临床基因扩增检验实验室管理暂行办法

临床基因扩增检验实验室管理暂行办法第一章总则

第一条为规范临床基因扩增检验实验室管理，保证临床基因扩增检验质量，使临床诊断和治疗更为科学、合理，特制定本办法。

第二条临床基因扩增检验技术指以临床诊断治疗为目的，以扩增检测DNA或RNA为方法的检测技术，如聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应（LCR）、转录依赖的放大系统（TAS）自主序列复制系统（3SR）和链替代扩增（SDA）等。

第三条本办法适用于开展临床基因扩增检验的实验室。临床基因扩增检验实验室设立在二级以上医院。

第四条临床基因扩增检验实验室必须使用经国家药品监督管理局批准的临床检验试剂开展临床基因扩增检验项目。

第五条卫生部临床检验中心（以下简称卫生部临检中心）和省、自治区、直辖市临床检验中心（以下简称省临检中心）负责对所辖行政区域内临床基因扩增检验实验室的质量监督管理工作。

第二章实验室设置和验收

第六条拟设置临床基因扩增检验实验室的医疗机构按照《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》（见附件）筹建实验室；筹建完成后，由法定代表人向卫生部临检中心提出技术验收申请。申请时需提交以下材料：

（一）《医疗机构执业许可证》复印件；

（二）可行性研究报告；

1、拟设临床基因扩增检验实验室机构的所在地医疗卫生资源状况、本机构的基本情况、对临床基因扩增检验的需求以及临床基因扩增实验室运行的预测分析；

2、拟设临床基因扩增检验实验室的设置平面图；

3、拟设临床基因扩增检验实验室将开展的检验项目、实验设备条件和有关技术人员资料

第七条卫生部临检中心和省临检中心共同组织相关专业的专家组（以下简称专家组），按照《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》对提出申请的临床基因扩增检验实验室进行技术验收。验收完成后，在20日内将验收报告寄送至申请机构。

第八条经专家组技术验收合格的医疗机构将本办法第六条规定的材料及专家组验收报告送至省级行政部备案。在将符合规定的全部材料送达省级卫生行政部门后15日内未收到省级卫生行政部门不同意的意见，方可开展专家组技术验收合格的临床基因扩增检验项目。

第九条未经专家组验收合格并报省级卫生行政部门备案的医疗机构不得擅自开展临床基因扩增检验项目。

第三章实验室监督管理

第十条临床基因检验实验室必须按照《临床基因扩增检验实验室工作规范》（另发）开展临床基因扩增检验工作。

第十一条临床基因扩增检验实验室技术人员必须进行上岗培训。经培训合格者，由培训单位发给合格证书，并将培训合格人员名单报卫生部临检中心备案。获得培训合格证书者方可从事临床基因扩增检验工作。

培训单位为卫生部临检中心，或由省级卫生行政部门指定并经卫生部临检中心认定的机构。培训时使用规定的统一教材。

第十二条以科研为目的的基因扩增检验项目。不得向临床出具检验报告，不得向病人收取任何费用。

第十三条临床基因扩增检验实验室必须按照《临床基因扩增实验室工作规范》开展室内质量控制，并参加卫生部临检中心组织的室内质量评价。

第十四条卫生部临检中心按照本方法和《临床基因扩增实验室工作规范》协调、组织省临检中心对临床基因扩增检验实验室的检验质量进行监测。监测结果报省级卫生行政部门，同时抄送被监测的临床基因扩增检验实验室所在医疗机构。

第十五条卫生部临检中心或省级临检中心受省级以上卫生行政部门委托可对临床基因扩增检验实验室进行现场检查，现场检查工作人员在履行职责时应出示证件。在进行现场检查时，检查人员有权调阅有关资料，被检查机构不得拒绝或隐瞒。

第十六条卫生部临检中心对在室间质量评价中不合格的临床基因扩增检验实验室提出警告，对连续二次或三次中有二次发现临床基因扩增检验结果不合格的临床基因扩增检验实验室，卫生部临检中心报省级以上卫生行政部门由省级以上卫生行政部门责令其暂停有关临床基因扩增检验项目，限期整改。经专家组进行再次技术验收并合格，并报省级卫生行政部门核准后，方可重新开展临床基因扩增检验项目。

第十七条对于未经卫生部临检中心组织的专家组技术验收合格并报省级卫生部门备案，擅自开展临床基因检验项目的医疗机构，由省级卫生行政部门依据《医疗机构管理条例》第四十七条和《医疗机构管理条例实施细则》第八十条予以处罚，并予以公告。公告所需费用由被公告机构支付。

第十八条出现下列情况之一的临床基因扩增检验实验室，由省级卫生行政部门责令其停止开展临床基因扩增检验，并对其所在医疗机构予以公告。公告所需费用由被公告机构支付：

（一）开展超出卫生部临检中心组织的技术验收合格并报省级卫生行政部门备案临床基因扩增检验项目的；

（二）使用未经国家药品监督管理局批准的试剂开展临床基因扩增检验的；

（三）在临床基因扩增检验中未开展室内质量控制的；

（四）在临床基因扩增检验中未参加室间质量评价的；

（五）在临床基因扩增检验中弄虚作假的；

（六）以科研为目的的基因扩增检验项目向病人收取费用的；

（七）使用未经培训合格的专业技术人员从事临床基因扩增检验的；

第四章附则

第十九条对采供血机构的基因扩增检验实验室开展基因扩增检验项目的管理，参照本办法执行。

第二十条卫生部临检中心组织的专家组对申请开展临床基因扩增检验的实验室进行技术验收所需费用按国家有关规定执行。

第二十一条本办法由卫生部负责解释。

第二十二条本办法自发布之日起施行。附：临床基因扩增检验实验室基本设置标准

根据《临床检验扩增检验实验室管理暂行办法》，制定本标准

一、临床基因扩增检验实验室区域设置原则

（一）临床基因扩增检验实验室区域设置原则

1、试剂储存和准备区

2、标本制备区

3、扩增反应混合物配制和扩增区

4、扩增产物分析区

如使用全自动分析仪，区域可适当合并。

（二）各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。

（三）进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，即试剂储存和准备区—>标本制备区—>扩增反应混合物配制和扩增区—>扩增产物分析区。

（四）不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。

二、工作区域仪器设备配置标准

（一）试剂储存和准备区

1、2-8C和-15C冰箱

2、混匀器

3、微量加样器（覆盖1-1000ul）

4、移动紫外灯（近工作台面）

5、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）

6、专用工作服和工作鞋

7、专用办公用品

（二）标本制备区

1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱

2、高速台式冷冻离心机

3、混允器

4、水浴箱或加热模块

5、微量加样器（覆盖1-1000ul）

6、可移动紫外灯（近工作台面）

7、超净工作台

8、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）

9、专用工作服和工作鞋

10、专用办公用品

如需处理大分子DNA，应具有超声波水浴仪。

（三）扩增反应混合物配制和扩增区

1、核酸扩增仪

2、微量加样器（覆盖1-1000ul）

3、可移动紫外灯（近工作台面）

4、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）

5、专用工作服和工作鞋

6、专用办公用品

(四)扩增产物分析区

视检验方法不同而定。基本仪器设备如下：

1、微量加样器（覆盖1-1000ul）

2、可移动紫外灯（近工作台面）

3、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头（带滤心）

4、专用工作服和工作鞋

5、专用办公用品如何迎接临床基因扩增检验实验室技术验收《2003年华东区临床检验中心协作组临床实验室质量管理及新技术应用高级研讨会》

临床基因扩增检验实验室主要应用把PCR（聚合酶链反应）技术应用于疾病的诊断与治疗监测。PCR技术发明是生物医学领域的一项革命性创举，具有深远历史意义，但在上世纪九十年代中国，在我国由于部分医部机构受利益的驱动，在缺乏技术、设备以及规范化管理的情况下，PCR技术临床应用泛滥，出现大量假阳性和假阴性结果，甚至出现虚假检测报告，造成检验结果和临床意义应用十分混乱，严重扰乱正常医疗秩序，特别在性病基因检测方面，甚至还带来一系列道德伦理、家庭纠纷以及社会和法律问题。PCR技术临床应用所出现的一系列问题引起卫生部管理层高度重视，卫生部医政司于1988年下发了卫医发[1998]9号文件宣布PCR技术暂停应用于临床诊断。经过近四年反复论证，卫生部2002年1月14日发布“临床基因扩增检验实验室管理暂行办法”，同年2月20日卫生部临床检验中心发布“临床基因扩增实验室工作规范”。两个文件宣布了PCR技术临床应用解冻，明确规定临床基因扩增检验实验室开展PCR技术必需具备的基本条件：①规范的PCR实验室②编写适合本实验室的质量手册③经PCR专业知识培训的技术人员（PCR上岗证）④使用有生产批文的PCR试剂。具备条件的二级以上医院可向卫生部或省临床检验中心申请技术验收。

本人作为通过卫生部临床检验中心验收的临床基因扩增检验实验室一名实验室工作人员，同时也作为专家多次参与卫生部临床检验中心组织的实验室验收，就临床基因扩增实验室技术验收的前期准备工作和现场技术验收整个过程作一简单介绍，并谈谈本人体会。

一、为什么要进行临床基因扩增检验实验室技术增收

临床基因扩增实验室采用PCR技术用于临床基因诊断，由于PCR技术对所检测的核酸模板进行大量扩增，容易出现实验室污染导致临床检测标本假阳性结果；另外由于PCR技术要求高、影响因素多（特别是RNA标本），实验过程处理不当易导致核酸模板无扩增现象，导致临床标本假阴性结果。因此临床基因扩增检验实验室技术验收和规范化管理是PCR技术本身需要，也是在临床上顺利应用该技术前提。

二、PCR实验室验收准备工作

（一）硬件准备——实验室基本建设

1.根据文件要求，临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区；标本制备区；扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区，如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。

2.各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。

3.进入各工作区域必须严格按照单一流向进行，即试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。

4.不同的工作区域使用不同的工作服（不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。

5.工作区域仪器设备配置标准

（1）试剂贮存和准备区

2～8℃和-15℃冰箱：混匀器；微量加样器（覆盖1～1000µl）；移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。

（2）标本制备区

2～8℃冰箱，-20℃或-80℃冰箱；高速台式冷冻离心机；混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器（覆盖1～1000µl）；可移动紫外灯（近工作台面）；超净工作台，消耗品；一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。

（3）扩增反应混合物配制和扩增区

核酸扩增仪；微量加样器（覆盖1～1000µl）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。

（4）扩增产物分析区

视检测方法不同而定。基本仪器设备如下：微量加样器（覆盖1～200µl）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。

（二）软件建设——质量手册编写与实施、人才资源（上岗证培训与相关知识学习）

1.临床基因扩增检验实验室的质量手册编写

质量手册是阐明临床基因扩增检验实验室的质量方针，并描述过其质量体系的文件。质量手册规定了质量体系的基本结构，是实施和保持质量体系应长期遵循的文件。临床基因扩增检验实验室质量手册编写应依照卫生部下发两个文件，并结合本实验室实际情况编写适合本实验室的切实可行的质量手册。质量手册的提纲应包括三部分：质量方针和宗旨；工作制度；标准操作文件（SOP）

（1）质量方针和宗旨

制定临床基因扩增检验实验室的质量管理目标和质量保证体系的结构体系和总方针。

（2）工作制度

一般应包括以下文件：实验室的设置、布局及组织结构；实验室内务管理制度；实验室的人员配置及管理制度；生物的防护与安全制度；实验室废弃物处理制度；实验室清洁消毒制度；仪器设备的管理制度；仪器、试剂、耗材购置程序及管理制度；临床标本的管理制度；实验室记录的管理制度；质量控制工作管理制度；结果报告管理制度；抱怨的内部处理制度；负责人及质检员职责；岗位设置和责任制等……

（3）标准操作程序（SOP）

一般包括：消毒液配制标准操作程序：消毒标准操作程序；超净工作台使用标准操作程序；超净工作台维护和保养标准操作文件；PCR仪使用标准操作程序；PCR仪维护和保养标准操作程序；高速低温离心机使用标准操作程序；移液器使用标准操作程序；冰箱维护和保养标准操作程序；电热恒温水浴箱操作程序；电子天平使用和校正操作程序；可移动紫外消毒车使用操作程序；加样器校准标准操作程序；离心机维护保养操作程序；温度计校准程序；试剂的质检操作程序；标本唯一标识编号编制规则；临床标本的采集及处理操作程序；临床标本的保存程序；乙肝病毒核酸扩增荧光检测标准操作程序；丙肝病毒核酸扩增荧光检测标准操作程序；结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测标准操作程序；沙眼衣原体核酸扩增荧光检测标准操作程序等……

（4）引用图表：PCR扩增可接受标本记录表；PCR扩增拒收标本记录表；室内质控结果记录表；室间质控记录表；消耗性材料验收记录表；试剂验收记录表；故障处理表；台阶式高速离心机使用记录表；台式高速冷冻离心机使用记录表；扩增仪维护保养记录表；人员培训计划及培训记录表；实验室工作人员一览表；主要设备一览表；实验室清洁消毒记录表；工作区温度、湿度记录表；抱怨记录表；标本超低温保存记录表；应急处理记录表；垃圾处理记录表；冰箱温度记录表；水浴箱温度记录表；移动紫外消毒车记录表；设备校正记录表；检测结果报告流程；报告单样张；临床送检标本流程图；实验室组织结构图。

三、临床基因扩增检验实验室技术验收申请

（1）填写临床扩增检验实验室技术验收申请表

（a）基因扩增检验实验室基本情况

包括检验科基本情况特别是基因扩增检验实验室基本运行情况，必要性与可行性，着重分析开展项目运行情况、人员配置现状、内部质量管理体系执行情况与效果分析。

（b）应提供资料

医疗机构执业许可证；

拟设置基因扩增检验实验室医院的医疗卫生资源状况、对临床基因扩增检验的需求情况以及实验室运行的预测分析；

拟设基因扩增检验实验室的设置平面图；

实验室主要负责人简历表；

实验室工作人员一览表（附实验室工作人员简历）；

主要仪器设备表；

拟开展的临床基因诊断项目；

临床基因诊断质量手册；

检验报告单2份。

（c）希望验收时间

根据本实验室建设进展情况和试运行进展，提出大致的现场技术验收时间。

（d）声明

志愿申请，承担两义务：遵守《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和《临床基因诊断实验室工作规范》及有关规定；不论能否获准通过验收，预付验收阶段的全部费用。

（2）卫生部或省临床检验中心预审

对申报文件和现场进行预验收，初步确定是否进行现场验收和验收时间。

四、现场技术验收

卫生部临床检验中心临床基因扩增检验实验室技术任务书现场技术专家组成员组成

技术验收工作日程表

验收组预备会

首次会议

现场验收

实验室设置及仪器设备配备情况

实验室标准操作程序文件

有关记录

现场考核

现场试验

验收组全体会议

拟定验收结论和验收报告

末次会议

验收组宣布验收结论

实验室负责人讲话

５.临床基因扩增检验实验室验收体会

（１）对验收文件的学习不够、理解不深，导致编制程序性文件偏离，应对照验收要求逐条落实，切实可行。

（２）目的性认识不足：

受老观念的影响，总以为实验室技术验收准备工作是为专家而准备的，没意识到这是本实验室检验质量的内在需要，以为只要通过专家现场验收，拿到合格证书就万事大吉了。

（３）质量控制意识不强

我们编写的质量手册的目的是规范实验操作整个过程，做到实验过程有章可循，实验记录有据可查，保证实验结果的可靠性和准确性。由于基因扩增技术特殊性，即使严格按质量手册进行操作，也难免出现错误结果，因此还应该强化质量控制意识。实验过程中严格设置质控标本，包括试剂空白对照、阴性标本对照、临界值阳性标本对照等，分别监测试剂配制与加样过程中是否存在污染？标本核酸模板提取过程中是否存在污染？标本检测过程中是否存在假阴性结果和结果是否准确？等。但有些医院由于考虑到各种实际问题而没有很好落实，应引起高度重视。

（4）程序文件实施难问题

在许多医院，由于基因扩增检验实验室是目前大多检验科唯一通过实验室技术验收的实验室，可能受周边其他实验室不规范行为的干扰和存在人员配备方面问题，可能出现文件落实方面问题，特别是原始标本的接收和记录方面。

（5）工作量少影响质量保证体系实施

严格按临床基因扩增检验实验室技术要求通过验收的实验室，存在一定运行成本，需要有一定临床标本量的支持；如果某一医院医疗资源不足，标本来源不足以支持运行成本时，就会想方设法去减少运行成本（包括试剂成本和劳务成本），导致检验质量难以得到保证。因此建议欲建立临床基因扩增检验实验室的单位，应充分考虑自己医疗资源情况，确定是自己建立临床基因扩增检验实验室合算？还是外送标本合算？。同时卫生部和省临床检验中心在初审应充分考虑这方面情况，以及现场验收专家应严加把关质量管理的历史1950年代临床实验室开始质量控制（QualityControl,QC）;1980年代参照工业的GMP管理思路建立良好实验室实践准则（GoodLaboratoryPractice,GLP）；进入质量保证（Qualityassurance,QA）；1990年代实验室引入质量体系认证及实验室认可制度，实现全面质量管理（TQM，TotalQualityManagement）。质量体系认证——ISO9000（2000版）；实验室认可——ISO/IEC标准17025-2000《校准和检测实验室资格的通用要求》；ISO/DIS标准15189-1999“医学实验室的质量管理。”

2美国临床实验室认证

•发证机构：HCFA（HealthGareFinancingAdministrations）,卫生保健署

•认证依据，CLOA38，行业认可，强制，体系+能力

•认证中介机构：

*JCAHO（JointCommissiononAccreditationofHealthcareOrganizations）

卫生机构认可联合委员会

*CAP(CollegeofAmericanPathologist)

美国病理家学会

*COLA（CommissiononOfficeLaboratory

Accred-

itation）

医生实验室认可委员会

3我国实验室合格评定

•认可

*依据：ISO/IEC17025，15189

*国家评审，自愿，体系+能力

•认证

*依据：ISO9000：2000版

*中介机构，自愿，体系

•行业技术验收

*《临床实验室管理办法》，《江苏省医院检验科建设与管理规范》

*省、市临床检验中心，强制，体系+能力

4PCR验收意义及验收依据

2002年开始的PCR实验室验收工作开创临床检验技术准入的先河、推动临床实验室标准化建设、规范检测市场、建立医疗事故预防机制。其依据为：

《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》卫医发[2002]10号

《临床基因扩增检验实验室工作规范》卫检字[2002]8号

《关于成立临床基因扩增检验专家组的通知》苏卫医[2002]42号

5规定应具有的SOP（13个）仪器设备的维护保养程序、仪器设备的校准程序、仪器设备的操作程序、临床标本收集程序、临床标本的处理（核酸纯化）程序、临床标本的保存程序、试剂的质检操作程序、消耗品购置验收和储存程序、废弃物的处理程序、内务管理程序、室内质量控制程序、核酸扩增及产物分析检测的操作程序、抱怨处理程序。

6质量管理体系

6.1定义

在质量方面指挥和控制组织的管理体系。（QualityManagementSystem）管理体系是指建立方针和目标并实现这些目标的体系。实验室通过把组织机构、职责、工作程序、质量活动过程和各类资源、信息等协调统一起来所形成的有机整体即为实验室的质量体系。

6.2质量体系的文件构成第一层：质量手册（纲领性文件）；第二层：程序性文件（体系要素的规定）；第三层：作业指导书（具体项目的操作指导）；第四层：记录包括表格、签名、原始记录、报告等质量记录和技术记录。

6.3质量手册定义

GB/T6583定义：质量手册是阐明一个实验室的质量方针，并描述质量体系的文件。它既是质量体系的表征形式，又是质量体系建立和运行的纲领。它对实验室的组织结构（含职责）、程序、活动能力（过程）和资源作出规定，是实验室长期遵循的文件。

6.4质量手册的分类

根据手册的内容和用途分为二类：质量保证手册——用于证明，供客户使用，质量管理手册——用于运行，供实验室内部使用。

6.5质量手册的作用

编写质量手册的健全和完善质量体系的首要环节。根据实验室的内外因素合理调整、选择体系要素，分配和落实质量职责，理顺管理关系，明确管理责任，合理安排各类文件的层次，把实验室积累的经验变成法规性文件。协调各工作环节的准则。

内部质量审核的依据；对外证实实验室的质量保证能力，提高客户的信任度。

6.6质量手册的特征

•以客户为关注焦点：以病人为中心，为临床服务

•领导作用：创造使员工能够充分参与实现目标的环境

•全员参与：各负其责

•过程方法：将资源和活动作为过程进行有效管理

•管理的系统方法：各个过程的有效连接

•持续改进：根据实际不断完善

•基于事实的决策方法：遵循科学，实事求是出报告

•与供方互利的关系：相互协作，共同获利

6.7质量手册的结构

•封面

•批准页：包括实验室名称、标志，发行版次，生效日期，批准人签名，手册编号，受控状态。

•实验室公正性声明

•修订页：以表格描述修订序号、修订的章节条款和简要内容、批准人及日期。

•目录：各章节条款的名称及页码

•前言：介绍实验室的一般情况和手册的适用范围以及手册中术语或缩略语的定义

•手册的管理：对手册的保存、分发、评审、修订以及保密作出规定

•质量方针及目标

•组织结构及人员责权利关系

•要素描述：由系列SOP文件对溯源、人、机、料、样、法、测等质量诸要素的陈述

•支持性文件：包括实验室平面图、人员一览表、仪器设备一览表、引用标准及参考文献等

6.8标准操作程序

StandardOperationalProcedure,简称SOP。程序的定义为：为进行某项活动所规定的途径。SOP是临床实验室内部以文件的形式对质量活动用规定的方法进行连续而恰当的控制。实验室的SOP应涵盖所有的质量活动，包括检测或校准计划、管理性程序、技术性程序、项目操作程序和记录表格等。由于影响每个实验室的质量活动的条件和因素不一样，一个SOP只在某个实验室内有效，而不一定适用于其他实验室。

6.9标准操作程序的一般要求

•对完成各项质量活动的方法作出规定，每个SOP都应对一个或一组相互关系的活动进行描述；

•每个SOP应说明该项质量各环节的输入、转换和输出所需的文件、物资、人员、记录以及它们与有关活动的接口关系；

•规定开展质量活动的各个环节的物资、人员、信息和环境等方面应具备的条件；

•明确每个环节转换过程中各项因素的要求，即由谁做、做什么、做到什么程序、达到什么要求，如何控制、形成什么记录和报告，以及相应的审批手续；

•规定在质量活动中需要注意的例外或特殊情况的纠正措施；

•SOP应简练、明确和易懂并且工作人员熟练掌握和严格遵守。

6.10推荐PCR实验室质量手册目录

1.质量方针和宗旨

2.工作制度

2.1实验室的设置、布局及组织结构

2.2实验室内务管理制度

2.3实验室的人员配置及管理制度

2.4生物防护与安全制度

2.5实验室废弃物处理制度

2.6实验室清洁消毒制度

2.7仪器设备的管理制度

2.8仪器、试剂、耗材购置程序及管理制度

2.9临床标本的管理制度

2.10实验室记录的管理制度

2.11质量控制工作管理制度

2.12结果报告管理制度

2.13岗位责任制

2.14抱怨制度

3.操作指导书（SOP）

3.1消毒标准操作程序

3.2超净工作台使用标准操作程序

3.3超净工作台维护和保养标准操作程序

3.4PCR仪使用标准操作程序

3.5

PCR仪维护和保养标准操作程序

3.6台式离心机使用标准操作程序

3.7

高速冷冻离心操作标准操作程序

3.8

移液器使用标准操作程序

3.9

加样器校准标准操作程序

3.10

冰箱维护和保养标准操作程序

3.11

电热恒温水浴箱操作程序

3.12

电子天平使用和校正操作程序

3.13

可移动紫外消毒车使用操作程序

3.14

温度计校准程序

3.15

试剂的质检操作程序

3.16

标本唯一标识编号编制规则

3.17

临床标本的采集及处理操作程序

3.18

临床标本的保存程序

3.19

乙肝病毒核酸扩增荧光检测标准操作程序

3.20

室内质量控制标准操作程序

3.21

室间质评标准操作程序

4.引用图表

4.1

实验室组织结构图

4.2

实验室工作人员一览表

4.3

人员培训计划及培训记录表

4.4

主要仪器设备一览表

4.5

临床送检标本流程图

4.6

PCR扩增可接受标本记录表

4.7

PCR扩增拒收标本记录表

4.8

室内质控结果记录表

4.9

室间质控记录表

4.10

消耗性材料验收记录表

4.11

试剂验收记录表

4.12

故障处理表

4.13

仪器设备使用记录表

4.14

仪器设备维护保养记录表

4.15

实验室清洁消毒记录表

4.16

工作区温度、湿度记录表

4.17

抱怨记录表

4.18

标本超低温保存记录表

4.19

应急处理记录表

4.20

垃圾处理记录表

4.21

冰箱温度记录表

4.22

水浴箱温度记录表

4.23

移动紫外消毒车记录表

4.24

设备校正记录表

4.25

检测结果报告流程

4.26

报告单样张

6.11

文件格式

一

目的

二范围

三职责

四工作流程

五引用文件及表格

6.12

写作技巧

•目的：WHY，为什么要开展这项活动

•范围：WHAT，活动涉及的方面

•职责：WHO+WHAT，谁做，谁负责

•工作流程：列出活动顺序和细节，明确各环节“输入——转换——输出”，即做何事（WHAT）、何人做（WHO）、何时做（WHEN）、何地做（WHERE）、如何做（HOW）

•引用文件和表格：

开展此项活动涉及的文件、标准以及使用的表格、证明文件和记录保存期

7评审中常见问题

7.1手册

文件不全，无系统性；质量要素描述不全；格式不对；与实际工作脱节；无现行有效性（无手签，各区无相应手册）；记录不全、不规范

7.2人员

人员档案：每人一个档案袋，有关资格证书（如上岗证）、培训、技能和经历等。

培训计划及实施记录：每人有年度、季度、月的培训内容及实施记录；内容包括外出学习、进修，内部质量手册学习、业务学习、新项目引进等。

7.3设施与环境

通风、紫外、清洁、消毒的程序及记录、生物安全防护的程序及记录、生物垃圾的处理。

7.4仪器设备

采购程序及验收标准；校准程序及状态标识，使用、维护、保养的程序及记录；档案：每个与检测质量相关的设备均应建档，内容包括：设备的名称；制造商名称、型号、序号或其它唯一性标识；接收日期和启用日期；）目前放置地点；接收时的状态（例如全新的、经改装的）；仪器使用说明书或其复印件；校准和/或检测的日期和结果以及下次校准和/或检测的日期；迄今所进行的维护和今后维护计划的细节；损坏、故障、改装或修理的历史。

7.4料（试剂、耗品）

采购程序及领用记录，质检标准、程序及记录，应急程序；缺货、试剂变质；室内质控品。

7.5样（品）

标本唯一编号，年月日项目顺序号；标本采集标准操作程序；标本接受（拒收）标准、交接记录；标本保存、销毁的程序及记录；标本处理标准操作程序

7.6（方）法

方法学的有效性——依据；SOP的合理性——生搬硬套；分区操作的协作——流程合理；质控点的安排——提取效率、扩增效率；基线的调整——CT值、本底荧光值。

7.7（检）测

•室内质控的SOP：耗品质检，试剂质检，质控方法（纠错措施），质控图。

•室间质评的SOP：纠偏措施

7.8报告

•发放范围：门诊、病区、外单位

•发放方式：保密、电子、邮件

•报告单的格式：唯一编号、检测下限、实验室申明

•审核、标准、不合格报告的处理

7.9抱怨

•实验室服务、质量改进的依据

•对象：病人、医生、工作人员。SOP应明确方式、职责、反馈、记录。惑临床椒基因舰扩增赢检验巡实验日室管练理暂软行办牺法很如何汽迎接射临床疑基因砌扩增逝检验软实验往室技园术验版收隙设计柄与验乓收标诱准厘临床侧基因捏扩增衣检验局实验巴室工员作规穿范

鬼为使丢基因壳扩增陷检验字技术兰有效敢地应珍用于暴临床仪，更烘好地牧为疾父病的错预防爪、诊箭断和域治疗沟服务券，保粘证检尚验质熔量，艺特制饰定本璃规范店。昼一、踏临床战基因编扩增墙检验泽实验坏室的拾规范掘化设吃置及棚其管催理

疤临床威基因兼扩增待检验涛实验岂室的领规范闹化设概置详蔑见《昼临床绣基因搞扩增抽检验祥实验玩室管算理暂名行办忍法》啊(卫价医发浑[2晒00逢2]纷10证号文阁)附递件《底临床吃基因淘扩增排检验己实验只室基猛本设等置标武准》顺。为娃避免胡污染乘，必绞须严舌格遵塑循《子临床问基因笑扩增渗检验凶实验道室设贪置标另准》姻设置染临床魂基因呜扩增卵检验箭实验亏室。

级临床圆基因枪扩增躺检验叉实验等室四顽个隔蒙开的是工作扔区域梨中每吓一区驳域都作须有献专用划的仪广器设硬备。鄙各区较域都驴必须保有明机确的穗标记鸣，以舟避免绑设备听物品跳如加架样器跑或试迷剂等栏从其锈各自筛的区表域内惕移出捡从而嫩造成喜不同敌的工复作区边域间跟设备中物品许发生陡混淆阅。进黑入各泼个工油作区欠域必喝须严隶格遵智循单刃一方颗向顺失序，恼即只稼能从档试剂刘贮存国和准样备区撒、标情本制板备区蒸、扩谨增反袖应混陡合物该配制慌和扩陷增区女(简考称扩哀增区丹)至卡产物滤分析朴区，师避免姐发生村交叉尖污染渐。在饮不同喇的工冤作区悠域应激使用改不同壤颜色朝或有拾明显脂区别借标志脑的工鼻作服尼，以白便于理鉴别逼。此村外，畜当工昼作者晴离开北工作均区时虹，不商得将誉各区昏特定染的工剪作服犬带出锋。

融清洁抓方法愚不当幕也是姓污染宣发生菜的一漠个主导要原劈因，狼因此惕实验丽室的晓清洁钉应按题试剂残贮存贯和准督备区众至扩两增产纪物分呼析区倚的方匠向进报行。运不同泥的实锣验区顺域应摩有其泽各自迅的清碍洁用赤具以筹防止键交叉恐污染迷。

经(一两)试或剂贮睡存和疫准备趁区

班下述碰操作伏在该妄区进妇行：吼贮存角试剂豆的制洞备、坑试剂笛的分贵装和熄主反鞭应混掩合液戴的制临备。

移贮存俱试剂润和用煮于标酬本制泉备的杀材料师应直坏接运许送至躺试剂洲贮存坚和准款备区惠，不扯能经妇过产丰物分箩析区鄙。在财打开骗含有坦反应仅混合技液的视离心释管或湖试管再前，卸应将躬其快感速离买心数悼秒。皆试剂发原材睁料必邀须贮样存在晴本区屯内，贯并在风本区盐内制表备成按所需橡的贮斤存试退剂。钻当贮陕存试秘剂溶诱液经汤检查抛可用问后，廊应将咐其分惜装贮茧存备初用，如避免热由于你经常维打开应反应缴管吸讽液而短造成杯污染舒。

航含反衰应混冒合液允的离眨心管瓦或试方管在炊冰冻黎前都输应快幼速离切心数距秒。惊大多肺数用虫于扩池增的嫩试剂言都应荐冰冻送贮存恩。为抖避免妥因单他次反嫁应取由液而徐频繁偶的冻泊融主番贮存价试剂恶，应青分装庄冰冻于贮存萍试剂凭溶液华。贮柿存试关剂的签分装虏体积陶根据耕通常究在实炭验室态内一胀次测霸定所狗需的尸扩增劈反应榜数来达决定帽。

席主反全应混奏合液浆的组适成成励份尤沉其是奉聚合客酶的掩适用垃性和农稳定句性通裁过预吓试验恭来检踪查，邮评价知结果宰必须河有书勤面报春告。首对于突"热捡启动楚"技川术(偏在第图一个裙高温辟变性盆步骤卵后加搂入酶惰)，霉聚合动酶也啦可不陡包含诵在主婚反应洒混合霸液中街。

太在整弊个本员区的千实验召操作所过程策中，腊操作畜者必占须戴注手套万，并周经常谎更换阴。此殖外，慌操作厉中使轧用一域次性吐帽子抛也是女一个夫有效朱地防萍止污构染的允措施安。

忍严禁咳用嘴希吸取政液体榜，加诊样器握和吸涝头等粥必须掌经高政压处养理。

匀工作脖结束宏后必喷须立翼即对料工作查区进趁行清剪洁。搬本工吴作区跑的实城验台竟表面垃应可梢耐受溪诸如鼓次氯嫁酸钠番的化杰学物盟质的侍消毒乖清洁约作用躁。实内验台扰表面膛的紫洁外照菠射应责方便盟有效托。由锣于紫语外照铜射的蝇距离山和能鸭量对件去污放染的未效果继非常摄关键盼，因挂此可醉使用勉可移盖动紫问外灯恼(2记54现nm料波长膏)，免在工下作完偿成后蠢调至邮实验倚台上行60锁~9派0c甩m内龟照射嗓。由勒于扩滑增产贯物仅只几百变bp卫，对成紫外擦线损锅伤不部敏感使，因赚此紫壤外照间射扩普增片厌段必枪须延芬长照泥射时吓间，干最好捎是照爬射过吊夜。巾实验券室及值其设译备的贪使用睛必须顶有日把常记府录。

雀(二择)标看本制惹备区

通下述遭操作茧在该风区进雄行：医临床聋标本雨的保羽存，砌核酸饲(R座NA忌、D低NA液)提手取、液贮存俱及其丛加入粱至扩例增反夫应管辨和测闻定R前NA汉时c妨DN请A的陪合成湾。

延要正档确使造用加漠样器悠。由缎于在笔加样偿操作挤中可芦能会懂发生舌气溶重胶所消致的兔污染叫，所脂以应杂避免潜在本天区内撑不必益要的买走动数。可梳通过变在本趁区内扑设立堤正压丽条件残避免调从邻俩近区梯进入矛本区棵的气得溶胶敲污染绍。为犁避免以样本菠间的返交叉诊污染跑，加甘入待定测核深酸后配，必识须盖刺好含援反应范混合创液的浇反应言管。知对具直有潜尊在传网染危耕险性能的材泽料，铲必须类有明超确的志样本撇处理育和灭辩活程命序。劈

缩用过迟的加访样器思吸头蜘必须起放入芦专门迷的消祝毒(茂例如添含次充氯酸鞋钠溶镰液)玻容器您内。钻实验哀室桌斑椅表头面每滨次工往作后弓都要钉清洁危，实字验材碗料(历原始顿血标篇本、旧血清英标本虹、提宋取中款的标博本与腥试剂迈的混赏合液西等)玻如出毫现外洒溅，耽则必膀须分桃别处滩理并京作出喇记录储。

暖对实虹验台驴适当幕的紫佣外照患射(节25兄4n倘m波第长，虚与工袍作台伸面近帅距离璃)适陵合于塔灭活摸去污胀染。极可移恰动紫哗外线蹲管灯占可用僻来确伙保工丘作后叫对实枕验台悲面的嫌充分载照射梢。

搬样本仆处理穗对核与酸扩呆增有光很大网影响才，必艰须使倦用有硬效的戒核酸闹提取煎方法候，可诸在开邻展临的床标鹅本检德测前选对提陪取方暮法进牵行评拔价。

头用于沫RN楚A扩石增检饼测的步样本很制备撇好以功后，传应立戚即进都行c谱DN劣A合容成，些因为悉cD批NA底链较要RN享A稳扔定，栽保存槽相对伏容易塌。为互保证泽逆转品录反维应的丸需要盖，应绝在标播本制股备区销设置待一个象以上旅的温飞育装吵置。

恩cD点NA耍合成盐的理腊想温执度依泡所使护用的挑酶而钉定，接倾向浮于使区用一近步法选：即坛使用钓在扩喂增反伏应缓体冲液宿条件蚀下具洲有逆健转录岔活性废的热未稳定孩的D愁NA晶聚合凝酶进滥行逆凤转录钩，其害较c绕DN葱A合拢成后稻再开么盖以完调节似缓冲蹲液或即加入恋聚合个酶进稻行扩丸增发漏生污萝染的尾可能距性降客低。

节待测竟RN位A的尤cD旷NA躲拷贝椒须保匠存在袭标本股制备项区，娃不得拖在本诸区对繁样本冻进行细PC滚R扩被增。脉

候(三弟)扩遇增区

谋下述腐工作恐在本听区内天进行漫：D破NA亏或c芝DN戴A扩踩增。尸此外响，已棉制备堆的D捡NA觉模板粘和合社成的膏cD厘NA苏(来鸭自样纯本制良备区按)的秆加入墓和主删反应俩混合挎液(汁来自合试剂常贮存礼和制廉备区梳)制嘉备成锈反应获混合宣液等梦也可轻在本逼区内晓进行源。在画巢式我PC割R测尤定中条，通服常在丰第一联轮扩阻增后献必须就打开删反应伤管，普因此疯巢式在扩增检有较轿高的揪污染勇危险蔽性，禽第二仁次加闻样必罢须在筒本区朴内进规行。

蛇不能趋从本他区再姐进入真任何胡"上状游"躲区域鞭，可懂降低白本区技的气家压以田避免送气溶吊胶从房本区迟漏出欲。

精为避慈免气吩溶胶研所致结的污抄染，妄应尽旺量减倚少在当本区曾内的魔走动贩。如晓有加域样则墓应在尊超净亿台内园进行都。打毁开预搭处理宜过的采反应伍混合舌液时霜必须着防止妥液体城溅出并，尤旺其是恩在巢交式扩象增步嚷骤之捞间。紧一个市简单陵的方伟法是卧在打仅开反妙应管凭前快亚速离呀心数阳秒。刻可使肯用体颜积较苹小的搜离心誉机，福因其诸所占韵实验焦台面允小，宵易于傻用一杰只手梢操作宴，适甚合于巡大多耳数超乘净台遇。防申潮屏扶障如喊石蜡画油或子轻矿虾物油辈也具线有防纹污染她作用孝，但筋必须暖注意业的是僵，矿闪物油皱本身骄也可猜能成雅为一姜种持归续性董的污庙染源赴。用著过的桨加样厌器必哑须注借意清捡洁消垄毒。劝

可完成贵操作环及每甘天工德作后英都必皱须对检实验宅室台餐面进致行清柄洁和兰消毒壶，紫颠外照蛮射方匠法与正前面棒区域眨相同陵。如碌有溶柔液溅养出，碍必须阻处理斩并作出出记钞录。

散(四撤)扩榜增产铁物分晌析区

寺下述本操作扁在本快区内消进行敬：扩国增片图段的摇测定筒。

庸核酸恭扩增戏后产导物的哄分析车方法果多种望多样献，如浩膜上翠或微榨孔板母上探笨针杂冒交方谢法(广同位泄素标欧记或矩非同亿位素见标记膜)、碎琼脂叨糖凝挨胶电即泳、配聚丙鲜烯酰娱胺凝盈胶电按泳、念So批ut墨he造rn番转移胞、核衡酸测告序方乒法等绣。目裤前国后内的食商品弄试剂烦盒绝谦大部罪分均档采用故非同境位素筑标记坚的微区孔板梦上探安针杂专交方睁法，带即P灿CR狠-E定LI眯SA奥方法革，也扫有膜搭上探绕针杂具交方限法。

殃本区坦是最伐主要馆的扩午增产馅物污刑染来腥源，暂因此尤必须桥注意立避免垄通过爬本区货的物塑品及胖工作辨服将疮扩增膝产物员带出赠。在诊使用怜PC像R-移EL损IS弟A方郊法检嚷测扩绣增产驾物时燃，必膊须使湿用洗沉板机唯洗板悼，废千液必扯须收迁集至删1m理ol梁/L聋H闸C1西中，库并且宁不能隔在实托验室拴内倾赢倒，柜而应昌至远尿离P铃CR雹实验骂室的介地方慧弃掉迎。用自过的竖吸头惹也必闷须放鬼至1界mo悄l/骂L渠HC胶l中刷浸泡胞后再局放到贼垃圾饭袋中殿按程闷序处秆理，颈如焚疮烧。

骄由于络本区皆有可南能会银用到咳某些泪可致选基因插突变胡和有所毒物组质如得溴化柄乙锭置、丙暴烯酰海胺、壁甲醛揭或同腹位素景等，扇故应泡注意翅实验漠人员堂的安街全防琴护。

紫本区往的清抱洁消献毒和趴紫外被照射馅方法斤同前孟面区练域。希本区狂如采刮用负枯压条团件或朱减压抗情况拥下(坛如安吉装排季风扇功)可灶减少铃扩增杠产物两从本污区扩宏散至圆前面解区域签的可糖能性谜。雕二、段临床捎基因缝扩增袖检验调实验锁室质丽量保效证

悠临床牲基因挺扩增壳检验聋实验溜室质托量保基证涉古及到订整个定基因际扩增遇检验分的所爷有阶并段，军即测极定分风析前辩的标浆本采那集处局理、非测定扇中的腥核酸宁提取含、扩求增和论产物等分析慎以及很测定鸦后的印结果里报告灰等。

摩(一荒)标蒙本的服采集

蛮常用技于基另因扩罩增检被测的陶临床厕标本仗包括吗ED等TA塑或枸燕橼酸埋钠抗钻凝全钱血或错骨髓烤、血眠清或距血浆仁、痰为、脑舒脊液柿、尿圈及分盾泌物向等。见采血笔液等炕样本费时，霜应使肚用一呆次性所密闭逗容器瓣，如莫真空心采血徐管。娘当使摘用非汁密闭舌采样惧系统翁时，纽如尿钓、分捞泌物己和骨疑髓的贤采样泊，必旧须注哲意防烤止来宝自采寿样者袜的皮漆屑或宏分泌斩物的私污染讽。采阿样时统必须叛戴一判次性滴手套色。

臭玻璃程器皿干在使山用前棚应高透压处雀理，辰因为袖玻璃欣器皿挠常含柄有不贫易失睬活的致RN鼓A酶既。最晶好是炼热灭押菌，斑25倚0℃忽烘烤丑4小狼时以树上可逆使R销NA狗酶永定久性口失活谋。

禽全血震和骨傻髓标前本必麦须进踪行抗暖凝处汁理。毅ED衣TA腔和枸尺橼酸爆盐是蜘首选短的抗棚凝剂魔。不梅能使辨用肝浇素抗毛凝，绳因为权肝素狮是T述aq戒酶的膝强抑悔制剂袋，而谈且在诚其后矩的核奏酸提玻取步所骤中访很难涌去除较。

屋临床炮用于拨RN顽A(叮如H痰CV朽R猎NA余)扩虑增检刑测的呀血标昨本建毯议进嫌行抗赵凝处军理，买并尽同快(袄3小老时以随内)钞分离戏血浆剥，以氏避免布RN飘A的厨降解住。如亲未作魄抗凝屯处理冒，则须抽血舅后，蹄必须劳在1膛小时系内分计离血咸清。

前(二喉)标录本的锅稳定苦化处坐理

若用于限DN唱A扩附增检形测的棵标本防，采围集后双一般女不需香要特竿殊的训稳定危化处堂理，列但标堤本应籍及时头送至驰实验丝室。

酸由于眠RN脉A易竭受R宅NA倾酶的丹降解止，因隔此用狡于R披NA漏测定筒的标监本有什时必骡须进天行稳赛定化资处理片，如嫌流行晴病学疲调查鸡的现董场采虹样。虾异硫黄氰酸赠胍盐课(G嫌ua旧ni迈di垫ne魄t轻hi海oc坡ya吸na承te来,G网IT搞C)烫可使喝DN条A酶校和R浙NA饱酶立奶即失玻活，福因此妄在采欧集标耕本时隙，可正将标仿本材你料如杰血清仅或血快浆按汗1:常4的合比例朴加至找含有闸5m串ol驻/L户G柿IT粥C的禽试管肿中，省从而站使血野清(省浆)什中的傲RN帝A酶辩不可伤逆失佳活。东经上寿述稳贤定化强处理庄后，滔标本患一般逼不需蹲要冷男藏即途可邮息寄。保对于罗特定免的检玩测项卷目，旬上述侄稳定条化处锋理方糕法的服效果聋究竟注如何艺，要毅使用鄙相应氏的逆直转录宋PC榴R测毯定方妈法来洒评价育。

夜(三惧)标好本的胶运送

加标本卵采集乘后必妙须尽画快送问至实羡验室局。经沙过适碰当稳蠢定化扯处理忍的标五本可厦在常先温下内通过滚邮寄蔑运送敢。如蜘用于福DN付A扩滩增检凤测的近ED邮TA岭抗凝柄全血江标本邀及用梦于R酒NA奥扩增纺检测玉的经尽GI撞TC哨稳定旺化处与理的钟标本逗。通旬常在遗运送胸时，燃应采渴用不肆易破厦碎的棉容器秋装载渴标本拴。用晚于R孤NA枪检测锄的标财本，嫩如果洲未经滑稳定雁化处暗理，仁则必践须速裙冻后沈，放蓄在干疲冰中蜜运送循。

哀(四划)标紫本的催贮存

假临床贤体液弟标本抽如血震清/诚血浆词等可幸于-逐70喘℃下裳长时隙间贮默存。孝用于冒DN责A测窄定的灶已纯前化核腿酸样含本可罢在1道0m辈mo闻l/震L色Tr副is河-1拴m旺mo侨l/蛮L魔ED载TA饲缓冲效液(渐pH获7族.5哨-8椒.0兰)中席4℃唇保存封。用尿于R释NA型测定贫的已欺纯化德核酸水样本悲应在答缓冲宏液中淡-8锻0℃末或液派氮中迁贮存滥。用永乙醇检沉淀型的核狠酸样沙本贮饮存在仆-2截0℃雪即可挂。用串GI统TC推处理史的R数NA壶标本笛在室根温可钢保存苹7天紧。

盖(五雕)标英本的特处理宵(核德酸提傲取)

降标本茅处理吊即核塑酸提床取纯蚀化是仅决定各扩增满检测侮成败刷的关鸣键性渣步骤渗，在需使用粗商品落核酸腥提取滚试剂湿提取劣临床决标本钩中的冰核酸邻模板检前，拳应对迹其进永行充革分评笋价以侍验证写其提泛取的复有效树性。弦通常真，核友酸制壮备质艘量不态高是迫由于肿抑制目物去临除不床完全轰所致零，抑锐制物巩可能边来源棵于标上本本伸身(裳如血暑红素捎及其思前体鸡或降黄解产乞物)疫或核系酸提简取过盾程中普残留出的有印机溶殖剂(退如酚慎、氯万仿等掠)，割这些炊物质兰对其闲后的情Ta情q酶下扩增析反应类步骤胸具有欲强烈鬼的抑暗制作熄用，放从而夏影响听靶核醒酸的贱扩增中测定献。当铸标本情为痰虽时，谈则必童须先扮进行冶液化推处理店，再挂提取登核酸债。需悔注意翠的是悦，液贸化时爪不能扁加热艘，液卖化时孩间不等能过含长。逮此外怒，当苗靶核仓酸为变RN葱A时米，逆螺转录寇PC臭R测奇定失植败的书常见透原因招是标良本在银运送妻前未像经充丧分的满稳定骂化处引理及弄核酸擦提取赏试剂季的R绍NA黎酶的励污染涨。对寿于前索者，程要核用查测耀定分托析前裹的步脂骤，捏如果廊发现板有R苦NA陪降解碍的证鼻据，荒实验键室则虹应拒剑绝接观受标露本，隆要求闸重新叶采取缘标本除，并故对运凝送者无给以齿详细酿的指抱导。号对于识后者抚，建唯议使饼用高修质量铺的商遗品核模酸提垄取试料剂。

框(六辅)靶叔核酸戚的逆陷转录保(R泽T)源和扩颠增

面1、惹靶R培NA进的逆秃转录玩

尽cD随NA退合成柳为逆培转录悔PC检R中层的第骆一个新酶反哄应步或骤，棒所产阳生的蛙cD命NA蚁为靶累RN当A的辫反向扯互补枕链，印为后洽面扩渠增的蜂模板锯。下帮述因絮素通无常影速响c悟DN朝A合针成的式效率抖：(饮1)罗逆转铜录效庸率的婚降低宝或完征全缺钓乏。贪其可忍能的昼原因傻有逆绣转录驴酶质蛙量不卵高、碑试剂见降解盏变质玩或加辨样错鲁误等舒；(盲2)变用于药逆转笨录的寨标本伯中存蒜在逆益转录英或T叼aq界酶的械抑制床物(避如酚凡、氯木仿、葵血红浩素等轧)；忠(3素)R状NA状酶的腾存在绞导致躺RN登A的弯降解姑。

校2、红核酸袭的扩额增

站有多检种因淘素可棉引起阵核酸屯扩增政检测淹的假愚阳性痛或假向阴性振结果照，如绸扩增执靶核命酸中砍抑制年剂存度在、理Ta暑q酶厚失活用、退迈火温连度不截对、薄Mg雀++晌浓度疤不佳件、患吹者标分本或载试剂化受污讨染等备。扩缸增仪辣孔中创热传谎导的丢均一匹性极使为重诚要，压必须星定期旗对扩费增仪矛的温撤度控液制和胡加热淡模块恨中热推传导喉的一夹致性卵进行协检查羽，以孙避免煌假阴滩性结妇果。

剧(七与)污盯染

虽在实语际工削作中验，常忽见有堂以下泽几种鼠污染遇类型爹：扩萌增片婶段的俘污染胶(产泼物污尺染)露；天肤然基牙因组誓DN榜A的丑污染输、试土剂污苦染(崇贮存狭液或传工作答液)革以及漆标本节间交给叉污宰染(岸如气猜溶胶楼从一篮个阳问性标辨本扩润散到手原本局阴性意的标膏本)楼。临冻床基蚁因扩朝增检信验实榜验室表中污蹦染的元最主筝要来窗源是条扩增枝产物润的污损染。

掉由于功一旦舞发生处污染闻后，息再围息绕实惹验室永来寻农找污垒染源榜不仅虚耗时元而且旗还很减繁琐滥，所光以防构止污藏染重汪在预讽防。声但如粗果发说生了要污染营，实灯验就挎必须是停止裳，直隶到发痰现了稠污染寸源为夏止，插并且妈实验升结果肠必须缓作废绝。

拢1、锄测定篮分析遇前的聪污染添源

扣测定吴分析木前实鲜验材洗料的泰污染潮主要徒来自培非病鸦人标征本来嗽源的研核酸网。

毕2、袭测定密分析进阶段锄的污秀染源

材通常浓，测捞定分候析阶舒段的脚每一瑞步都迎可能盾发生档对样渡本的晕污染洪。反敲应混庭合液训的任帽何成毙分及第核酸忠的制赚备和兄反应维建立描阶段副所涉芦及到私的实赔验设摘备的佩任何泊部位愈都是滚可能岸的污码染源萌。如俘受污静染的秧试剂敏(例滴如牛班血清裂白蛋搅白，阔明胶外或矿碎物油蔬)、领商品火酶制东剂、份消耗外品(略如反倒应管换，吸芬头)甘和实炸验设奏备(拾如加雄样器富、离灾心机明)等诸。

袭在前净面三锦个工园作区份中，嗓不当蛋的实答验操扔作会穿引起家所使糠用的惭试剂芹、消诸耗品辆或实顾验设窑备的冤污染堪。而姨在产蚊物分绩析区却，当端吸取窄扩增硬产物侍用于浊检测巾时，议非常荐容易琴引起耻污染拦，因洒此必涝须制拐定标锅准操渐作程鼻序(涉SO纵P)爬，并喂严格仰执行猛。

进3、右污染汤的避抄免

眉要避窝免污辉染，棉首先制应是册预防伴而不管是排扩除污蓝染，孩前面刑所述贝对工笛作区枕的严潮格划帝分的辰目的蚕即是疾为了寇预防采污染节。

米为避乌免以嘴前测捕定中玻所产态生的朽扩增鸦产物移的污投染，卵可设匆法将增其破墨坏掉脖。如你在扩列增反糖应中减用d艇UT箩P取务代部婚分d爱TT忠P，沟使得俩产生密的特能异扩厦增片油段含卸有尿烘嘧啶裂，这惨样扩狱增前脆在反求应混呆合液悦中加撒入尿棚嘧啶涝糖苷蜂酶(宰UN东G)爹，可耍破坏饮来自摘以前具测定今的扩盯增产牙物，蓬从而精避免统其对恩以后赌要进掩行的与扩增布测定帐的污钓染。冬另外熔一种危方法捡是持承续的土长波争紫外选灯照不射，餐通过摸异补惑骨脂内素光拆化学苏产生仿DN懂A加鬼合物就，由貌于D丢NA逃加合陕物对循扩增购没有壮反应蚀但又黑不妨领碍P免CR皱后杂跌交过捏程，据所以妈这种痰方法还也能致防止糊污染半。

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挡4、钳去除颂污染阀的措城施

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