第七章芳胺类药物分析

第七章芳胺类药物分析第一页，共七十页，编辑于2023年，星期四基本要求一、掌握芳胺类药物的鉴别试验方法和含量测定的亚硝酸钠滴定法。二、熟悉芳胺类药物的特殊杂质检查和含量测定的非水滴定法和分光光度法；熟悉苯乙胺类药物的鉴别、检查和含量测定方法；三、了解本类药物的结构和性质。第二页，共七十页，编辑于2023年，星期四R1HNCOOR2对氨基苯甲酸酯结构通式第一节芳胺类药物的分析一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要性质第三页，共七十页，编辑于2023年，星期四H2NCOOC2H5苯佐卡因H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2盐酸普鲁卡因HClCH3(CH2)2NHCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl盐酸丁卡因第四页，共七十页，编辑于2023年，星期四结构与分析方法芳伯氨基，显芳伯氨基特性。脂烃胺侧链，游离碱多为碱性油状液体或固体，与生物碱沉淀剂反应。有酯键（或酰氨键），易水解，尤其受碱或光、热的影响能促进水解。水解产物限量控制。第五页，共七十页，编辑于2023年，星期四酰胺类药物结构通式R1R3R4NHCOR2二、酰胺类药物的基本结构与主要性质第六页，共七十页，编辑于2023年，星期四HONHCOCH3对乙酰氨基酚CH3COHNSOONHCOCH3醋氨苯砜H3CCH3NHCOCH2N(C2H5)2HClH2ONHCONCH3CH3C4H9HCl盐酸利多卡因盐酸布比卡因第七页，共七十页，编辑于2023年，星期四结构与分析方法酰氨结构，可水解为芳伯氨基，重氮化偶合。空间位阻影响水解。有酚羟基或水解产生酚羟基，可与三氯化铁显色。脂烃胺侧链，显弱碱性，与生物碱沉淀剂或重金属离子反应。第八页，共七十页，编辑于2023年，星期四三、鉴别试验（一）重氮化-偶合反应

分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生此反应。Ar-NH2HClNaNO2重氮盐OH--萘酚橙黄~猩红色第九页，共七十页，编辑于2023年，星期四

直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺间接反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜

利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发生此反应。第十页，共七十页，编辑于2023年，星期四

丁卡因虽无芳伯氨基，但可与NaNO2反应生成N－亚硝基化合物的乳白色沉淀。

（可与具有芳伯氨基的同类药物区别）第十一页，共七十页，编辑于2023年，星期四第十二页，共七十页，编辑于2023年，星期四盐酸普鲁卡因ChP（2005）[鉴别]（4）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录Ⅲ）取供试品约50mg，加稀盐酸1mL，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。

第十三页，共七十页，编辑于2023年，星期四（二）与三氯化铁反应对乙酰氨基酚+FeCl3蓝紫色化合物第十四页，共七十页，编辑于2023年，星期四对乙酰氨基酚ChP（2005）[鉴别]（2）取本品约0.1g，加稀盐酸5m1，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性β-萘酚试液2m1，振摇，即显红色。第十五页，共七十页，编辑于2023年，星期四

1.与铜和钴离子反应：利多卡因与硫酸铜生成蓝紫色配位化合物；与氯化钴生成亮绿色沉淀。（三）与金属离子反应第十六页，共七十页，编辑于2023年，星期四第十七页，共七十页，编辑于2023年，星期四2.羟肟酸铁盐反应（基于普鲁卡因胺分子中的芳酰胺结构）第十八页，共七十页，编辑于2023年，星期四3.与汞离子反应盐酸利多卡因+H2NO3+Hg(NO3)2黄色对氨基苯甲酸酯＋H2NO3+Hg(NO3)2红色或橙黄色第十九页，共七十页，编辑于2023年，星期四1.盐酸普鲁卡因的鉴别

(四)水解产物反应盐酸普鲁卡因+NaOH普鲁卡因油状物对氨基苯甲酸钠+二乙氨基乙醇（使湿润的红色石蕊试纸变兰色）对氨基苯甲酸钠+HCl对氨基苯甲酸（白色）第二十页，共七十页，编辑于2023年，星期四第二十一页，共七十页，编辑于2023年，星期四2.苯佐卡因的鉴别

苯佐卡因+NaOH乙醇乙醇+I2+NaOHCHI3（碘仿臭气，黄色沉淀）第二十二页，共七十页，编辑于2023年，星期四(五)制备衍生物测熔点1.三硝基苯酚衍生物的制备：利多卡因和布比卡因第二十三页，共七十页，编辑于2023年，星期四

2.硫氰酸盐衍生物的制备：

盐酸丁卡因第二十四页，共七十页，编辑于2023年，星期四(六)紫外特征吸收光谱法

1.在λmax处测定供试液的百分吸收系数。

例如：对乙酰基酚在0.4%NaOH中于λmax=240nm;E1%1cm=715在HCl(0.1nol/L)-甲醇于λmax=249nm;E1%1cm=8802.在规定的浓度测定λmax

例如：醋氨苯砜5μg/ml;λmax=256nm;284nm

再例如：盐酸普鲁卡因胺5μg/ml;λmax=280nm(七)红外吸收光谱法第二十五页，共七十页，编辑于2023年，星期四（一）对乙酰氨基酚中的杂质检查（化学合成工艺）A、对硝基氯苯→水解→对硝基酚→还原→对氨基酚→乙酰化B、酚→亚硝化、还原→对氨基酚，乙酰化1）酸度来源：生产过程，水解要求：本品1%溶液pH应为5.5—6.5。四、特殊杂质检查第二十六页，共七十页，编辑于2023年，星期四2）乙醇溶液的澄清度与颜色本品为白色结晶或洁净性粉末，易溶于乙醇，溶液澄清。来源：中间体对氨基酚氧化产物。要求：不得比棕红色2号更深来源：生产中还原剂（铁粉）。要求：不得比1号浊度标准液更浓。第二十七页，共七十页，编辑于2023年，星期四检查方法取本品的细粉1.0g，置具塞离心管或试管中，加乙醚5ml，立即密塞，振摇30分钟，离心或放置澄清，取上清液作为供试品溶液；另取每1ml中含对氯乙酰苯胺1.0mg的乙醇溶液适量，用乙醚稀释成每1ml中含50μg的溶液作为对照液。吸取供试品溶液200μl与对照溶液40μl，分别点于同一硅胶GF254薄板上。以氯仿－丙酮－甲苯（13:5:2）为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更大，更深。3）有关物质对氯乙酰苯胺第二十八页，共七十页，编辑于2023年，星期四4）对氨基酚检查方法

取本品1.0g，加甲醇溶液（1→2）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml，摇匀，放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50μg用同一方法制成的对照液（临用配制）比较，不得更深（0.005％）。第二十九页，共七十页，编辑于2023年，星期四（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查检查方法

精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品,加乙醇制成每1ml中含30μg的溶液,作为对照品溶液。取上述两种溶液各10μl，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯－冰醋酸－丙酮－甲醇（14:1:1:4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深。第三十页，共七十页，编辑于2023年，星期四2）对氨基苯甲酸第三十一页，共七十页，编辑于2023年，星期四原理

芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐，用永停法或外指示剂法指示反应终点。潜在芳伯氨基，可通过水解或还原得到芳伯氨基。

（一）亚硝酸钠滴定法五、含量测定第三十二页，共七十页，编辑于2023年，星期四重氮化反应历程：NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2OAr-NH2NOClAr-NH-NOAr-N=N-OHHNO2+HBrNOBr+H2O快快慢Ar-N2+Cl-（1）K1（2）K2

∵K1

≈300K2

加入KBr，可增大被测溶液中NO+的浓度，所以能加快重氮化反应速度第三十三页，共七十页，编辑于2023年，星期四注意条件：1.溴化钾的作用：催化剂。与亚硝酸生成NOBr，可加大NO+浓度。2.酸的种类及其浓度：

①重氮化反应速度加快；②重氮盐在酸性溶液中稳定；③防止生成偶氮氨基化合物，影响测定结果强酸性下可加速反应，但酸度过高，会使芳伯氨基游离受阻，影响反应速度。太浓亚硝酸分解在不同酸中重氮化反应的速度为：HBr＞HCl＞H2SO4＞HNO3盐酸1:2.5～6过量盐酸作用第三十四页，共七十页，编辑于2023年，星期四3.温度：温度升高，反应速度加快，而生成的重氮盐的分解也加速，亚硝酸钠滴定液也易分解逸失。滴定应在室温条件4.滴定速度：（先快后慢）

反应为分子反应，滴定不宜过快，要不断搅拌。将滴定管尖端插入液面下2/3处，滴定液一次大部分放下，近终点时方改为慢速滴定，加入最后一滴滴定液后，搅拌1—5分钟方能确定终点。5.电极活化：用浓硝酸（加1—2滴三氯化铁试液）温热活化。第三十五页，共七十页，编辑于2023年，星期四永停滴定法：铂－铂电极系统。用亚硝酸钠液滴定，终点前，溶液中无亚硝酸，线路无电流通过，电流计指针指零。终点时溶液中有微量亚硝酸存在，电极即起氧化还原反应，线路中遂有电流通过，此时电流计指针突然偏转，并不再回复，即为终点。终点的指示方法第三十六页，共七十页，编辑于2023年，星期四外指示剂法：常用碘化钾－淀粉糊剂或指示液，滴定到达终点时，稍过量的亚硝酸钠在酸性溶液中氧化碘化钾，析出的碘遇淀粉即显蓝色终点的指示方法KI—淀粉糊剂或试纸2NaNO2+2KI+4HCl→2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O

第三十七页，共七十页，编辑于2023年，星期四本品在稀碱溶液中，在257+1nm波长处有最大吸收（二）紫外分光光度法对乙酰氨基酚ChP（2005）取本品约40mg，精密称定，置25ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5m1，置100ml量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液10m1，加水至刻度，摇匀，在257nm的波长处测定吸收度，按C8H9NO2的吸收系数为715计算，即得。第三十八页，共七十页，编辑于2023年，星期四苯乙胺类药物基本结构R1C*HOHCHR3NHR2HOHOR1R2R3CH3H肾上腺素H2NClClHCH3盐酸克仑特罗第二节苯乙氨类药物的分析第三十九页，共七十页，编辑于2023年，星期四结构与分析方法酚羟基，易氧化。脂烃胺侧链，显弱碱性。芳伯氨基。手性碳，光学活性。第四十页，共七十页，编辑于2023年，星期四一、与三氯化铁反应药物三氯化铁肾上腺素Adrenaline0.1mol/L盐酸液中显翠绿色，加氨试液显紫色，紫红色重酒石酸去甲肾上腺素Noradrenalinebitartrate翠绿色，加碳酸氢钠试液显蓝色，红色盐酸去氧肾上腺素Phenylephrine

hydrochloride紫色盐酸异丙肾上腺素Isoprenalinehydrochloride深绿色，滴加新制5%碳酸氢钠液，显蓝紫色，红色盐酸多巴胺Dopaminehydrochloride墨绿色，滴加1%氨溶液，显紫红色第四十一页，共七十页，编辑于2023年，星期四二、与甲醛－硫酸反应药物甲醛－硫酸肾上腺素Adrenaline红色重酒石酸去甲肾上腺素Noradrenalinebitartrate淡红色盐酸去氧肾上腺素Phenylephrine

hydrochloride玫瑰红，橙红，深棕红盐酸异丙肾上腺素Isoprenalinehydrochloride棕色，暗紫色盐酸多巴胺Dopaminehydrochloride第四十二页，共七十页，编辑于2023年，星期四

苯乙胺类药物多数含有多羟基酚，更易被氧化显不同颜色。

肾上腺素血红色异丙肾上腺素橙黄色重酒石酸去甲肾上腺素黄色盐酸去氧肾上腺素无色盐酸甲氧明无色三、还原性（氧化呈色）反应第四十三页，共七十页，编辑于2023年，星期四四、UV吸收光谱特征药物溶剂浓度(mg/ml)λnm(nm)吸收度(A)重酒石酸间羟胺水0.10272盐酸异丙肾上腺素水0.052800.50盐酸多巴胺0.5%硫酸0.03280盐酸芬氟拉明0.1mol/L盐酸0.25263,270盐酸苯乙双胍水0.012340.60盐酸克伦特罗0.1mol/L盐酸0.03243,296硫酸沙丁胺醇水0.08274盐酸伪麻黄碱水0.50251,257,263第四十四页，共七十页，编辑于2023年，星期四特殊杂质与检查一、酮体检查生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。降解产物肾上腺素红多聚体第四十五页，共七十页，编辑于2023年，星期四一、酮体检查肾上腺素（

）中肾上腺酮（

）的检查

260280300320Aλ第四十六页，共七十页，编辑于2023年，星期四药物杂质溶剂C(mg/ml)λ(nm)A肾上腺素肾上腺酮HCl(9→2000)2.0310≤0.05盐酸去氧肾上腺素酮体水2.0310≤0.20重酒石酸去甲肾上腺素去甲肾上腺酮水2.0310≤0.05盐酸异丙肾上腺素酮体水2.0310≤0.15盐酸甲氧明酮胺水1.5347≤0.06紫外分光光度法检查酮体的条件及要求第四十七页，共七十页，编辑于2023年，星期四二、有关物质的检查肾上腺素——HPLC盐酸苯乙双胍——纸色谱法盐酸去氧肾上腺素——TLC第四十八页，共七十页，编辑于2023年，星期四含量测定原料：非水溶液滴定法、溴量法制剂：比色法、提取容量法、紫外分光光度法、高效液相色谱法第四十九页，共七十页，编辑于2023年，星期四一、非水溶液滴定法(一)基本原理当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游离碱类盐被置换出的弱酸因此，要根据不同情况采用相应测定条件。第五十页，共七十页，编辑于2023年，星期四(二)一般方法供试品+冰醋酸10ml~30ml若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml结果高氯酸滴定液滴定以空白试验校正第五十一页，共七十页，编辑于2023年，星期四1.适用范围

主要用于Kb＜10-8的有机碱盐的含量测定。对碱性较弱的杂环类药物，只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，可使pKb为8～13的弱碱性药物采用本法滴定。

一般来说：

Kb为10-8～10-10时，宜选冰醋酸作为溶剂；(药物)Kb为10-10～10-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合溶液；Kb＜10-12时，应用醋酐作为溶剂。

另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突跃显著增大，使一些碱性极弱的杂环类药物获得满意测定结果。(三)问题讨论第五十二页，共七十页，编辑于2023年，星期四

2.酸根的影响：无机酸类，在醋酸介质中的酸性以下列排序递减：

高氯酸＞氢溴酸＞硫酸＞盐酸＞硫酸氢根＞硝酸＞磷酸

消除HX干扰的方法：加Hg(Ac)2

量不足终点不明显，结果偏低。

2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX2

过量(1～3倍)不影响测定结果(三)问题讨论第五十三页，共七十页，编辑于2023年，星期四3.滴定剂的稳定性非水溶液滴定法所用的溶剂为醋酸，具有挥发性，膨胀系数较大，温度和贮存条件都影响滴定剂的浓度。若滴定样品与标定HClO4溶液时的温度不一致，温差未超过10℃时，应将高氯酸滴定液的浓度用下列公式加以校正：

4.终点指示方法常用电位法和指示剂法。Ch.P收载的本类药物大多采用结晶紫指示剂指示终点，少数采用电位法指示终点。(三)问题讨论第五十四页，共七十页，编辑于2023年，星期四例：重酒石酸去甲肾上腺素－－直接滴定

盐酸克伦特罗－－加醋酸汞消除氢卤酸干扰；由于碱性较弱，电位法指示终点

硫酸沙丁胺醇－－加入醋酐以增大突跃，结晶紫为指示剂(四)应用实例第五十五页，共七十页，编辑于2023年，星期四二、溴量法1、游离溴及碘极易挥散，操作过程中防逸失2、不能加入太过量的溴液，以防酚羟基氧化或溴化。一般以过量2％为宜。3、平行条件作空白，校正操作中溴及碘挥发。第五十六页，共七十页，编辑于2023年，星期四三、提取酸碱滴定法(溶解性差异)方法：供试品溶于水或矿酸，加入适量碱性试剂使药物游离，用适当的有机溶剂提取，将提取液蒸干，残渣中加中性乙醇溶解，用标准酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量过量的标准酸滴定液，蒸去有机溶剂后，再用标准碱滴定液回滴定）。硫酸苯丙胺→加水溶解→加氢氧化钠试液8ml→加氯化钠使饱和→乙醚多次提取→合并乙醚液→精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）25ml振摇→低温蒸去乙醚→放冷至室温→加甲基红指示液2滴→用氢氧化钠（0.1mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于18.42mg的C18H26N2·H2SO4。第五十七页，共七十页，编辑于2023年，星期四四、UV和比色法五、HPLC法六、体内药物分析(GC-MS)第五十八页，共七十页，编辑于2023年，星期四盐酸克仑特罗的测定

取本品约0.25g，精密称定，加冰醋酸20ml，微热使溶解，放冷，加醋酸汞试液5ml，照电位滴定法，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于31.37mg的C12H18Cl2N2O·HCl。

第五十九页，共七十页，编辑于2023年，星期四

硫酸沙丁胺醇的测定

取本品约0.4g，精密称定，加冰醋酸10ml，微热使溶解，放冷，加醋酐15ml和结晶紫指示液1滴用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于57.67mg的（C13H21NO3）2H2SO4第六十页，共七十页，编辑于2023年，星期四比色法测定原理加氯仿使栓剂基质溶解后，用盐酸液（9→100）提取盐酸克仑特罗，加亚硝酸钠试液后，则分子中的芳伯氨基重氮化，在酸性溶液中，与N－（1－萘基）－乙二胺偶合显色，在500nm波长处进行比色测定。[N2]+Cl-ClClCH(OH)CH2NHC(CH3)3NHCH2CH2NH2第六十一页，共七十页，编辑于2023年，星期四供试品溶液的制备:取本品20粒，精密称定，切成小片，精密称取适量（约相当于盐酸克仑特罗0.36mg），置分液漏斗中，加温热的氯仿20ml使溶解，用盐酸溶液（9→100）振摇提取3次（20、15、10ml），分取酸提取液，置50ml量