酶免疫分析仪-2015-11

23六月20231临床免疫检验仪器23六月20232免疫分析法：以抗原抗体相互结合的免疫学反应作为基础的分析法称为免疫分析法。免疫分析法标记免疫分析非标记免疫分析酶免疫分析发光免疫分析放射免疫分析免疫金(银)标记技术免疫浊度分析技术有无标记物荧光免疫分析23六月20233第一节酶免疫分析仪第二节发光免疫分析仪第三节放射免疫分析仪第四节免疫浊度分析仪第五节时间分辨荧光免疫分析仪第十一

章第一节酶免疫分析仪23六月20235酶免疫分析法

enzymeimmunoassay，EIA概念－－是用酶标记的抗体（或抗原）用于免疫学反应，并以相应底物被酶分解的显色反应，用来对样品中的抗原（或抗体）进行定性分析、定位分析和鉴定；亦可根据酶催化底物显色的深浅，测定样品中待测抗原或抗体的含量。623六月2023酶免疫分析法根据抗原抗体反应后是否需要分离结合与游离（未结合）的酶标记物，分类如下：

均相：常用于小分子化合物

homogeneousenzymeimmunoassay

非均相：

heterogeneous

enzymeimmunoassay

1.双抗体夹心法

2.间接法

3.竞争法4.IgM抗体捕获法

5.双抗原夹心法

ELISA液相酶免疫测定723六月2023ELISAEnzymeLinkedImmunoSorbent

Assay（酶联免疫吸附测定）是一种以微孔板为载体的固相酶免疫测定。常见类型：1.双抗体夹心法2.间接法

3.竞争法4.IgM抗体捕获法5.双抗原夹心法

823六月202396孔酶标板酶标板配套试剂ELISA试剂

8孔酶标条

一般为聚乙烯材料做成孔底吸附了相应的抗原或者抗体923六月2023酶标记抗体(Conjugate):酶标记的针对待测抗原的另一位点的特异性抗体（酶结合物）YYE检测大分子抗原的双抗体夹心法酶标板抗体:

针对待测抗原某一位点的特异性抗体包被到固相载体聚苯乙烯孔底底物（Substrate）：本身无色，酶可以催化其显色待测样本中的抗原1.包被有相应抗体的酶标板。2.加入样本，如样品中含有抗原，则结合为抗原抗体复合物。4.再加入酶标记抗体，则结合为抗体-抗原-酶标记抗体复合物。酶抗体待测抗原抗体酶标抗体6.加入底物8.加入终止液终止反应7.酶催化底物显色5.洗板洗去游离物。夹心法测抗原或抗体此法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原或抗体，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG,HBsAb等。但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原或抗体，因其不能形成两位点夹心。9.酶标仪读数，计算。3.洗板洗去游离物。1123六月20231223六月2023酶免疫分析仪的类型、

工作原理及基本结构1.微孔板固相酶免疫检测仪2.管式固相酶免疫测定仪器3.小珠固相酶免疫测定仪器4.磁微粒固相酶免疫测定仪器等微孔板固相酶免疫检测仪1.酶标仪2.全自动化酶免疫分析系统1.酶标仪1523六月2023我们把采用酶标的方法测定物质含量的设备称为酶标仪。一般简单的酶标仪只有读数、数据处理的功能。（全自动化酶免疫分析系统集加样品、加试剂、孵育、震荡、洗板、读数、数据处理7大功能于一体。）需要了解的基本概念返回节目录1623六月2023酶标仪的作用读取吸光度判断阴阳性画标准曲线，计算浓度1723六月2023酶标仪的好处避免肉眼判断和人工计算的错误保留原始数据实验自动化的要求(如体检HIV初筛实验室)透镜卤素灯泡Chopper切光器滤光片微孔杯光电转换器光纤溶液对光吸收的Lambert－Beer定律A=log10

T=εCL(A吸光度,T透光率,ε对于吸收物质及波长是一个常数，称为吸光系数

,C为浓度,L为厚度)

光路读数原理

1923六月20232023六月2023

酶标仪工作原理框图光源灯微孔板光电检测器模拟信号处理微机单元显示器键盘打印机X方向驱动机构Y方向驱动机构滤光片控制电路2123六月2023临界值：（Cut-Offvalue）用于阴阳性的判断以此作为判断结果阳性或阴性的标准。定性结果判断一般为NC×2.1(NC<0.05以0.05计算）夹心法的CutOff值:一般为NC×0.5或(NC+PC)/2等

竞争法的CutOff值:需设置空白孔(BLANK)(只加入底物和终止液,空白消零去本底)

阴性对照(NC),阳性对照(PC),临界值质控(QC)等判断公式：>NC×2.1判断公式：<

NC×0.5

2223六月2023酶标仪工作原理总结酶免疫分析法：是用酶标记的抗体（或抗原）用于免疫学反应，根据酶催化底物显色的深浅，测定样品中待测抗原或抗体的含量。酶标仪可用比色法来分析抗原或抗体的含量，依照比色原理进行工作。以微孔板固相酶免疫测定仪为例。光源灯发出的光线经过滤光片或单色器后成为一束单色光。该单色光经过塑料微孔板中的待比色溶液到达光电检测器，把光信号的强弱转变成电信号的大小。经前置放大、对数放大、模数转换等模拟信号处理后，送入微处理器进行数据处理和计算。从而达到判断出抗原或抗体的有无或计算含量的目的。2323六月2023

680酶标仪中/英文操作界面任选可测波长范围400-750nm滤光片位置:８个。标配４个常用波长450nm490nm570nm630nm即可进行单波长测定，又可进行双波长测定2423六月2023680酶标仪适用板型：平底，Ｕ型底，Ｖ型底．读板速度：快速读板模式单波长6秒；双波长10秒逐步读板模式单波长15秒；双波长30秒有自动振板功能2523六月2023BIO-RADModel680芬兰雷勃MK3CLINBIO128BIO-TEKELX-800AnthosZenyth340TECANSUNRISE产地日本上海金桥奥地利美国奥地利奥地利操作界面中/英文（宽屏）中文英文（必需连电脑）英文英文英文滤光片4块（8个位置）4块3块

4块(5个位置)

3块4块吸光度范围波长范围0.000-3.500400-750nm0.000-3.000400-700nm0.000-3.000500-700nm0.000-3.000400-700nm0.00-3.500340-750nm同左带振荡功能有无有无有无带孵育功能有(选配)无无无无无几种常见酶标仪比较表2623六月2023BIO-RADModel680芬兰雷勃MK3CLINBIO128BIO-TEKELX-800AnthosZenyth340TECANSUNRISE读板方式步进/连续两种8个硅光管连续8个硅光管连续8个硅光管步进1个硅光及比色连续1个硅光管连续12个硅光管接电脑工作方式可以单独操作，内置64个程序，也可接电脑操作可以单独操作，内置一个程序，也可接电脑操作必需连接电脑操作可接电脑操作，但无中文软件可以单独操作，可接电脑操作同左重复性很稳定一般一般好好好自检功能自动校正程序功能无无无无无内存备份五里锂电池无无无无无报告类型9种6种

6种

6种

6种

6种2723六月20232.全自动化酶免疫分析系统自动化系统:加样系统温育系统洗板系统判读系统液路动力系统软件控制系统等1）连体机2）分体机：前处理（加样系统）+后处理开放式2823六月2023分体机之前处理-STAR8ch2923六月2023分体机之后处理-FAME24/203023六月20233123六月20233223六月20233323六月20233423六月20233523六月20233623六月20233723六月2023酶标仪的维护重点：光学部分-防止滤光片霉变自己定期校正滤光片滤光片波长精度测定：对滤光片进行扫描，其检测值与校定值之差为滤光片波长精度。通道差与孔间差检测：固定检测杯，换不同通道测定OD值，以极差表示；固定通道，测定各孔200µl甲基橙溶液的OD值，误差大小用±1.96s衡量。全自动厂家一年一次校准3.微粒固相酶免疫测定仪聚苯乙烯微粒固相吸附在玻璃纤维膜上液体滤出，用过滤方式洗涤反应在膜上进行碱性磷酸酶、四甲基伞形酮荧光测定4.磁微粒固相酶免疫测定磁微粒固相磁铁吸引与液相分离亲和素-生物素间接包被碱性磷酸酶4023六月2023酶免疫测定出现假阳性的原因操作及仪器因素