第八章 糖和苷

第八章糖和苷第一页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.4.2

利用酸碱性或解离度差异分离利用酸碱性

差异8.4.2.1铅盐沉淀法（同前述）8.4.2.2

季铵盐/氢氧化物沉淀法利用解离度

差异8.4.2.3离子交换法(1)离子交换法(2)离子交换纤维素层析法(3)使用硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂法第二页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.4.2.2季铵盐/氢氧化物沉淀法是一类乳化剂结构式见教材应用：可将酸性多糖从中性多糖中分离，并可再进一步细分为不同类别的多糖。第三页，共七十页，编辑于2023年，星期四原理：

1.季铵盐/氢氧化物

通常只与酸性多糖生成沉淀,使之分离。方法：控制季铵氢氧化物浓度可得到不同

酸性多糖

，控制pH<9。2.升高

PH，某些中性糖也能被沉淀（—OH的解离度增大），

方法：在不同pH

下分步沉淀

（酸性、中性、碱性等）得到不同多糖。季铵盐/氢氧化物pH梯度沉淀加入硼砂缓冲液，某些中性糖也能被沉淀原理：糖与硼酸络和，增强酸度，P.76第四页，共七十页，编辑于2023年，星期四利用解离度差异：8.4.2.3离子交换法应用：1.去杂质(可解离杂质)：2.分离糖类(1)离子交换法(2)离子交换纤维素层析法(3)使用硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂层析法

第五页，共七十页，编辑于2023年，星期四去除：选用：得到：注意事项：

１.去杂质(可解离杂质)：酸、碱、盐

（1）离子交换法多糖、苷（供进一步分离）树脂选型第六页，共七十页，编辑于2023年，星期四增大其解离度２．分离糖类

酸性糖碱性糖中性糖

是否解离选用方法解离解离（2）离子交换

纤维素层析法不解离改进（3）硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂第七页，共七十页，编辑于2023年，星期四(2)．离子交换纤维素层析法（离子交换＋纤维素层析）阳离子交换纤维素阴离子交换纤维素常用型号：Ｐ１03，一般了解应用：分离酸性/碱性多糖洗脱方法：不同浓度的缓冲溶液第八页，共七十页，编辑于2023年，星期四(3)硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂原理：中性糖与硼酸络合（NP.77）可增加酸性

增大解离度，能选择性交换。洗脱方法：不同浓度的硼酸盐溶液应用：单糖、低聚糖、中性多糖效果好缺点：洗脱体积大后处理烦第九页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.4.2

利用酸碱性或解离度差异分离小结两沉淀

（1）铅盐沉淀法（如前述）盐试剂沉淀法（2）季铵氢氧化物沉淀法碱试剂沉淀法

三交换(1)离子交换法(2)离子交换纤维素层析法(3)使用硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂层析法

第十页，共七十页，编辑于2023年，星期四§8.4

糖和苷的分离方法(I)--按分离原理(或分离方法)分类

8.4.1利用溶解度差异分离8.4.2利用酸碱性差异分离或解离度8.4.3利用吸附性差异分离8.4.4利用分子量差异分离11第十一页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.4.3利用吸附性差异8.4.3.1活性炭吸附法8.4.3.2纤维素柱层析静态吸附动态吸附第十二页，共七十页，编辑于2023年，星期四应用：注意事项：8.4.3.1静态吸附去非糖()杂质对水溶性低聚糖几乎无不良影响须用动物性骨碳否则对蔗糖吸附较多（回收率低，仅43~87%）====亲脂性第十三页，共七十页，编辑于2023年，星期四分离单糖和低聚糖（含单糖数目多者，下）先后8.4.3.2动态吸附（活性碳柱层析）应用：@１去杂质：２分离糖：去无机盐，水洗最洗下——利用活性炭选择性吸附第十四页，共七十页，编辑于2023年，星期四１先水洗２渐增洗脱液中的乙醇浓度无机盐先下，然后是单糖逐步洗出二糖、三糖、及更大低聚糖洗脱方法：@第十五页，共七十页，编辑于2023年，星期四１．活性炭预处理方法：盐酸液煮沸，蒸馏水洗净

（2–3mol/L）２．需要增加洗脱速度，方法：（1）加压（2）装柱时，拌入等量硅藻土，弊：会使吸附容量降低（3）或用４０-６０目稍粗的炭注意事项：第十六页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.4.3利用吸附性差异8.4.3.1活性炭吸附法8.4.3.2纤维素柱层析静态吸附动态吸附洗脱液：水/乙醇第十七页，共七十页，编辑于2023年，星期四§8.4

糖和苷的分离方法(I)--按分离原理(或分离方法)分类

8.4.1利用溶解度差异分离8.4.2利用酸碱性差异分离或解离度8.4.3利用吸附性差异分离8.4.4利用分子量差异分离18第十八页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.4.4利用差异分子量凝胶层析法应用：

1.去杂质，无机盐及小分子化合物下

（进入凝胶内部）方法：后2.分离糖、苷注意：比较活性炭吸附法第十九页，共七十页，编辑于2023年，星期四(1)分离分子量不同的糖、苷

@

例如，低聚糖、苷、或多糖。大分子的糖（）洗下，比较活性炭法：大分子（）下先后2.分离糖和苷第二十页，共七十页，编辑于2023年，星期四（2）分离形状不同的分子：如直链和支链多糖支链糖/苷（）下@先第二十一页，共七十页，编辑于2023年，星期四分离低聚糖和苷：用孔隙（）的分离多糖用孔隙（）的多糖纯化去小分子杂质用孔隙（）的小大小注意事项：凝胶选型第二十二页，共七十页，编辑于2023年，星期四§8.4

糖和苷的分离方法(I)--按分离原理(或分离方法)分类

8.4.1利用溶解度差异分离8.4.2利用酸碱性差异分离或解离度8.4.3利用吸附性差异分离8.4.4利用分子量差异分离§8.5糖和苷的分离方法(II)

--按分离目的分类

@

@23第二十三页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5糖和苷的分离方法(II)

--按分离目的分类

@8.5.18.5.2分离混合糖类或苷类细分总糖、总苷去非糖/苷杂质精制总糖、总苷第二十四页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5.1除去非糖杂质的方法

----

制备（精制）总糖、总苷思路?寻找差异首先要考虑性质差异第二十五页，共七十页，编辑于2023年，星期四

糖亲水

苷亲水

杂质

成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量分离方法第二十六页，共七十页，编辑于2023年，星期四

糖亲水中性

不解离

可解离多为中、高分子量

苷亲水

中性

杂质亲脂类亲水类可解离

电解质酸碱盐不解离成分溶解性/极性酸碱性解离度分子量亲水中性酸性酸性碱性中性极性

大极性较大小分子或大分子中性酸性第二十七页，共七十页，编辑于2023年，星期四

糖亲水中性

不解离

可解离

多为中、高分子量

苷亲水

中性

杂质

亲脂亲水

可解离

电解质酸碱盐成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量亲水中性酸性酸性碱性中性极性

大极性较大不解离小分子或大分子分离方法第二十八页，共七十页，编辑于2023年，星期四(利用差异）注意正确判断差异类型分离目的 方法 举例除亲脂性杂质溶剂法吸附法亲脂性溶剂抽提、萃取

(例如石油醚脱脂)活性炭吸附静态极性糖和苷的精制除亲水性杂质(利用差异）极性溶剂法吸附法正丁醇萃取（精制苷）水溶醇沉（精制多糖）活性炭柱层析第二十九页，共七十页，编辑于2023年，星期四

糖亲水中性

不解离

可解离

多为中、高分子量

苷亲水

中性

杂质

亲脂亲水

可解离

电解质酸碱盐成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量亲水中性酸性酸性碱性中性极性

大极性较大不解离小分子或大分子分离方法第三十页，共七十页，编辑于2023年，星期四不沉淀酸碱性成分被交换吸附,中性糖、苷成分流出除酸性成分()离子树脂除碱性成分()离子树脂除去酸碱

性杂质及部分中性杂质铅盐沉淀酸性、酚性成分含酸性多糖酸根-

—阴阳离子+

—阳法离子交换法碱式醋酸铅中性醋酸铅另沉淀中性

、

成分含中性多糖目的方法 分离效果等 沉淀单糖、低聚糖、极性大的苷第三十一页，共七十页，编辑于2023年，星期四

糖亲水中性

不解离

可解离

多为中、高分子量

苷亲水

中性

杂质

亲脂亲水

可解离

电解质酸碱盐成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量亲水中性酸性酸性碱性中性极性

大极性较大不解离小分子或大分子分离方法第三十二页，共七十页，编辑于2023年，星期四分离目的 分离方法 洗脱顺序及原理除无机盐离子交换法活性碳层析凝胶层析后下先下后下被交换吸附分子量小吸附弱进入凝胶内部(可解离小分子）第三十三页，共七十页，编辑于2023年，星期四

糖亲水中性

不解离

可解离

多为中、高分子量

苷亲水

中性

杂质

亲脂亲水

可解离

电解质酸碱盐成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量亲水中性酸性酸性碱性中性极性

大极性较大不解离小分子或大分子分离方法第三十四页，共七十页，编辑于2023年，星期四分子量大的杂质下分子量小的杂质下

醇沉

蛋白沉淀剂透析法凝胶法活性炭沉淀多糖、蛋白质精制单糖低聚糖和苷用于精制多糖（只沉蛋白，不沉多糖）

@第三十五页，共七十页，编辑于2023年，星期四思考题？分离多糖等大分子水溶液时脱盐可以选用的方法

有哪些？简述其原理、要点透析、超滤、凝胶层析、离子交换、活性炭层析第三十六页，共七十页，编辑于2023年，星期四

糖亲水中性

不解离

可解离

多为中、高分子量

苷亲水

中性

杂质

亲脂亲水

可解离

电解质酸碱盐成分溶解性酸碱性解离度分子量亲水多中性酸性碱性中性极性

大极性较大不解离小分子或大分子方法中性酸性第三十七页，共七十页，编辑于2023年，星期四

糖亲水中性

不解离

可解离

多为中、高分子量

苷亲水

中性

杂质

亲脂亲水

可解离

电解质酸碱盐成分溶解性酸碱性解离度分子量亲水多中性酸性碱性中性极性

大极性较大不解离小分子或大分子方法中性酸性

溶剂法吸附法

分级醇沉蛋白沉淀剂凝胶活性炭离子交换法凝胶层析法活性炭层析铅盐沉淀离子交换第三十八页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5.2

分离混合糖类或苷类----细分总糖、总苷8.5.2.1先粗分为单糖/低聚糖、多糖1醇沉法（）糖可溶（）糖沉淀多单糖、低聚小多@

2活性炭层析3凝胶层析法选用（）孔隙（）糖先下第三十九页，共七十页，编辑于2023年，星期四

8.5.2.2再细分单糖、低聚糖@活性炭层析――吸附性差异凝胶层析――分子量差异选用孔隙小的凝胶离子交换层析――解离度差异离子交换纤维素

硼酸处理树脂第四十页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5.2.3多糖再分离@粗分：１醇沉：乙醇分级沉淀法

（或乙醚分段沉淀法）不同分子量２<碱沉>：季铵氢氧化物分段沉淀法不同酸碱性细分：３离子交换纤维素

层析法４凝胶

层析法

5

纤维素柱层析法

6硼酸处理的树脂第四十一页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5.2

分离混合糖类或苷类----细分总糖、总苷8.5.2.4

总苷的细分1分配柱层析法

正相分配反相分配@

2聚酰胺柱层析法3活性炭柱层析法4凝胶柱层析法第四十二页，共七十页，编辑于2023年，星期四在提取分离之中，怎样确认

中间产物中是否含有糖或苷？在提取分离之后，如何确认

终产品中是否含有糖或苷？第四十三页，共七十页，编辑于2023年，星期四第八章糖和苷§8.1结构与分类

掌握§8.2理化性质熟悉、了解§8.3提取方法

掌握§8.4分离方法(I)

掌握§8.5分离方法(II)掌握各论§8.6

检识方法

熟悉、了解44第四十四页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5.1一般检识方法（通用方法）8.5.1.1

显色反应8.5.1.2纯度鉴定8.5.1.3分子量测定8.5.２特征检识方法8.5.２.1

还原糖检识8.5.２.2

非还原糖检识（包括苷）8.5.２.3单糖与结合糖区别检识8.5.２.4其它专属性检查§8.5糖和苷的检识方法

@第四十五页，共七十页，编辑于2023年，星期四回顾“有机”:糖和苷检识方法

Molish反应脱水反应（糠醛形成反应）NP.73

第四十六页，共七十页，编辑于2023年，星期四呋喃甲醛

糠醛

5-羟甲糠醛5-HMFA第四十七页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5.1一般检识方法（通用方法）8.5.1.1显色反应：糠醛形成反应（脱水反应）

１．方法与现象（以Molish反应为例）中药水提液加α－萘酚１滴

摇匀

（装试管）沿管壁加入浓H2SO4

两溶液交界面产生有色环（紫红色或其它色）第四十八页，共七十页，编辑于2023年，星期四2．原理主要过程：（水解）脱水，缩合

结合糖（低聚糖、多糖、）苷浓无机酸单糖

＋浓无机酸脱水

糠醛或其衍生物＋酚类试剂缩合

有色物(水解)第四十九页，共七十页，编辑于2023年，星期四3.分类与特点(了解)(2)Seliwanoff反应（西里瓦诺夫反应）：用６Ｎ盐酸，间苯二酚，条件温和，各种单糖

显色时间及颜色不同

4.试剂：无机酸酚类、芳胺等(1)Molish反应：用浓H2SO4、α－萘酚迅速脱水，各种单糖无明显差异（通用型）第五十页，共七十页，编辑于2023年，星期四Molish反应阳性:表明有糖或苷存在

（糖包括各种游离糖、结合糖）

Seliwanoff反应阳性:区别

某些不同的单糖

（反应时间、颜色不同）5．结果判断（适用范围，应用）了解第五十一页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5.1一般检识方法（通用方法）8.5.1.1显色反应Molish反应8.5.1.2纯度鉴定

8.5.1.3分子量测定第五十二页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5.1.2纯度鉴定（区别单一成分或混合物）

1.层析法（多用于单糖的鉴定，可用标准品对照）

(1)平面层析（ＰＣ、ＴＬＣ）

应有圆整斑点，且无杂质斑点出现

展开剂：ＰＣ(常用)：

n－BuOH：HOAc：H2O（４：１：５，上层）等硅胶ＴＬＣ：

n－BuOH：Me2CO：H2O（４：５：１）等显色剂：苯胺、邻苯二甲酸等，不同的单糖常显不同颜色其它：纤维素ＴＬＣ(2)

柱层析

ＧＣＨＰＬＣ单峰，较锐第五十三页，共七十页，编辑于2023年，星期四2．其它方法（NP.92，多糖鉴定常用）比旋度：应恒定示差折射法：折光率不变水解法：糖组成恒定第五十四页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5.1一般检识方法（通用方法）8.5.1.1显色反应Molish反应8.5.1.2纯度鉴定

8.5.1.3分子量测定第五十五页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5.1.3分子量测定NP.91

P.105

了解由分子量可明显区分单糖、低聚糖、多糖1.物理方法粘度法等2.质谱法(实用)可联用ＧＣ－ＭＳ（气质联用）ＬＣ－ＭＳ（液质联用）3.凝胶层析法测多糖分子量，需标准品做标准曲线对照第五十六页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5.1一般检识方法（通用方法）8.5.1.1

显色反应8.5.1.2纯度鉴定8.5.1.3分子量测定§8.5糖和苷的检识方法

@8.5.２特征检识方法8.5.２.1

还原糖检识8.5.２.2

非还原糖检识（包括苷）8.5.２.3单糖与结合糖区别检识8.5.２.4其它专属性检查第五十七页，共七十页，编辑于2023年，星期四8.5.２特征检识方法中药水提液Fehling试剂Cu2O(砖红色)Fehling试剂

（弱氧化剂）：

CuSO4与酒石酸钾钠的碱溶液混合而成。8.5.２.1还原糖检识----Fehling（斐林）反应１．方法与现象区分不同种类的糖以及糖和苷第五十八页，共七十页，编辑于2023年，星期四醛氧化成－COOH，Ｃu2＋被还原成Cu+析出沉淀（砖红色）醛的>CHO上连有Ｈ原子，易被氧化，>CHO

>C=O2．原理：（了解）故醛糖呈阳性反应。然而果糖等酮糖也能呈阳性反应?较弱的氧化剂如Tollen（土伦试剂）,Fehling溶液即可将醛氧化成相应的羧酸，第五十九页，共七十页，编辑于2023年，星期四果糖等酮糖也能呈阳性反应：在碱溶液中醛糖和酮糖能发生互变重排

可异构化成含醛糖的混合物，

第六十页，共七十页，编辑于2023年，星期四Fehling反应小结：

醛阳性，酮阴性醛糖、酮糖都阳性（酮糖在碱性溶液中异构化）@第六十一页，共七十页，编辑于2023年，星期四3．结果判断：（在糠醛形成反应之后）进一步区分还原糖与非还原糖（大多为结合糖）或苷阳性:（有砖红色Cu2O沉淀）则表明有还原糖存在；即单糖（含α－ＯＨ醛的醛糖、含α－ＯＨ酮的酮糖）

或还原性双糖

（天然三糖及其以上，皆为非还原性糖，大多是在蔗糖的基础上延长糖链）第六十二页，共七十页，编辑于2023年，星期四阴性：可能是非还原性糖或苷类

（非还原性低聚糖，多糖）还需结合下述8.5.２.2中的酸水解方