第九章 细胞培养

第九章细胞培养第一页，共三十一页，编辑于2023年，星期四9.2细胞悬浮培养9.1单细胞的分离9.3单细胞培养主要内容第二页，共三十一页，编辑于2023年，星期四植物细胞培养是指对植物器官或愈伤组织上分离出的单细胞（或小细胞团）进行培养，形成单细胞无性系或再生植株的技术。第三页，共三十一页，编辑于2023年，星期四9.1单细胞的分离

◆单细胞的分离方法：

（1）机械法：分离叶肉细胞是先把叶片轻轻研碎再通过过滤和离心氧化细胞。优点：1.细胞不会受到酶的伤害。

2.不需质壁分离，有利于进行生理和生化研究缺点：容易伤害细胞结构。

第四页，共三十一页，编辑于2023年，星期四（2）酶解法：利用果胶酶、纤维素酶处理，分离出具有代谢活性的细胞，该法不仅能降解中胶层，而且还能软化细胞壁。因此，必须对细胞给予渗透压保护。第五页，共三十一页，编辑于2023年，星期四◆从愈伤组织分离单细胞表面消毒的器室上切取组织—（接种）渗透培养基上—产生愈伤组织——剥下—（反复继代）—愈伤组织的松散性（不同的培养基可以使愈伤组织具有不同的生长速度，结构可松散性）—单细胞（或很小的细胞团）。第六页，共三十一页，编辑于2023年，星期四首先形成愈伤组织，将未分化和易粉碎的愈伤组织转移到盛有液体培养基（愈伤组织放在较高盐分，高生长素及高水解酪蛋白的培养基上培养，然后移入液体培养基中并搅拌而分散成单细胞）的容器中，置于摇床上不断振荡。通过振荡对细胞团施以一种缓和的压力，使它们破坏成小细胞团和单细胞，保持均匀分布在培养基中。有利促进培养基和容器内空气之间的气体交换。第七页，共三十一页，编辑于2023年，星期四第八页，共三十一页，编辑于2023年，星期四第九页，共三十一页，编辑于2023年，星期四◆植物单细胞培养的意义1、建立单细胞无性系2、采用生物化学的方法，对培养的单细胞进行人工诱发突变3、排除体细胞干扰4、遗传转化受体的建立第十页，共三十一页，编辑于2023年，星期四

9.2细胞悬浮培养

◆概念：用液体培养基对保持良好的分散状态的单个细胞或小的细胞聚集体于摇床上进行培养的方法，称为cellsuspensionculture。第十一页，共三十一页，编辑于2023年，星期四SFY—XSFY—X系列全自动动植物细胞培养发酵罐第十二页，共三十一页，编辑于2023年，星期四◆培养类型

分批培养（BatcnCulture）连续培养（ContinuousCulture）

第十三页，共三十一页，编辑于2023年，星期四分批培养：指细胞在一定容积的培养基中进行培养，目的是建立单细胞培养物。培养过程中，除了气体和挥发性代谢产物可以同外界空气交换外，一切都是密闭的。培养基中的主要营养物质耗尽时，细胞的分裂和生长即行停止。为了使分化培养的细胞不断增殖，必须进行继代培养，方法是取出培养瓶中的一小部分悬浮液，转移到含有相同成份的新鲜培养基中。第十四页，共三十一页，编辑于2023年，星期四在分批培养中，细胞数目增长的变化情况表现为S形曲线，其中对数生长期后，细胞分裂活跃，数目迅速增加，所需的时间对不同植物不一样。BatcnCulture

对于研究细胞的生长和代谢并不是一种理想的培养方式。第十五页，共三十一页，编辑于2023年，星期四连续培养：是利用特别的培养容器进行大规模细胞培养的一种方式。连续培养过程中，不断注入新鲜培养基，排掉等体积的用过的培养基，培养液中的营养物质得到不断补充。ContinuousCulture对于植物细胞代谢调节的研究，决定各个生长限制因子对细胞生长的影响，以及次生物质的大量生产都有一定意义。第十六页，共三十一页，编辑于2023年，星期四◆悬浮培养条件

悬浮细胞培养体系的基本条件：

1、悬浮培养物质分散性多，2、细胞团较小均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同3、生长迅速第十七页，共三十一页，编辑于2023年，星期四◆悬浮培养特点1、能大量提供均匀的植物细胞，也就是同步分裂的细胞。2、细胞增殖速度快，适应于大规模工业化生产。3、需要特殊的设备，如大型摇床、转床、连续培养装置、倒置式显微镜等，成本较高。第十八页，共三十一页，编辑于2023年，星期四选材料：一般条件下，以幼胚诱导的愈伤组织为最佳（质量好，分化能力强）。用颗粒细小，疏松易碎，外观湿润，鲜艳的白色或黄色的愈伤组织，比较疏松易碎，经过几次筛选，继代全稳定后，可以用于诱导悬浮细胞系。第十九页，共三十一页，编辑于2023年，星期四激素：2ml/L4-D0.5ml/L6-BA和NAA培养基：N6，MS，B5（单子叶），MS，B5，LS，SL（双子叶植物）诱导疏松愈伤组织有利的有机附加物，水解酪蛋白L-脯氨酸，谷氨酰胺，蔗糖浓度降低。第二十页，共三十一页，编辑于2023年，星期四植物组织与细胞培养中次生代谢产物

通过植物组织和细胞培养方法生产出药品，农药，香料，色素及食品添加剂。第二十一页，共三十一页，编辑于2023年，星期四9.3单细胞培养

方法看护培养法（nursecultivationmethord）平板培养法（platecultivationmethod）微室培养法（microchambercultivationmethod）第二十二页，共三十一页，编辑于2023年，星期四看护培养法

把单个细胞置于一块活跃生长的愈伤组织（也称看护愈伤组织，nursecalli）上培养，在愈伤组织和培养的细胞之间用一片滤纸相隔。这培养的单细胞长出微小的细胞团之后，再移至琼脂培养基上。第二十三页，共三十一页，编辑于2023年，星期四第二十四页，共三十一页，编辑于2023年，星期四平板培养法1将悬浮培养物过滤（除去组织块和细胞团，保留游离细胞和细胞团）2将液体培养基中加入0.6%-1.0%的琼脂，使其融化，冷却到35℃。3以上两种溶液等量混合，注入培养皿用封口膜封好，置于25℃黑暗中培养。第二十五页，共三十一页，编辑于2023年，星期四第二十六页，共三十一页，编辑于2023年，星期四第二十七页，共三十一页，编辑于2023年，星期四微室培养法由悬浮培养物中取出一滴含单细胞的培养液，置于一张无菌载波片上，在培养基的四周与隔一定距离涂上一圈石蜡油，然后在左右两侧各加一滴石蜡油并分别置一张盖波片，第三张盖波片架在前两个盖波片之间，然后将整张载波片置于培养皿中进行培养。

第二十八页，共三十一页，编辑于2023年，星期四第二十九页，共三十一页，编辑于2023年，星期四1、掌握单细胞的分离方法。2、理解细胞悬浮培养类型及其条件。3、掌握单细胞培养方法和