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文档简介

酶联免疫吸附实验

(ELISA)

目的和要求掌握ELISA的原理、操作过程及注意事项了解ELISA实验结果的读取和分析实验原理借助酶标记抗体（或抗原）在体外与抗原（或抗体）结合，通过相应底物被酶解后出现显色反应。反应颜色深浅与抗原（或抗体）量的多少有关。特点：灵敏、特异类型：双抗体夹心法、竞争法、间接法等

双抗夹心法ELISA

竞争法

ELISA实验材料BSA包被的测定板酶标抗鼠IgG抗体待检血清，阳性血清，阴性血清洗涤液：PBS＋吐温-20底物液：邻苯二胺（OPD）终止液：10%H2S04实验步骤加入稀释好的待测血清每孔100ul，

37℃孵育40min加入100ul酶标抗体,37℃孵育30min洗板3次,每次1min洗板3次,每次1min实验步骤加入100ulTMB底物液避光室温孵育15min终止反应:每孔加1滴10％硫酸结果观察注意芳事项加样：应盼将所窗加物鸟加在EL拖IS荷A板孔印的底陆部，不并注距意不即可溅粗出，骡不可胳产生蜓气泡饶。洗板：每极次洗伞液加傲入后狐，应岭静置逗1分精钟使温清洗爬更加喇彻底碧。末抛次洗输板尽志量将京水甩彩干。液体混全部楼加完花后，坏可将睁酶标补板在蒜桌子勾上平缘瑞行轻稻轻晃厕动3雪0秒恋，混匀液体忆。底物心有毒性，终坊止液狱对皮绪肤有索腐蚀创性，粱尽量佳避免战接触姨。将待爪测血胸清1:币10献0稀释纪后，聚再做容倍比恨稀释品到各擦孔，径每孔10循0μ筹l，见芦表。商注意混匀。1:1001:2001:4001:8001:16001:32001:64001:12800阴性血清阴性血清10参0u市l血清姜稀释嚼及加课样1:1001:2001:4001

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