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文档简介
关于分光光度测定方法第1页,讲稿共12页,2023年5月2日,星期三一、普通分光光度法1.单组分的测定
通常采用A-C
标准曲线法定量测定。2.多组分的同时测定
⑴若各组分的吸收曲线互不重叠,则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。
⑵若各组分的吸收曲线互有重叠,则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。
Aλ1=εaλ1bca
+εbλ1bcb
Aλ2=εaλ2bca
+εbλ2bcb
第2页,讲稿共12页,2023年5月2日,星期三二、示差分光光度法(示差法)
普通分光光度法一般只适于测定微量组分,当待测组分含量较高时,将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射光强度,并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。
设:待测溶液浓度为cx,标准溶液浓度为cs(cs<cx)。则:
Ax=εb
cx
As=εbcsΔA=Ax
-As=εb(cx
-cs
)=εbΔc
测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔA。第3页,讲稿共12页,2023年5月2日,星期三示差分光光度法(示差法)
ΔA=Ax
-As=εb(cx
-cs
)=εbΔc
测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差ΔA
。
示差法测得的吸光度与Δc呈直线关系。由标准曲线上查得相应的Δc值,则待测溶液浓度cx
:
cx=cs+Δc
第4页,讲稿共12页,2023年5月2日,星期三示差法标尺扩展原理:普通法:cs的T=10%;cx的T=5%示差法:cs做参比,调T=100%则:cx的T=50%;标尺扩展10倍第5页,讲稿共12页,2023年5月2日,星期三三、双波长分光光度法
不需空白溶液作参比;但需要两个单色器获得两束单色光(λ1和λ2);以参比波长λ1处的吸光度Aλ1作为参比,来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。
ΔA
=Aλ2
-Aλ1
=(ελ2
-ελ1)bc
两波长处测得的吸光度差值ΔA与待测组分浓度成正比。ελ1和ελ2分别表示待测组分在λ1和λ2处的摩尔吸光系数。
第6页,讲稿共12页,2023年5月2日,星期三关键问题:测量波长λ2和参比波长λ1的选择与组合
以两组分x和y的双波长法测定为例:设:x为待测组分,y为干扰组分,二者的吸光度差分别为:
ΔAx和ΔAy,则该体系的总吸光度差ΔAx+y为:
ΔAx+y=ΔAx+ΔA
y如何选择波长λ1
、λ2有一定的要求。第7页,讲稿共12页,2023年5月2日,星期三选择波长组合λ1
、λ2的基本要求是:
⑴选定的波长λ1和λ2处干扰组分应具有相同吸光度,即:ΔAy=ΔAyλ2
-ΔAyλ1=0故:ΔAx+y=ΔAx=(εxλ2-εxλ1)bcx此时:测得的吸光度差ΔA只与待测组分x的浓度呈线性关系,而与干扰组分y无关。若x为干扰组分,则也可用同样的方法测定y组分。
可采用作图法选择符合上述两个条件的波长组合。⑵在选定的两个波长λ1和λ2处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。第8页,讲稿共12页,2023年5月2日,星期三四、导数分光光度法
导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面,显示了很大的优越性。
利用吸光度(或透光度)对波长的导数曲线来进行分析:
I=I0e-εbc假定入射光强度I0在整个波长范围内保持恒定:
dI
0/dλ=0则:dI/dλ=-I0
bce-εbcdε/dλ
=-I0
bcdε/dλ
第9页,讲稿共12页,2023年5月2日,星期三导数分光光度法
dI/dλ
=-I0
bcdε/dλ
一阶导数信号与试样浓度呈线性关系;测定灵敏度依赖于摩尔吸光系数对波长的变化率dε/dλ。吸收曲线的拐点处dε/dλ最大,故其灵敏度最高(见图)。同理可以导出其二阶和三阶导数光谱(略)第10页,讲稿共12页,2023年5月2日,星期三请选择内容:第一节基本原理第二节紫外-可
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