高中生物-动物细胞融合与单细胞克隆抗体教学课件设计

？？？？再分化？植物细胞杂交技术利用什么原理？用什么方法可以诱导植物细胞融合？一、原理：细胞膜具有流动性细胞的全能性二、诱导方法：离心振动电激、聚乙二醇植物细胞杂交技术有什么用途？三、用途：获得杂种植株脱分化如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！动物细胞也能融合吗？一、动物细胞融合有些细胞的融合是正常的生命活动。如精子与卵细胞的结合。

两个细胞正在融合受精作用细胞融合的内在原因是:_______________细胞膜的流动性.(一)概念

动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多

个动物细胞结合形成一个细胞的过程。（二）动物细胞融合的过程与植物原生质体融合原理相同，方法类似。杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。一、动物细胞融合合作探究1

2.动物细胞融合与受精作用的区别?

3.用不灭活病毒可否诱导细胞融合?(P52)

受精作用是同种生物之间进行的,不需要诱导剂,动物细胞融合是在不同种生物之间进行的,必须有诱导剂作用,

不行，灭活是使病毒失去感染能力，如果不灭活病毒会感染动物细胞，在细胞中增殖，伤害动物细胞。1、动物细胞融合诱导融合的方法有哪些？动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？离心、电激等物理方法；PEG等化学方法灭活的病毒进行诱导不能，杂交细胞4、叙述动物细胞融合过程(分步表达)1.不同DNA的两个细胞（细胞悬液）2.灭活病毒诱导细胞融合4融合后的细胞进行有丝分裂（动物细胞培养)6、叙述动物细胞融合过程3杂交细胞筛选主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较1、原理细胞膜的流动性4、最有价值的应用2、过程不同DNA的两个细胞灭活的病毒PEG等杂交细胞细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核3、优点1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。制备单克隆抗体。

1.能使动物细胞融合的特有的诱导方法是A．离心B．灭活的病毒C．电刺激D．振动

2.动物细胞融合的目的中最重要的是A．克服远源杂交不亲和B．制备单克隆抗体C．培育新物种D．生产杂种细胞你争我抢合作探究2？1.抗体是什么？是由何种细胞产生的？请画出体液免疫和细胞免疫过程。２、一种Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？二、单克隆抗体3.简述获得抗体的传统途径？这种方法获得的抗体有什么缺陷？

4.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个问题？提问？1.抗体是什么？是由何种细胞产生的？２、一种Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？二、单克隆抗体浆细胞一种抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的免疫球蛋白（特异性）。

抗体不纯抗原动物体刺激浆细胞抗体抗原不纯3.简述获得抗体的传统途径？这种方法获得的抗体有什么缺陷？特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏4.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个问题？

为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？思考：

B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力，

骨髓瘤细胞具有体外培养时大量增殖特点设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖杂交细胞二、单克隆抗体2.制备过程：2.诱导其融合的方法有哪些？1.注射抗原的目的是什么？5.大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法3.融合后培养液中细胞有几种？4.两次筛选的目的6.杂交瘤细胞有何优点？怎样筛选出杂交瘤细胞？合作探究3知识拓展6.如何筛选杂交瘤细胞？进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？（1）融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。

(2)但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。(阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。)注意：在多孔培养板上，培养得到的细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。杂交瘤细胞优点：既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体。

请同学们根据自己所收集的资料，谈谈单克隆抗体的应用。五、单克隆抗体的应用单克隆抗体的优点

特异性强、产量高、灵敏度高。（1）作为诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）五、单克隆抗体的应用21本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理（2）可用于疾病治疗和运载药物(癌症治疗)生物导弹=单克隆抗体+药物（治疗肿瘤）(“生物导弹”—单抗导向，药物为弹头)五、单克隆抗体的应用22本资料由书利华教育网（即数理化网）为您整理思考若不采用动物细胞融合的方法，能否生产出单克隆抗体？试简要说明。

能。基因工程可从经免疫的B淋巴细胞中获取决定所需抗体的基因（目的基因），导入瘤细胞，然后培养瘤细胞并从培养液中提取分泌物，可得到单抗隆抗体。本过程利用了哪些动物细胞工程技术？

动物细胞融合和动物细胞培养。【堂堂清】1.单克隆抗体的优点是________________________________特异性强、灵敏度高、可大量制备2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的原因是_________________________________每一种B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体3.产生抗体的细胞是_______________

产生单克隆抗体的细胞是__________效应B细胞（浆细胞）杂交瘤细胞4.杂交瘤细胞的特点:_______________________________既能无限增殖，又能分泌特异性抗体5.首次筛选是为了获得_____________

第二次筛选时为了获得_______________________________杂交瘤细胞既能无限增殖，，又能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞第一步：从一只小鼠体内提取T淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。实验评价1、已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠2、B淋巴细胞3、选择培养基4、必须经过专一抗体阳性检验下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是A.经过免疫的B淋巴细胞B.没经过免疫的T淋巴细胞

C.经过免疫的T淋巴细胞D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞课堂巩固2、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是①B淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A、①②③④

B、①③⑤C、①③

D、②④3下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：（1）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得__________细胞，该细胞能够产生___________。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。（2）B过程是一个____________过程，该过程的进行需要灭活的______或_____________的诱导。免疫的B淋巴特异性抗体特定抗原细胞融合

病毒

聚乙二醇

3．右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：

（1）该方案能达到预期效果吗？

。原因是

.。

（2）图中②为

过程，常用

作为诱导剂。该细胞继承了

，因此不仅能分泌

，还能

。

（3）该方案的目的是

。

不能

无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞.细胞融合

灭活病毒

双亲细胞的遗传物质

特异性抗体

在体外培养条件下大量增殖

制备单克隆抗体

没有将抗原注入小鼠体内，4、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。动物细胞培养选择特异性强,灵敏度高灭活的病毒在体外大量增殖分泌特异性抗体骨髓造血干细胞主动运输（1）_______________技术是单克隆抗体技术的基础。（2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于________培养基。（3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是___