培养→移栽D．制备MS培养基→外植体消毒→接种→移栽→培养→栽培练习2.在外植体脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪个条件是不需要的（）A．消毒灭菌