大豆分子育种

1大豆分子育种摘要:不同基因型的大豆子叶节在添加适宜BA的MS培养基上培养,可从子叶节诱导出高频丛生芽,并获得大量再生植株.通过农杆菌介导法,将深黄被孢霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因导入到栽培大豆吉林43和黑农37品种中.经过在含500mg鯨卡那霉素的筛选培养基中连续筛选,获得一批转基因植株.经PCR检测和DNA分子杂交分析,初步证明外源基因已导入并整合到大豆基因组中.本文重点阐述了组培再生系统和基因转化系统的内在联系和不同点.——卜云萍，李明春，胡国武等，大豆子叶节组培再生系统与农杆菌介导的基因转化系统的比拟研究，南开大学学报(自然科学版)，2003，36〔1〕：103-105蛮摘要普：用挂R慨AP孔D群标记殿方法殿对来者自中涌国、鸡日本光、韩敌国、膛不丹但、尼宽泊尔碗、越岛南樱6郊费国僻1卡63射现份小无豆种炮质资脚源病D俗NA摩娱的遗吨传多丙样性创进行毫检测斤。从鞋2额7勺个引呼物共嫁检测呈到光2裙85贴拍条带须，有贩2封61栗汉条具探多态用性〔拉占籍9绞2.咱98确%尤〕，蔑其中役野生策型多耕态性喝带谱刚占胳8遮5.省82舰%处，栽柄培型爬次之疼为秒8跳3.箭52疼%汉，半汉野生凤型为指8镰0.茧46刊%趋，三然类型跪小豆丈都有站其自易身特尘征带泄；遗软传离烦散度摸大小棵顺序级是：植野生撞型＞夏半野例生型横＞栽易培型遥，其消遗传睬分化怨系数薪大小苦顺序离为：需野生徐型＜迅半野欣生型艳＜栽式培型虑；从超分化桐系数冬差异坑看，妖半野肃生型懒小豆辫更接记近野吼生型肉小豆面；从寿相似哨系数绒平均够值来即看，参半野勺生型出小豆勿材料焰之间些亲缘锹关系犯较近驳，而刊处在画进化西两极弯的野晃生型蜓材料抹之间燥、栽锅培型枣材料预之间腰亲缘幅关系稻都较临远；漏来自炭我国块西南型以及古日本离南部匙两地伯区的逮小豆唯材料磨遗传购离散帮度较速大，逝遗传稳分化欺系数出、相必似系命数平茶均值魄较低殊。聚畏类分翅析结活果表疏明，妨16惩3炭个小勺豆材沿料以侨遗传诱相似脊系数沾0状.3盛2违为截视值，垫可分紫为队8记占大类兔，归魂类有愤较明加显的华地理价相关滥性及坛遗传杯类型也的趋热同性腾。漫――退金文诊林，达文自呀翔，米濮绍胃京等躺，应徒用御凑ＲＡ刘ＰＤ纱制分析半小豆栏种质纪资源显遗传乳多样叮性及梅遗传巴演化箭趋势昌，中况国农扒业科抗学伞2君00默5,疾38蜓(2丘):成24广1-嫂24针9洁摘要拜本滨文研博究A丹FL应P技磨术在病大豆幅上的雅应用零,在劲改良究大豆赔种子追DN饼A提遥取方臣法的偿根底晓上,惹比拟跪同位闭素与匠银染悠检测应方法权的效曲果,坝筛选摸适宜差于大忌豆A绑FL扛P分怖析的队酶切此和引循物组水合,营从而林建立些了适焦用于去大豆璃指纹善图谱拳快速渔鉴定晴的A健FL国P操为作程随序,岭并对隔我国凳野生既大豆斤和栽辱培大四豆代醒表性奉材料糟进行俯了A幕FL敬P分灰析。杜近年链来,免大豆嫩种质事资源奔研究肆中应数用的蚂分子毁标记皇大体慎可以施分为堵两大茅类。耳一类铃是以舟分子乐杂交言为基颜础的藏RF竟LP妇技术答,另膝一类袍是以湿PC绒R反添应为网根底蜘的各首种D阵NA焦分子足标记蕉,包债括有餐DA裳F、纠AP惑-P习CR辽、R霸AP拨D、丽SS租R、盾AF战LP救等技版术。创作为经一种校有效欠的分勾子标坊记,绑RF青LP役最先潮被应掉用到促大豆籍遗传俘研究杠中(婚Ap灾uy惰a等轿19妖88恨)[余1]崖。但除是从贝建立殖品种肃指纹侄图谱冷来看豪,R幅FL呈P技呈术单岂个探弦针信婚息量踢少,民鉴别兄效率语不高嗽[2饶]。忙RA童PD枕技术斗以其溪快速建简单虚的优亭点被扁用来妨鉴别唯大豆演种质差[3较,4访],宫但由伤于所列采用搭引物咽Tm阔值较荣低,喊扩增开结果院易受源外界颗条件遮的影言响。惰SS早R标妙记在园大豆示种质献研究谨中应令用也阵较多算[5忙,6摆],讯其多肢态性晓远远身高于量RF风LP欧标记菊,但村一次鞋性检严测的编位点舟也有壶限。欠因此毫,发驻展一吧种既就能高铅度揭贺示遗航传变馒异多辟样性蹄,又廊相对都操作察简单简的分揉子标司记,钓对于笑大豆烤指纹泄图谱盾研究剃具有药重要铸的意脚义。饰分子唐标记易AF房LP伸(a线mp惯li烟fi职ed微f哪ra循gm灾en删t座le兔ng零th槽p乳ol质ym俱or河ph周is雀m)怠是由循Za袋be宽au暖和V阴os汁(1月99忧3)萌创造羞的[富7,荷8]陵。它穿基于举对基滑因组全DN扑A进曾行双悼酶切哭,片司段末赠端连慰接上僵一个覆接头艺,经四一个楼与接宽头和牛邻接咽酶切漂位点代相匹帽配的劈引物样进行牌PC谜R选售择性李扩增屈,而炕后用吵变性钳聚丙尚烯酰蒙胺凝镜胶分削离扩盯增产疗物。拾这种督方法唐结合烤了R徒FL职P可吨靠性萝和P霉CR腔高效忘性的梨优点丛,已酱经成按功地辣应用活于大疮豆遗及传图北谱构挤建与独遗传虚多样鱼性研吹究中廊[9朗,1赤0,涂11趣]。缎但是秆该方挨法受密专利馒保护貌,分睬析试徒剂盒顶十分燃昂贵宰,还伴需要返同位居素操徐作,娱用叶成片提誓取D脾NA千手续锅较多猴,也富影响街到分瓦析的侨效率跑,因怨此有免必要趣建立谊适用静于大瞒豆的坟优化足操作障程序服。埋本研王究旨珍在探会索大积豆种课子提卵取D评NA闪并用区于A挖FL玻P分欺析的大可能己性,幸比拟局银染轧与同尤位素奋技术赌在检烟测效门率上情的相奇对效至果,给筛选沟适用缝于大块豆的狭酶切扯和引耗物组点合,剂完善侍大豆红指纹字分析赔的A破FL伟P技栋术,诱为大家豆材赵料真乏实性介和纯沉度检每验、驳种质付亲缘掌关系颗的研毛究提损供方懂法。霉1.辱2.书1味DN钱A的装提取趟关于槐大豆阁DN培A的贪提取脚,前使人多远采用竿叶片政提取仙的方夺法。萍Mc糠Do径na养ld汽等(满19坡94寇)[煌12旅]对硬DN昼A提颠取法歌进行饥了改广进,饱从玉艇米、矛大豆纳、棉醋花等荒种子熔中提盯出质漏量较暴高的街DN浴A。金但是姜,作依者在滑用该影法提确取大添豆样喂品,察尤其妻野生泼大豆齐时,读由于结色素库及酚辞类、宁醌类厘等多资糖类纤杂质金较多密,得廊到的睛DN系A呈凶淡红赚、红帮色,悲十分拍粘稠鉴,溶戚解困旧难,蹦26纹0/冰28逆0比酱值较门低,秧而且托降解哗严重越,这亚样会萍影响饱DN国A样路品的躲酶切够效果绞。因稍此,海本研煤究在料Mc菠Do雀na塞ld脱等基懂础上卷作了酬改良间,详跃见结哑果部宁分。减大豆凶种子浅DN傲A提猾取方辅法的魄改良救本研锻究在不Mc沙Do测na侄ld唐等(并19拌94娘)[均12牌]提婚取D播NA献方法学的基谁础上裳,作招了以脆下改爹进:必栽培女大豆厘取半刻粒或淹单粒真种子绵,野享生大掏豆可押取1碗-2沈粒种茶子,起以确梯保D游NA薪样品虫的纯丙度考取干征种子炮,无牢须在坡液氮沟条件喜下研皂磨,胀即可灰保证裂DN扒A的蠢完整亏性；这尽可洗能除顺尽种腹皮,悄减少泻种皮谦中所薪含杂叼质对味DN哈A质怒量的冈影响自提高蜓SD驶S提甚取液湾的浓国度,丈由1票～2蝇%提酷高到含4%本,以餐增加煎DN晕A产绞量；贤第一狐次离合心采辆用1写0,哭00牢0转色/秒卧,以破后离身心速今度降质为3反00伯0转厅/秒脱,以删防止忍DN裂A的换降解稼；具参加铁高浓搁度(狼3M猛)的雨盐离村子(示KA阔C)明,以苹去除浮多糖护类及菊色素膊等杂高质,逝对于滑野生巾大豆花,还距参加责PV桶P或围巯基斤乙醇恼,以席防止疫酚类芒、醌陡类物板质对阶DN栏A的伶降解坑；碑增加务酚/佩氯仿桥抽提蓄步骤旁,而垄后再坟用氯逃仿进剪一步养抽提存,以昨除去狐杂质灭和多隔余的炼酚；梨加0鞠.2绍μ笛l的槽10沫μ泉g/务μ括lR敲Na径se齐A,黎在4丘℃盼下过波夜,短以除良去R沃NA幻,并得进一凝步抽碎提,铺防止毛RN炼A对屈酶切祸的影烈响。同本研幸究单恳粒野会生大困豆提似取的琴DN语A量挠约为轧3-献20龙μ甘g,伐单粒尼栽培般大豆飞提取追的D会NA线量约垄为1屯0-船20杰0职μ页g,塞而一胡次预例扩增慧仅需丹DN艰A1桂00窑ng近左右锣,所委以完拆全满壶足测习定所财需。秋与叶届片提会取方瓣法相浅比拟源,直姻接从盟种子短中提副取D挥NA医,不可需发宿芽、泼光照进培养化、液看氮研然磨等关过程女,可气以提楼高种吴子的摊检验蚂效率潜。蛾银染嘉法和猪同位铃素法员检测录的总还带数辨相近武,但片同位架素法舞多态槐性条旨带、环多态察性百剂分率勿较高脑,而级银染易法平陈均遗胖传多萝样度守(H近'a穴v)鸣和有谱效等妻位基愁因的底数目祥和略亲高于毁同位率素法黄。鉴痛于银盾染法赠结果捞与同胞位素教根本它相似插,可渔以避陈免放平射性瑞同位禽素使吃用,忽而且拴经济烫快速符,因替而银递染法诞AF帮LP宿是可剂以广锅泛应钥用的霸。妙不同浑的酶登切组猎合和酬引物哨组合驳,扩虚增结阴果不邮相同恒,本钟实验熊通过停比拟贴不同尚酶切赞组合焦,发粪现E剂co棚R件-M比se叔酶答切时字较容编易找怖到多屡态性付引物挑组合禾,而宾且具挪有较饺高的厚多态兔性。蚊本研牲究还姥证实劲“滑3+廉3屑〞正引物望组合渔用于枪大豆摄AF端LP冠分析昨较为沃理想怠,同坑时找街到了三多对来理想苗的引畅物组伟合,倚可以洲用于斥大豆磁种质罢的指劫纹分职析研巴究。杰通常沈AF姿LP良检测纠需要题使用口放射辩性同比位素翅标记同,而祝且,小一般牙认为斧,同妄位素败法比萍银染催法更列灵敏捆,尤喂其使球用3老3P棉标记展效果你较好窝[1盟4]睁。本浸研究筹证实究,用厕同位锯素3拢3P彩检测寒所得辩到的指带型昂上下饱较为喂均匀酿,分胡辨率师较高就;银罩染法欣带型毅较粗徐,对伶不同出分子糖量的单条带坑染色贼深浅吨不甚百一致册,容育易出败现分版辨率湿上高胖下低晌的情职况,温因而摧需要颈更多吗的技辫巧。瞒本研蠢究通幼过比默较还无证实弟,银刮染法酷与同堤位素容法除巡在一男些弱津带判向别上骨有一糖定出亦入外暑,所业得到暗的带阔型基辣本一拴致。趴在实乖际应腔用中纤,不腊同方以法的致检测突效率株是与走研究份者所陕掌握监的技稼术水荷平和已熟练推程度考紧密箭联系比的。谣只要窜充分兽掌握涌各个铲技术承环节情,银线染法胡可以奔在避岭免放岂射性所污染柴、降旦低成贺本的气同时懂,同矩样得错到分蜓辨率逃较高分的指糟纹图导谱。泉——兄田清抱震，男盖钧半镒，光喻德腰跃，阳大豆屋DN各A扩须增片赏段长邀度多午态性舱(A陶FL船P)墙研究勿，大痕豆唐科笛学蜘，2怒00钟0,持19仗(3南)：巨21阴0-数21裁7择摘要壳:利父用大箱豆栽梦培品早种科誉丰1愚号和置南农狂11没38弊-2荷杂交君得到边的重蛛组近报交系池ＮＪ肤ＲＩ泳ＫＹ档,通塌过Ｒ例ＦＬ验Ｐ、鸣ＳＳ垃Ｒ、欠ＲＡ吧ＰＤ由和Ａ感ＦＬ心Ｐ4执种分帅子标楚记的焦遗传患连锁幻分析课,构致建了忽包含妨24浙个连磨锁群装、由真79圈2个歇遗传富标记机组成扛的大简豆较箱高密素度连均锁图药谱,同该图膏谱覆必盖2胳32宋0.济7ｃ运Ｍ,美平均蓝图距冬2.督9ｃ留Ｍ。药ＳＳ轨Ｒ标助记的需多态民性较屿高,橡在基脂因组毛中的干位置妖相对逼稳定臂,可笋以作校为锚威定标钻记,鸽有利乔于连警锁群崭的归拔并和踏不同震图谱避的比敬较整渔合;矿而Ａ旗ＦＬ勒Ｐ标辨记对厌于增刮加图堂谱密怎度效陕率较辱高,脱但其牺容易幼出现绕聚集鲜现象搁,从汇而造毁成连白锁群注上有水很大嗓的空虫隙(走ｇａ愉ｐ)杠。另连外,柜在连趣锁群艳中有湿21烘.7假%的希分子狱标记绒出现稀偏分汉离。论该图蜂谱为育基因消定位面、比钱较基番因组统学和朋重要极农艺分性状身的Ｑ音ＴＬ厨定位狸等研皇究打广下了携根底复。哀分子还标记棍连锁栗图为陡进行鸡植物弄基因割组的末结构同分析叶和比辛较提堪供了竞有力纱的工叔具。残较高虚密度急的分站子图登谱已金有效鞭地应齿用于歌数量斩性状销基因售定位竞(Ｑ艰ＴＬ唉)、筹图位邪克隆六基因戚、比瞎较基柔因组草学研葛究和僵分子叛标记搏辅助界育种胁等研弦究中杏。因液此,欲对于袭具有腊重要刷经济酷价值河并得秩到广悠泛研抄究的那大豆雨作物什来说抬,发龟展一减张高菠密度宫的遗洋传连很锁图饺将具狱有重牧大意亿义。负遗传遥作图俯中最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