FACSCano流式细胞仪原理

FACSCanto流式细胞仪原理及应用

陈清彬Qingbin_chen@BD公司介绍BD公司是由MaxwellW.Becton和FairleighS.Dickinson于1897年在纽约创立的,总部位于美国新泽西州BD公司介绍位居财富周刊500强的大型跨国公司产品涵盖诸多医疗领域生物科学部:流式细胞仪及应用于生物科学的试剂、耗材BD公司流式细胞仪产品FACSVantageSE-大型分选机FACSAria-高速分选的台式机FACSDiva-高速分选的数字化大型机BD公司流式细胞仪产品FACSCount流式细胞仪FACSCalibur流式细胞仪FACSCantoII流式细胞仪BD公司流式细胞仪产品BDFACSCantoII流式细胞仪FACSCantoII流式细胞仪原理流式细胞仪可告诉我们一个细胞的什么指标?细胞的相对大小（前向角散射光信号，FSC）细胞的相对颗粒性及内部结构的复杂性（侧向散射光信号，SSC）相关的荧光强度散射光信号的特征FSC和SSC当颗粒通过聚集的激光束时，激光向各个方向散射。与激光束方向同轴的称前向角散射光信号（FSC）。与激光束垂直的称为侧向角散色光信号（SSC）。488nm激光激发产生散射光前向己角散订射光例信号认FS态C侧向礼角散环射光怀信号谣SS租C散射沟光信胳号的箱特征红细贞胞裂刊解的彩全血荧光死信号傍的特预征什么刊是荧假光信虫号当荧蛛光抗宴体或缺其他梦染料裕染色难的颗畅粒通丸过激土光束尾时，壤染料途吸收册光子踩跃迁魄到高深能级粮，返辨回基铅态时米，染宰料释烤放出兰能量卖，大务部分自以光押的形搜式释族放。属这种农发射贿出的黑光称昂为荧荒光。荧光齐信号沃的特握征发射朝光的圾荧光封强度霞与结造合的翼位点主成正划比信号忌产生荧光饼信号荧光抓信号胁的特付征常见吊荧光痛染料击的发锐射波臣长直方修图显卡示荧慎光信垒号点图迹显示漂荧光凭信号什么辫是流糊式细朝胞仪骆？在流吨动的精状态据中检联测细睬胞各茫种物斗理及改生物靠特征午的一菠种仪雕器；InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid流式让细胞歇仪特宝点及挺检测响标本特异巷性强盗，灵马敏度骨高，层速度弯快，袭并能好实现却多参腥数分执析；可检胃测的乡丰样本共种类逢多样(1芹)外周是血，姥骨髓郑，细川针穿廉刺，镰洗脱胜液，蛙实体侍组织睡，培拳养细晃胞(2寇)血仰清、互血浆接、培爸养上护清、腐细胞迎裂解矛液FA狡CS室Ca典nt蚁o条II流式因细胞堪仪系肺统组鞠成流式安细胞携仪液流诉车工作脚站FA洒CS自Ca亡nt周o简抱介配置善空冷惧激光两根放激光裕:4腿88戴nm清、6哲33梦nm芝、光路山固定肚，无炊需调钢校液流毯系统信号您检测堆系统八角炮形和抛三角踢形光乏学收旅集系邮统，岭将光斗信号房诚转换林成电此信号电子耻系统剂将电附信号煌转换绳成数击字化丸信号液流北系统流动骆室鞘液工作颤液，啊可选胳PB劳S、尤血球谁稀释蛙液或疲蒸馏浑水。样本遣流单细显胞悬较液，念浓度营51羊051夺舱106/m伸L液流锈系统鞘液晶是压瞎力驱茧动的图。在嫂压力山作用星下，盲鞘液惨经过受滤器微进入筋流动垄室下躁部的桑小室叨中。检测匹的样讽本在秀压力歌的作桃用下亿，也闸进入与流动跪室下袭部的葡小室帜中，分样本榜压力但略大岗于鞘借液的乘压力学。在鞘劫液的执包裹该下，典样本鲁由下篮向上馋通过灵流动荣室，凶经激滤光激酒发后侨，样铺本中棒的颗嚼粒被堪检测辱。液流皂系统晴-FL担OW界C坛EL倚L(流流动念室)InjectorTip荧光信号聚焦的激光光束鞘液液流竟系统液流顷系统爹-样林本流泉速样本撇流速馒的选全择高流和速：罪一般某用于习定性狐分析择，如干免疫挠分型摔。采炉集速缓度快宿,但望分辨列率低发.低流残速：撇一般秒用于岗对分铁辨率廊要求刻较高富的分驳析，骨如D碗NA府分析份。光学舱系统光学与系统染色浸的细抛胞或和其他根颗粒朋通过爪聚焦袭的激穗光束继时，多会散希射激漫光或盐荧光奖。因公为激宾光束家是一点个小悉斑点叛，颗召粒快饥速通误过流束动室竿，散皆射光放或荧后光持嫂续的捕时间全非常缓短-聚只有犬几微秆秒。傅这些旗短暂挠的光著信号碌被收乏集、走过滤丑然后玩被检旋测器梨转换赠成电矮信号净。信号厘采集许系统激光48毅8n腔m，印63鼻3n各m，激发矿样本令中的清颗粒遇或细挤胞产照生散垮射光嘉信号线和荧单光信叼号信号质检测颈组件湾-八被角形觉和三却角形光学奸滤片将激受光激帖发后晚产生耽的散切射光而信号快和荧魔光信痕号引搜导至查相应馆的P反MTPM之T-锅将光捷信号遵转换游成电横信号常用收荧光炸染料将的特及性荧光摄染料躬激引发波享长刊(n挂m)务发射吧波长柱(n什m)猪用羽途宵颜色FI姓TC吴4达88夸5斥25衬免颈疫荧燃光巷绿倒色PE园(R润D1杠)岂48衰8留57带5株免疫排荧光宇橙色Pe盯rC揉P宵4芳88肚6弄70箭免疫净荧光地深红AP屿C腔63顷3宜67知0敬免疫拒荧光括红色PI吉48艘8秧62助0岔D培NA月染色橙红EC为D医4男88策6紧20妈免虫疫荧炎光颗橙笔红Pe纯Cy晋5阴48量8松67斜5五免疫担荧光拖红常用污荧光吧染料慨(4笔88贝nm干,6证33票nm免激发疏)Fl孤uo帅re编sc谅ei时n症Is捉ot咬hi土oc里ya劣na诞te肃(稿FI浮TC赖)异硫巴氰酸夺荧光趋素Ph贞yc元oe哑ry挤th医ri甜n季(P低E)藻红荷素Al裕lo渐ph耐yc订oc掘ya鄙ni考n泥(A懂PC辰)异藻成蓝蛋且白Pe设ri疾di睡ni邻n-列Ch乡丰lo海ro贡ph针yl告l具Pr悄ot沿ei浊n色(P锈er砖CP起)多甲致藻黄吴素-谎叶绿鸭素蛋嫩白Ta螺nd亩em康D资ye性sPE丝式-T惨ex情as嫂R找ed异(颈EC茫D)PE剑-C巧y5泥(吊PC械5)PE系-C生y5评.5筝(杯PC修5.半5)光(舰fu碧tu虽re好s)PE秧-C海y7贞(拒PC听7)占(烦fu套tu姜re傍s)FA赔CS省Ca坑nt截oⅡ信号歼检测闭组件种类八角别形三角垄形构成检测资器滤片FA喇CS伐Ca港nt遥oⅡ信号倡检测叨组件八角愉形检纳测组燃件FA歼CS涝Ca猴nt毙oⅡ信号氏检测功组件三角呆形检纲测组友件FA畏CS究Ca颗nt欣oⅡ信号抖检测孔组件检测扇器鞘液棵流中饮的颗榜粒通踩过激唇光束妇时会把产生贯光信另号，竞光信司号到捞达检注测器提生成甚电脉酷冲信耗号，阵电子按系统援对电框脉冲毫信号认进一加步处槐理。FA虹CS胁Ca屡nt事o侧两类辨检测柱器光电症二极贸管：众FS眯C光电冬倍增挥管P玻MT辞：S订SC所和荧咏光信哨号FA贞CS穷Ca数nt蹦oⅡ信号兔检测继组件光学占滤片皇用于睡调整摔光谱丘的分砌布。当光燃子遇估到滤浑片时里，光胶子或梢通过许滤片给，或雁被滤委片吸亿收，滋或被完滤片钢反射辨。FA越CS详Ca超nt装oⅡ的滤鞋片长通饱滤片章（L战P）耀：长逗于设耽定波平长的锹光通骡过，醒并反眼射短逝于设刮定波羞长的俱光FA显CS圆Ca沟nt近oⅡ的滤号片带通才滤片利：允足许一检定带直宽波允长的搁光通绵过。FA创CS料Ca哈nt午oⅡ的滤亚片FA郊CS酬Ca露nt带oⅡ的滤锐片FA钥CS稍Ca裂nt纵oⅡ电子钢系统将与霉电脉辽冲信发号强弱盛相关贸的电嫌压数字歉化有三携类电扶脉冲泉信号高度脉信号坦H面积肤信号崖A宽度姐信号野W几个歼概念信号线放大PM兄T将格光信捎号转判换成怀电信点号，博调整纽奉PM片T的苗电压具，信禁号强总度将带随之茎改变修。阈值信号当放大榆过程认会产确生不面需要寇的脉厅冲信娘号，包通常纸来自悄于碎紧片。益通过轨设定亿某一宜信号有的最茎低强点度值吗，可面将不蹈需要跳的脉夹冲信鼻号去介除，爆这一较设定奥值称讲为阈意值。几个安概念颜色疼补偿采用驴合适眨的方够法校盾正荧胶光染叙料之台间叠显加所耀造成街的误河差。芝在完陶成双吗色以委上荧石光标枣记的略样本车时，艇都需长要作佛颜色镇补偿辈。颜色精补偿FI摊TC恩主要等由F商IT腾C的挽检测割器检基测，穴但部懒分光绒也会宴进入魄PE邻检测今器几个概概念颜色践补偿带通多滤片央接受咐的是火一定浙带宽州波长窜的荧朽光，触故会嗓有干贫扰光歇同时搂被接朴收，唱然后即一同鸽进入嫩PM烦T进烘行光邮电转净换并绪放大趣。几个怖概念颜色干补偿通常皆干扰驱光占软该染紫料所远发出妄荧光雕总量攀的X卷%补偿谎模型类图颜色酸补偿骄判断叔标准未作灾颜色鸣补偿颜色刊补偿纹判断治标准补偿斗后怎样省进行煤颜色瓣补偿Co俘mp测B办ea言ds用于净流式谅细胞污仪多络色分曲析时草调整串荧光铃补偿种。含依两种绿微球术，抗虽小鼠避/大徒鼠免干疫球冈蛋白链的浆微球俩，可傍与小筋鼠/讲大鼠贿免疫脑球蛋悬白的链结咱合；锣及阴扒性对亦照微拾球，怜不与宜免疫使球蛋玻白结滋合。跟这两嘱种微恼球与间鼠源漂性的胜荧光碰抗体誓混合拉时，售显示椅为清浅晰的蜡阳性障群与泊阴性灾群（趣背景句荧光篇），挑可据顶此手吹动调度整颜阀色补共偿。An萝ti纽奉-M勉ou奶se纱I考g补队偿微下球组漂合，疼产品勿号：裂55哈28蛋43An抚ti市-R龄at柳I航g补盾偿微往球组永合，闸产品肺号：真55辫28某44An良ti筒-R衬at表/h揪am样st旨er店Ig炕补偿炒微球塑组合粉，产柳品号纺：5纽奉52塔84刷5仪器康运作饮需要佛的质帅控品仪器撕校准颈需要鸣微球BD遵F厚AC霸S丸7-荣Co腥lo贡r犬Se型tu炭p锯Be肺ad排s（Ca亏t抬No欧.3伏35吼77号5）补偿冰调整摧需要欣微球BD枕C拳om林pB刊ea糟ds杰A膜nt叨i-绝Mo资us吴e倒Ig淡,(C足at装N筒o.绸55植28吃43挖)BD绒C史om胳pB愁ea毫ds臣A渠nt锦i-战Ra材t闻Ig莲,(C铜at樱N握o.滴55嘉28界44开)仪器绑清洁BD超F雕AC饭SR全in崭se漂白原水流式拥细胞毙仪的佩应用流式盏细胞揭仪可另以告炮诉我扫们什即么？细胞横内和触细胞劈燕外发采生了洗什么痒事件处？流式夜细胞傲术的糖应用细胞辱生理艳学研虾究细胞肚膜表蕉面标饭记胞内槐标记细胞咐周期楚分析凋亡真分析分选CB灾A细胞阀生理尖学研睛究细胞木相对殖大小色和颗相粒性胞内素pH斗值检告测Ca选++遍流动候性检企测膜电敬势检碌测细胞兴活性起检测细胞最活力苹(增捧殖能嘱力)砌的检酒测细胞你生理尺学研古究细胞委相对捎大小贼和颗甩粒性负分析细胞染生理岛学研秤究胞内梁pH阿值的雁检测细胞桶生理项学研护究Ca2+流动痕性检辩测Ca2+是非谜常重首要的北细胞训内离糕子，溜在胞党膜到党胞浆轰的信滨号转搏导中叶起重炭要的齿作用时。细最胞受险到刺王激后驱，胞莫内C飞a2+浓度塑会发纠生改痕变。最常秃用的副染料In模do布-1暴ex锹ci界te沫d孩at弊U复VFl秃uo厚-3旁ex荐ci晋te衔d增at应4幼88企nmFu厌ra滚r晒ed劝e政xc诊it树ed编a模t由48进8n黄m细胞蹄生理霞学研余究Ca2+流动倍性检俯测细胞匠生理星学研蹄究细胞耍膜电兔位的阀改变超极颤化的垮细胞嫂摄取寒更多趴的染神料，周细胞辫总的狱荧光抬强度扬增大津；细背胞去受极化敲时，标染料航释放甜到细欧胞外摔，总弃的荧巧光强殿度减谜少。染料伤和试徐剂Di嗓OC6(3傻)约Di环OC5(3者)挥D设iO遇C1(3抬)悉D猴iO确C1(5希)Va维li娃no抖my任ci市n陵Gr勇am望ic洒id辫in弱D悬CC彻CP细胞四生理拼学研狱究细胞草膜电论位的杏改变细胞先生理划学研蚕究细胞烤活性锋分析Fl卡uo罪re赴sc柏ei赖n暮Di纤ac树et碌at月e进清入活词细胞富后,喂被胞伴内酯门酶降界解,侦生成普荧光津底物羊.活缸细胞蚀会发想绿色疗荧光细胞庄生理希学研冤究细胞桶活力胃分析CF改SE兰(疲Ca所rb快ox泡yf贿lu拿or危es毁ce烛in肃S浩uc搏ci早ni序mi诞dy熟l徒es鸡te雾r)是一蒙种亲狡脂性饺染料闯，可络被细胡胞膜调吸收旨。细崖胞标猜记C秩FS疑E后车再诱凳导增兄殖，迁分裂汁后的毙细胞荐将含壳半量喂的C挤FS尚E，码如此间可监司控细劣胞分抵裂的绑数目击。细胞右生理异学研赤究细胞离活力裂分析上图丹中人台T细脾胞被扭标记享并刺孙激后阔，可箭跟踪违六代权的分颈裂。核如果率配合祥使用碑Mo先df循it肌软件啄分析锻，可址确定千每代传的细疏胞数驳。细胞菠膜表片面标敌记CD柜2CD虾4CD#=clusterdesignationnumber细胞锦内标茫记胞内且多种皆肽类背已被夫成功黄标记螺，包炉括病金毒颗棋粒、榨免疫打球蛋瞎白、装雌激界素受纽奉体、贵细胞断因子