甾体激素类药物的分析药物分析

基本要求1．掌握甾体结构类药物的结构特点与分析方法之间的关系。2．掌握甾体类药物的鉴别原理与方法。3．掌握甾体类药物的含量原理与方法。4．熟悉甾体类药物杂质检查的方法。返回本文档共67页；当前第1页；编辑于星期一\17点50分基本结构：环戊烷骈多氢菲ABCD12345678910111213141516171819概述本文档共67页；当前第2页；编辑于星期一\17点50分分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素本文档共67页；当前第3页；编辑于星期一\17点50分肾上腺皮质激素氢化可的松本文档共67页；当前第4页；编辑于星期一\17点50分肾上腺皮质激素醋酸地塞米松本文档共67页；当前第5页；编辑于星期一\17点50分肾上腺皮质激素曲安息龙本文档共67页；当前第6页；编辑于星期一\17点50分肾上腺皮质激素地塞米松磷酸钠本文档共67页；当前第7页；编辑于星期一\17点50分雄性激素甲睾酮本文档共67页；当前第8页；编辑于星期一\17点50分雄性激素丙酸睾酮本文档共67页；当前第9页；编辑于星期一\17点50分蛋白同化激素苯丙酸诺龙本文档共67页；当前第10页；编辑于星期一\17点50分孕激素黄体酮本文档共67页；当前第11页；编辑于星期一\17点50分孕激素醋酸甲地孕酮本文档共67页；当前第12页；编辑于星期一\17点50分雌性激素炔雌醇本文档共67页；当前第13页；编辑于星期一\17点50分雌性激素雌二醇本文档共67页；当前第14页；编辑于星期一\17点50分炔诺酮此外本文档共67页；当前第15页；编辑于星期一\17点50分炔诺孕酮返回本文档共67页；当前第16页；编辑于星期一\17点50分一、结构与性质

1.肾上腺皮质激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17

–

α–醇酮基还原性本文档共67页；当前第17页；编辑于星期一\17点50分2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17–

β–羟基可成酯本文档共67页；当前第18页；编辑于星期一\17点50分3.孕激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应C17–甲酮基与亚硝基铁氰化纳反应本文档共67页；当前第19页；编辑于星期一\17点50分4.雌性激素主要活性基团性质A环为3–OH苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应C17–乙炔基与AgNO3反应C17–羟基可成酯返回本文档共67页；当前第20页；编辑于星期一\17点50分二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应甾体激素类药物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl（母核）本文档共67页；当前第21页；编辑于星期一\17点50分与硫酸显色反应

显色荧光加水稀释泼尼松龙深红

絮状↓灰泼尼松橙

黄→蓝绿炔雌醚橙红

黄绿

↓红色

炔雌醇橙红

黄绿

絮状↓玫红醋酸可的松黄或微褪色并澄

带橙清本文档共67页；当前第22页；编辑于星期一\17点50分(二)官能团的反应肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐OHˉ1、C17

–

α–醇酮基还原性呈色反应此外还有斐林试液、多伦试液本文档共67页；当前第23页；编辑于星期一\17点50分甾酮类激素药物呈色羰基试剂2.C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼本文档共67页；当前第24页；编辑于星期一\17点50分具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色亚硝基铁氰化纳间二硝基酚芳香醛3.甲酮基本文档共67页；当前第25页；编辑于星期一\17点50分黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化纳其他甾体淡橙色不显色本文档共67页；当前第26页；编辑于星期一\17点50分有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ4.有机卤素茜素氟蓝

硝酸亚铈硝酸—硝酸银AgCl↓呈色

本文档共67页；当前第27页；编辑于星期一\17点50分雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸5.酚羟基本文档共67页；当前第28页；编辑于星期一\17点50分含炔基的甾体激素银盐沉淀硝酸银6.乙炔基的沉淀反应↓本文档共67页；当前第29页；编辑于星期一\17点50分

(三)制备衍生物测定m.p.盐酸氨基脲苯丙酸诺龙△缩氨基脲衍生物1.缩氨基脲的生成m.p.约180℃（分解）2.酯的水解丙酸睾酮碱性条件睾酮m.p.为150℃~156℃本文档共67页；当前第30页；编辑于星期一\17点50分△４-3-酮、苯环、其他共轭结构（四）UV法1.结构依据240nm左右280nm左右本文档共67页；当前第31页；编辑于星期一\17点50分2.示例曲安西龙丙酸倍氯米松溶剂甲醇乙醇20μg/ml浓度20μg/ml结果判断在238nm处有最大吸收在239nm处有最大吸收，A为0.57～0.60，在239nm与263nm处的吸收度比值为2.25～2.45本文档共67页；当前第32页；编辑于星期一\17点50分结构特征：酚羟基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇（五）IR法本文档共67页；当前第33页；编辑于星期一\17点50分1505cm-1ν3505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1ν酚羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨架振动本文档共67页；当前第34页；编辑于星期一\17点50分黄体酮结构特征：△４-3-酮、C17-酮基本文档共67页；当前第35页；编辑于星期一\17点50分1700cm-1C=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-1C-H双键本文档共67页；当前第36页；编辑于星期一\17点50分（七）TLC法

主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别

方法：对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。本文档共67页；当前第37页；编辑于星期一\17点50分（八）HPLC法

主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）

方法：对照品法要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。返回本文档共67页；当前第38页；编辑于星期一\17点50分三、特殊杂质检查（一）其他甾体的检查

检查意义：其他甾体与甾体激素药物结构相似，也有一定的药理作用而又互不相同.

本文档共67页；当前第39页；编辑于星期一\17点50分检查方法（具有一定分离能力）TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）本文档共67页；当前第40页；编辑于星期一\17点50分（1）TLC法（高低浓度对比法）

判定方法：

规定杂质斑点数目

规定杂质斑点颜色本文档共67页；当前第41页；编辑于星期一\17点50分例：氢化可的松中其他甾体的检查供试液：本品+氯仿-甲醇（9：1）浓度：3.0mg/ml对照液：供试液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）60μg/ml层析：供试液点样、展开、斑点检出。

对照液判断：供试液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。本文档共67页；当前第42页；编辑于星期一\17点50分（2）HPLC法（主成分自身对照法）判定方法：

规定杂质峰数目规定杂质峰面积本文档共67页；当前第43页；编辑于星期一\17点50分硒的检查（二）来源合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢有毒方法药物氧瓶燃烧二氨基萘比色法测定本文档共67页；当前第44页；编辑于星期一\17点50分（三）有机溶剂残留量的检查（灵敏度法）甲醇不得出峰检测限=3.1ng丙酮≤5.0%内标法+校正因子以地塞米松磷酸钠为例GC法本文档共67页；当前第45页；编辑于星期一\17点50分地塞米松磷酸钠检查甲醇和丙酮精密称取本品0.16g，置10ml量瓶中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至刻度，作为供试液；另精密量取甲醇10μl(≈7.9mg)与丙酮100μl(≈79mg)置100ml量瓶中，精密加内标溶液20ml，加水至刻度，作为对照液。照气相色谱法测定，含丙酮不得过5.0%，并不得出现甲醇峰。本文档共67页；当前第46页；编辑于星期一\17点50分（二）游离磷酸盐的检查地塞米松磷酸钠对照品比色法供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸钼蓝：740nm对照液：同上本文档共67页；当前第47页；编辑于星期一\17点50分（对照液0.0035%KH2PO4）返回本文档共67页；当前第48页；编辑于星期一\17点50分（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多内标法）（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）四、含量测定测定对象：甾体激素类药物的原料和制剂。本文档共67页；当前第49页；编辑于星期一\17点50分示例：黄体酮的含量测定

色谱条件：固定相ODS，流动相甲醇-水（65:35），检测波长254nm，内标物己烯雌酚系统适用性试验：n>1000，R符合规定。

本文档共67页；当前第50页；编辑于星期一\17点50分测定样品：黄体酮原料、注射液。

定量方法：内标法本文档共67页；当前第51页；编辑于星期一\17点50分（二）UV法△４-3-酮240nm（±）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素、口服避孕药苯环280nm（±）雌激素本文档共67页；当前第52页；编辑于星期一\17点50分示例：醋酸地塞米松片的含量测定（1）配制供试液

（2）测定：240nm

（3）计算

本文档共67页；当前第53页；编辑于星期一\17点50分肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3－酮基（1）原理异烟腙（黄）酮基异烟肼-3CHCl（缩合）1.异烟肼比色法（三）比色法本文档共67页；当前第54页；编辑于星期一\17点50分异烟腙（黄色）本文档共67页；当前第55页；编辑于星期一\17点50分（2）方法对照品法55℃异烟肼挥去乙醇对照液供试液A暗45′本文档共67页；当前第56页；编辑于星期一\17点50分（3）讨论反应速度（反应专属性）A.C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反应反应专属性C3－酮基本文档共67页；当前第57页；编辑于星期一\17点50分B.溶剂的选择异烟肼盐酸盐→甲醇、乙醇无水甲醇无水乙醇本文档共67页；当前第58页；编辑于星期一\17点50分C.水分、温度、O2与光线的影响含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓不挥发溶剂、不吸收水分时→O2与光线无影响t℃↑→ν↑本文档共67页；当前第59页；编辑于星期一\17点50分D.酸的种类和浓度及异烟肼的浓度酸:异烟肼