LabAlliace高效液相色谱系统培训教材增加

天津兰博实验仪器设备LabAlliace高效液相色谱系统培训教材一、液相色谱系统的基本原理1、色谱法分类按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。气相色谱法适用于分离挥发性化合物。GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。此外还有超临界流体色谱法(SFC)，它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（常用CO2），因其扩散系数大，能很快达到平衡，故分析时间短，特别适用于手性化合物的拆分。按原理分为吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC，又称分子筛、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC）和亲和色谱法。(此外还有电泳)。按操作形式可分为纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法。2、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationaryphase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(HighPressureLiquidChromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(HighSpeedLiquidChromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。3、HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：高压—压力可达150~300kg/cm2。色谱柱每米降压为75kg/cm2以上。高速—流速为0.1~100.0ml/min。高效—可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度—紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快—通常分析一个样品在15~30min，有些样品甚至在5min内即可完成。泊分辨霜率高潮—可圾选择蜘固定涌相和画流动芬相以揪达到御最佳午分离应效果参。特灵敏伤度高兄—紫穴外检尊测器享可达义0.烟01聪ng殿，荧岩光和捡电化版学检计测器绞可达柴0.父1p躁g。夺柱子饮可反卧复使此用—需用一认根色摧谱柱红可分降离不淘同的障化合为物。剂样品依量少锄，容朋易回若收—差样品渠经过俊色谱展柱后讯不被泄破坏霉，可会以收洋集单蜡一组解分或还做制掏备。窄4且、慕高效饶液相绵色谱捆分离更原理势高效朵液相版色谱堂法按它分离淹机制客的不听同分养为液鄙固吸滨附色亏谱法炕、液爸液分信配色祸谱法协（正漂相与评反相尝）、扣离子沸交换伴色谱揭法、叹离子更对色材谱法夸及分剑子排教阻色窗谱法赶。骨a肉．液莲固色教谱法搂使械用固欣体吸愈附剂器，被明分离条组分邪在色槽谱柱爸上分部离原必理是畅根据词固定晓相对成组分悲吸附伏力大购小不伯同而短分离凉。分疼离过耗程是说一个销吸附因－解厕吸附夸的平熊衡过迷程。搬常用禁的吸秤附剂抬为硅抚胶或劲氧化四铝，仔粒度底5~贪10机μm钥。适础用于秀分离任分子潮量2谁00宵~1通00浊0的亡组分山，大赴多数诉用于兰非离福子型掠化合赞物，扒离子谋型化涌合物妥易产项生拖餐尾。滤常用含于分拦离同膛分异伯构体策。岁b储．液汇液色艰谱法槽使竿用将寻特定葬的液闲态物监质涂观于担剧体表批面，描或化扩学键碗合于缩担体污表面悟而形尊成的暂固定节相，壤分离蹦原理当是根扰据被密分离乱的组牙分在牺流动企相和补固定腐相中牙溶解巩度不拐同而隔分离醋。分萄离过积程是仿一个疫分配抹平衡举过程栗。钞涂布裹式固冠定相索应具泉有良搏好的同惰性总；流腰动相穿必须佛预先幸用固知定相略饱和颂，以继减少顽固定物相从钩担体逮表面脊流失泉；温落度的胞变化距和不射同批地号流录动相指的区觉别常献引起月柱子水的变火化；贼另外取在流条动相携中存梦在的场固定蒙相也邀使样示品的殖分离砍和收愿集复冰杂化像。由梨于涂伶布式体固定劝相很针难避披免固捎定液斥流失佣，现集在已挡很少异采用磨。现千在多剑采用题的是英化学猜键合足固定冠相，柴如C雨18慢、C然8参、氨兽基柱史、氰戒基柱顾和苯化基柱拌。接液液慈色谱虚法按轿固定沟相和幸流动座相的宁极性或不同绝可分亿为正影相色扰谱法姥(N绸PC牢)和傲反相做色谱如法(纪RP宋C)度。循正相撒色谱忆法极采用象极性者固定棵相(冒如聚顿乙二愚醇、飘氨基图与腈凑基键封合相休)；贤流动离相为坟相对诱非极任性的鞭疏水仔性溶终剂(选烷烃卫类如源正已功烷、锣环已肃烷）恶，常道加入配乙醇劳、异鞋丙醇即、四争氢呋赤喃、仇三氯兴甲烷拨等以活调节纱组分边的保等留时慧间。柜常用想于分缓离中合等极间性和面极性动较强尸的化登合物德(如寺酚类扣、胺免类、饭羰基榴类及烟氨基拣酸类椒等）唱。子反相济色谱辉法内一般宅用非蔽极性塑固定若相（硬如C谋18喊、C靠8貌）；许流动焰相为绩水或宣缓冲泥液，乒常加捐入甲种醇、促乙腈凶、异提丙醇涨、丙鉴酮、牲四氢弹呋喃豪等与老水互宫溶的赞有机龟溶剂钞以调珍节保椅留时创间。淘适用册于分播离非霜极性踪和极座性较楼弱的折化合蒙物。也RP槐C在券现代糊液相辜色谱侄中应抹用最夫为广彼泛，荡据统坦计，躺它占棒整个汽HP献LC锯应用没的8孟0%倒左右尸。依随着庸柱填掀料的缘快速粪发展怒，反联相色孟谱法绿的应掠用范者围逐训渐扩醒大，辱现已想应用浪于某忍些无眨机样桂品或砍易解最离样椒品的驼分析势。为反控制伤样品项在分茅析过搜程的桥解离命，常道用缓追冲液扫控制哪流动碑相的烟pH熄值。轮但需谜要注植意的街是，忙C悉18锯和C耽8傅使用释的p晃H值咱通常狮为2镜.5倍~7掩.5热（2蓄~8蚊），茅太高厨的p交H值纸会使垒硅胶旷溶解樱，太泥低的级pH控值会雄使键治合的砌烷基夹脱落集。有某报告纤新商曲品柱供可在畜pH贝1悟.5焰~1卧0范惕围操触作。余正相崖色谱算法与顾反相雄色谱齐法比茶较表旬正相拔色谱扎法炎宋绑派反相流色谱采法泪固定票相极效性寻高～茂中辞柔欧御梳脉享刚痰寸攀胸中～跳低抗流动瞒相极采性柏低～闸中咐京维捐拔弄致慧舍蛾敞弟中～卖高切组分捷洗脱耀次序逐极性酸小先卧洗出抱侮蛇败穴煤这棵迟极响性大馆先洗黄出狠从上泉表可仇看出锻，当颜极性鞋为中融等时依正相皇色谱包法与撒反相咸色谱张法没淡有明艇显的湿界线控（如泪氨基氏键合吵固定嚷相）彼。辣c论．离神子交用换色胶谱法侧固拿定相牌是离黑子交危换树霸脂，漏常用夺苯乙廉烯与且二乙宏烯交争联形愚成的酬聚合介物骨患架，床在表价面未脑端芳念环上膨接上恢羧基逝、磺权酸基竞（称纯阳离于子交诞换树修脂）娱或季花氨基外（阴信离子慎交换速树脂富）。雕被分疤离组战分在融色谱也柱上碰分离洪原理效是树丙脂上航可电额离离垂子与撤流动籍相中铅具有话相同畜电荷毙的离活子及篇被测轻组分量的离抱子进资行可颠逆交踏换，才根据孟各离悠子与罗离子喂交换裙基团杏具有翻不同跃的电鼠荷吸荷引力饮而分糖离。库缓冲巴液常煤用作构离子秃交换卖色谱宫的流童动相台。被胸分离吓组分姜在离钓子交月换柱成中的先保留爪时间着除跟博组分晃离子涝与树曾脂上诵的离绝子交酬换基悟团作忍用强吨弱有滚关外之，它软还受许流动扰相的保pH哀值和运离子厕强度懂影响叼。p忧H值轰可改自变化撤合物驴的解愧离程夺度，干进而虽影响岩其与朝固定吃相的锄作用拦。流匹动相衔的盐量浓度含大，盯则离忍子强刺度高逢，不微利于蹦样品未的解谱离，避导致宴样品知较快总流出俗。贸离子矛交换斑色谱饮法主肠要用卖于分旬析有圣机酸蜂、氨百基酸相、多存肽及集核酸声。淋d赛．离戒子对沸色谱铺法豆又称商偶离失子色再谱法斥，是稍液液霞色谱啄法的治分支墙。它番是根量据被责测组露分离酬子与雾离子告对试元剂离照子形夫成中迎性的撇离子冶对化衰合物椅后，妹在非除极性拜固定读相中首溶解卷度增德大，眯从而布使其煤分离偷效果今改善控。主压要用皆于分左析离安子强锻度大态的酸疤碱物淡质。袍分析乘碱性临物质娱常用语的离诱子对涉试剂林为烷剪基磺俊酸盐踪，如发戊烷牲磺酸师钠、静辛烷蛋磺酸煤钠等摆。另冲外高织氯酸必、三套氟乙欠酸也蔑可与之多种刊碱性筹样品僵形成叫很强耗的离岛子对造。嘉分析票酸性戴物质扮常用歉四丁悲基季废铵盐疏，如熔四丁焰基溴克化铵春、四唇丁基体铵磷独酸盐田。蝴离子牢对色修谱法态常用丑OD披S柱眠（即音C思18秧）储，流峰动相锦为甲皱醇-晓水或记乙腈隶-水松，水窄中加席入3瞒~1非0阁mo蚕l/后L的符离子羞对试约剂，占在一首定的研pH皂值范遭围内颗进行五分离算。被封测组挣分保丧时间庭与离构子对纵性质惊、浓番度、搜流动浩相组翁成及甚其p正H值泉、离乏子强构度有键关。吉e觉．排等阻色孔谱法刘固川定相扑是有灰一定被孔径针的多钟孔性秃填料雷，流尝动相厅是可旬以溶堵解样商品的班溶剂熟。小兆分子顶量的计化合削物可煤以进向入孔归中，武滞留称时间幼长；劈大分善子量望的化掏合物粱不能歪进入斤孔中竞，直庆接随狗流动杜相流甘出。惩它利悟用分抹子筛圆对分怒子量仓大小缎不同指的各纽组分升排阻备能力拌的差其异而元完成土分离塘。常辆用于国分离闹高分君子化约合物钟，如截组织黑提取献物、弦多肽疫、蛋照白质倾、核翻酸等联。尽5、甘固定统相和哥流动畜相它在色谱谱分句析中族，如闯何选蜓择最两佳的兆色谱涝条件站以实诵现最虹理想鬼分离秒，是枣色谱峡工作调者的工重要欣工作美，也妈是用饼计算悄机实愉现H瞧PL古C分困析方界法建带立和符优化刺的任咱务之傅一。练本贯节督着重箭讨论城填料然基质役、化滤学键修合固哨定相强和流距动相兔的性额质及活其选道择。虎（1抖）穴基质就（担黄体）围HP钉LC身填料坡可以盗是陶觉瓷性章质的标无机仅物基透质，绣也可惠以是绢有机削聚合共物基竹质。亡无机愧物基辽质主研要是汽硅胶帝和氧朵化铝缸。无绪机物仿基质怖刚性倘大，膛在溶忠剂中摘不容蒸易膨睛胀。艳有机故聚合理物基龙质主蚊要有寿交联繁苯乙粒烯-表二乙朝烯苯犹、聚桶甲基独丙烯注酸酯笛。有兽机聚串合物舅基质挖刚性盯小、冶易压击缩，袭溶剂腐或溶杰质容膜易渗嫩入有炼机基贵质中援，导脾致填催料颗侨粒膨诉胀，四结果汤减少零传质炕，最滤终使汪柱效贤降低渠。活A径基质泳的种信类间1）首硅胶椒硅胶铜是H风PL枯C填筒料中退最普仓遍的半基质刊。除早具有花高强县度外澡，还闯提供激一个表表面街，可线以通坚过成搂熟的技硅烷两化技阳术键抱合上秩各种位配基辆，制奇成反望相、物离子诸交换查、疏陕水作棚用、蚀亲水竖作用贝或分练子排合阻色寸谱用鉴填料贱。硅阻胶基馆质填凤料适惠用于系广泛歌的极报性和驼非极限性溶睡剂。键缺点勉是在现碱性译水溶闯性流另动相鼠中不懒稳定险。通酸常，逗硅胶牧基质跳的填库料推友荐的估常规饥分析形pH惧范围吨为2际~8巩。梅硅胶巴的主形要性承能参只数有洁：脖①平危均粒亡度及贡其分错布。苹②平钥均孔偶径及乘其分族布。维与比犯表面卵积成扔反比派。壳③比筝表面勒积。描在液荒固吸峡附色岛谱法乓中，挪硅胶肉的比诉表面高积越阻大，疫溶质苏的k问值越帽大。脸④含荒碳量声及表茂面覆属盖度北（率逼）。蔬在反阔相色瓣谱法特中，俗含碳可量越潜大，毅溶质立的k倍值越绪大。锄⑤含纳水量璃及表猛面活民性。渴在液岭固吸肢附色处谱法骗中，饼硅胶撑的含泊水量烈越小笑，其欠表面茫硅醇尸基的泰活性刊越强株，对办溶质密的吸据附作那用越溜大。度⑥端给基封口尾。洽在反倍相色确谱法醉中，三主要作影响凳碱性驴化合供物的购峰形妻。俱⑦几离何形笔状。殖硅胶脉可分雀为无讽定形票全多医孔硅帐胶和拾球形葬全多砌孔硅雄胶，酱前者禾价格惰较便村宜，蹲缺点络是涡割流扩宫散项束及柱彼渗透绕性差分；后户者无炕此缺慎点。隶⑧硅崖胶纯拔度。剩对称叛柱填铸料使盐用高膀纯度非硅胶推，柱忆效高线，寿要命长雷，碱浑性成谢份不辨拖尾拦。魔2）办氧化摧铝虑具有闷与硅茫胶相己同的全良好芳物理夕性质锤，也默能耐后较大耽的p团H范辅围。抛它也乱是刚速性的芳，不辛会在护溶剂合中收倍缩或莫膨胀晨。但制与硅践胶不贪同的爸是，危氧化织铝键掩合相饺在水姑性流落动相康中不砖稳定颂。不懂过现梅在已岂经出恶现了蚀在水蜻相中顿稳定琴的氧揪化铝浓键合尚相，抚并显约示出这优秀驱的p骆H稳弹定性乓。取3）迫聚合伴物带以高雕交联敏度的肯苯乙挺烯-域二乙派烯苯泽或聚仓甲基芝丙烯爱酸酯胞为基遍质的极填料酿是用判于普复通压额力下渔的H吴PL陷C，芽它们忌的压瑞力限帆度比资无机概填料高低。牵苯乙姨烯-骡二乙瓦烯苯离基质看疏水踢性强寄。使陪用任睛何流诊动相需，在爽整个咽pH淋范围劳内稳果定，嘉可以丙用N退aO词H或雹强碱袜来清获洗色稻谱柱它。甲多基丙泪烯酸馆酯基忽质本壳质上粘比苯蚊乙烯李-二解乙烯辈苯疏明水性激更强询，但聚它可森以通赤过适先当的任功能昼基修野饰变斩成亲登水性饿的。少这种吴基质使不如金苯乙殃烯-雾二乙固烯苯态那样局耐酸弓碱，以但也炎可以率承受额在p童H1切3下絮反复拿冲洗公。桑所有无聚合挪物基器质在笑流动弃相发念生变医化时负都会挽出现勉膨胀警或收攀缩。明用于球HP集LC粒的高唤交联季度聚篇合物杏填料泉，其绘膨胀非和收峰缩要御有限帝制。茎溶剂见或小脱分子吓容易坡渗入嘴聚合圣物基剑质中帅，因峰为小洪分子好在聚圾合物深基质沸中的退传质私比在罩陶瓷受性基茄质中集慢，惹所以赢造成欺小分拘子在百这种跌基质阶中柱闯效低市。对火于大逃分子傲像蛋浅白质西或合烘成的衔高聚湿物，昏聚合的物基坡质的争效能柄比得锄上陶哀瓷性僚基质待。因骑此，练聚合授物基窄质广炎泛用出于分准离大僚分子耍物质教。亦B锁．基鲁质的号选择萍硅胶孟基质耗的填成料被回用于腔大部津分的溜HP脏LC级分析连，尤鞋其是遗小分姨子量栽的被集分析糖物，扣聚合吸物填盲料用厨于大暂分子柴量的宿被分棍析物亦质，公主要梳用来烂制成葛分子贸排阻社和离挺子交醋换柱公。澡硅胶至氧化速铝蜓苯乙搏烯-恨二乙泡烯苯探甲基拍丙烯交酸酯出耐有秃机溶连剂踢++抚+稻++铁+苏++栏++推适用领pH被范围灶+项++桨+汽++佛++宴抗膨据胀/价收缩仁++概+览++雄+甲+叠+厉耐压覆++冻+看++浴+退++准+赏表面惊化学督性质匀++境+捆+颂++肝++终+述效能贝++影+君++陆+辅+辨注：坝++骂+好劝++豆一般酬+差习（2总）晓化学巴键合耳固定罩相铜将有奸机官傲能团捡通过证化学字反应社共价摔键合步到硅挣胶表汗面的崇游离到羟基粒上而姐形成职的固惰定相款称为效化学叹键合仿相。嗽这类犯固定肌相的守突出粉特点太是耐志溶剂伏冲洗翁，并吃且可驱以通计过改秋变键年合相种有机缺官能繁团的谣类型黎来改总变分徒离的宴选择关性。齿A功．键旨合相上的性兽质舅目前雨，化棵学键薄合相渗广泛堂采用举微粒震多孔请硅胶金为基鼓体，鸣用烷仁烃二炮甲基兴氯硅适烷或欲烷氧晕基硅寻烷与默硅胶趴表面僵的游图离硅乌醇基宾反应监，形尾成S存i-意O-承Si抄-C零键形鼓的单荒分子皇膜而忠制得杰。硅供胶表庙面的累硅醇姜基密毅度约骨为5救个/殃nm申2，详由于违空间煌位阻味效应秩（不虏可能慌将较管大的旷有机股官能辆团键托合到奔全部当硅醇泽基上击）和弊其它回因素且的影拖响，政使得咸大约着有4叹0~隙50丧%的霉硅醇屯基未滩反应偏。购残余帅的硅滚醇基蚕对键仁合相锅的性疤能有征很大五影响米，特统别是弦对非圾极性坝键合徒相，慈它可码以减浪小键菠合相清表面宋的疏技水性县，对驱极性针溶质急（特议别是任碱性龟化合势物）阿产生价次级摄化学其吸附凯，从意而使泳保留唤机制虾复杂俯化（椅使溶捡质在险两相尽间的些平衡深速度筛减慢永，降苦低了忧键合料相填锄料的挖稳定鸡性。因结果猪使碱醒性组纹分的伞峰形庭拖尾姐）。陆为尽瞒量减耽少残径余硅慕醇基朵，一漂般在拉键合霉反应汤后，燥要用厘三甲毕基氯风硅烷持(T察MC折S)候等进屈行钝比化处洲理，砍称封报端（滩或称推封尾北、封专顶，希en勒d-缓ca虑pp殊in蜜g）绪，以湿提高之键合秋相的泽稳定薪性。创另一粥方面料，也暑有些弯OD既S填矩料是阁不封苹尾的宝，以诞使其禽与水静系流斑动相树有更宇好的列“湿潜润”右性能辉。竿由于惑不同准生产锁厂家就所用聋的硅炼胶、共硅烷云化试念剂和据反应犬条件积不同攻，因锁此具胁有相忍同键抓合基罪团的思键合令相，授其表杏面有疤机官馒能团禽的键址合量胡往往蛾差别井很大网，使油其产沃品性眨能有粥很大似的不河同。控键合哄相的局键合唐量常触用含君碳量式(C监%)姑来表驰示，吗也可免以用贸覆盖伸度来释表示僚。所片谓覆判盖度刺是指橡参与仅反应香的硅迟醇基干数目企占硅习胶表拆面硅俊醇基弟总数药的比傍例。趋pH您值对何以硅蓬胶为胸基质固的键女合相彼的稳利定性肃有很伤大的践影响秩，一签般来旧说，便硅胶采键合辣相应牌在p桨H=还2~谈8的疯介质窑中使稀用。瓣B饺．键稳合相惯的种躁类洒化学克键合弃相按赢键合谎官能去团的诱极性呼分为彩极性忘和非守极性拼键合矮相两地种。折常用豪的极筐性键鞠合相办主要学有氰件基(裕-C禁N)外、氨睡基(装-N瓶H2绘)和杠二醇茂基(抵DI叉OL皂)键票合相届。极丽性键柔合相屈常用样作正邻相色司谱，脸混合胳物在顷极性秆键合住相上纸的分跃离主予要是奏基于弯极性承键合持基团那与溶佳质分朋子间询的氢腹键作锦用，盯极性滚强的遗组分科保留橡值较感大。妹极性倘键合降相有捏时也况可作垂反相拨色谱泳的固促定相氧。霉常用弹的非忌极性煤键合壁相主做要有捕各种抚烷基目(C静1~锄C1食8)赞和苯奉基、欠苯甲翁基等着，以色C1社8应柳用最天广。付非极浅性键伙合相啄的烷隙基链方长对刷样品警容量如、溶派质的互保留惠值和熟分离胸选择喂性都第有影象响，颂一般矮来说效，样炭品容钟量随蛾烷基继链长替增加怕而增朵大，广且长睛链烷面基可川使溶链质的稼保留叠值增桐大，绑并常叉常可航改善乘分离晕的选远择性梅；但顽短链厨烷基贱键合免相具鱼有较峡高的书覆盖俘度，红分离米极性市化合询物时鲜可得陵到对德称性闯较好茄的色柳谱峰浮。苯留基键基合相越与短顶链烷度基键引合相昌的性发质相楼似。夸另外烤C1蒸8柱智稳定楼性较柜高，鼓这是森由于扛长的般烷基却链保疗护了赢硅胶表基质惯的缘禾故，辫但C荒18哥基团充空间研体积废较大眨，使弯有效尺孔径蚕变小幼，分栗离大蛾分子佛化合冒物时搁柱效争较低谱。冒C辆．固闻定相间的选甲择祸分离燃中等鼻极性搜和极逃性较院强的毕化合篮物可课选择叉极性壶键合诉相。脆氰基睬键合跃相对艳双键掀异构灯体或满含双仗键数独不等针的环斑状化问合物巾的分顷离有秆较好挽的选坐择性予。氨啦基键宽合相秧具有巧较强例的氢哀键结犁合能照力，京对某落些多击官能缸团化制合物话如甾乘体、脊强心她甙等啄有较怖好的脚分离浴能力取；氨摄基键赠合相朋上的朽氨基修能与剖糖类益分子滔中的直羟基驰产生殃选择日性相封互作守用，辣故被普广泛莲用于吉糖类宋的分述析，饺但它惊不能未用于煌分离命羰基住化合猾物，涂如甾困酮、堂还原植糖等廊，因印为它吐们之缎间会诱发生粮反应醋生成脊Sc万hi扯ff缠碱洁。二臣醇基股键合渗相适掩用于帮分离宏有机甚酸、泻甾体尽和蛋咸白质悼。特分离胃非极润性和客极性吐较弱龟的化牢合物愧可选顶择非膏极性烛键合宴相。艘利用熔特殊反的反饥相色益谱技争术，困例如殖反相秘离子鉴抑制负技术京和反丸相离姿子对闸色谱合法等妇，非歉极性司键合父相也稠可用我于分旬离离葛子型莫或可诊离子展化的血化合魔物。姻OD贩S(屿O被ct期ad染ec鉴yl穴s们il络an野e)脸是应宅用最保为广森泛的告非极束性键窝合相傅，它帮对各快种类饲型的控化合号物都表有很玻强的俘适应短能力帆。短许链烷远基键锣合相默能用雕于极加性化浴合物姓的分胳离，搏而苯枪基键滋合相柱适用烈于分躬离芳农香化岸合物拍。壮另外痰，美烦国药果典对田色谱煌法规童定较踪严，迫它规煤定了横柱的殃长度让，填运料的开种类莲和粒班度，哪填料委分类佣也较桶详细率，这背样使佩色谱机图易跳于重呢现；秘而中庄国药庙典仅志规定忧填料束种类痒，未思规定递柱的便长度榴和粒远度，慢这使种检验赠人员犹难于绸重现之实验省，在熔某些腥情况般下还毙浪费捷时间附和试县剂。电（3震）侧、流添动相刺A允．流炸动相凡的性衫质要沙求脚一个握理想赏的液厘相色惠谱流抛动相习溶剂拉应具枕有低提粘度途、与邻检测翁器兼榴容性叔好、悉易于振得到杜纯品况和低洗毒性补等特疾征。帽选好序填料慌（固润定相纱）后蹲，强喜溶剂奏使溶存质在宅填料举表面争的吸衔附减太少，旁相应莫的容逗量因值子k祸降低术；而拆较弱则的溶奋剂使势溶质燕在填售料表截面吸顽附增希加，正相应声的容防量因希子k敢升高称。因圆此，台k值嫌是流彻动相减组成大的函易数。抬塔板致数N理一般裙与流哭动相纹的粘扬度成凶反比描。所凡以选伤择流应动相单时应诚考虑舅以下瞒几个绝方面都：松①流宴动相也应不溉改变育填料踏的任漂何性米质。际低交窜联度爹的离叫子交喝换树嘴脂和道排阻敞色谱丑填料预有时轮遇到示某些贴有机责相会波溶胀榨或收喇缩，曾从而豪改变冈色谱悄柱填仔床的少性质根。碱箭性流洋动相拣不能烤用于篮硅胶遮柱系贝统。冰酸性吧流动味相不睬能用锤于氧育化铝柔、氧敬化镁称等吸惠附剂箭的柱么系统拳。并②纯暗度。固色谱痛柱的汤寿命雾与大盈量流竖动相响通过续有关播，特捷别是惊当溶陈剂所需含杂秤质在贡柱上担积累局时。粪③必协须与话检测秀器匹赴配。素使用翻UV谦检测渣器时箱，所仆用流朴动相惕在检责测波淘长下季应没吐有吸势收，搏或吸究收很目小。卸当使成用示末差折有光检混测器米时，膨应选惧择折滤光系镇数与组样品赠差别匆较大显的溶殖剂作讽流动镇相，跪以提庸高灵厕敏度傅。校④粘孤度要悄低（口应<羞2c跪p）际。高倒粘度鞠溶剂群会影正响溶嚼质的鱼扩散疏、传欧质，伍降低仅柱效释，还答会使除柱压锤降增凤加，章使分梢离时竟间延启长。梢最好赵选择授沸点耻在您10框0℃喂以下将的流啦动相浴。将⑤对赔样品场的溶幕解度驱要适屑宜。失如果柴溶解赴度欠愈佳，掀样品察会在训柱头夹沉淀报，不淡但影驼响了驱纯化胶分离全，且递会使骆柱子施恶化枪。纷⑥样见品易猎于回烛收。傍应选邪用挥巧发性烈溶剂筒。杂B岗．流匹动相语的选牵择吐在化扰学键承合相宅色谱幕法中划，溶昨剂的遇洗脱市能力复直接册与它透的极兆性相泰关。损在正渡相色凶谱中悠，溶技剂的领强度纠随极霜性的酿增强仓而增贯加；性在反辣相色斤谱中喊，溶魄剂的援强度旁随极怖性的手增强前而减跨弱。程正相晕色谱乳的流彩动相西通常既采用卫烷烃索加适比量极响性调挤整剂肚。稀反相童色谱滨的流费动相纯通常挺以水跳作基似础溶斩剂，帆再加倒入一戴定量价的能毁与水申互溶镜的极海性调留整剂起，如丽甲醇蜡、乙观腈、系四氢乱呋喃窗等。恭极性度调整斥剂的免性质匆及其币所占喉比例戚对溶敲质的紫保留狸值和指分离悄选择晶性有洽显著低影响上。一繁般情焰况下废，甲欺醇-逐水系风统已顽能满孤足多炸数样亩品的亮分离深要求舱，且啊流动栏相粘轰度小违、价汉格低膨，是夹反相朵色谱板最常燃用的子流动绩相。谎但S熄ny烘de券r则问推荐墙采用禾乙腈避-水说系统锄做初盗始实哭验，匀因为掀与甲段醇相杆比，挺乙腈驻的溶云剂强傍度较柱高且接粘度够较小应，并疏可满窝足在啦紫外躬18旷5~姥20最5n匪m处于检测蛮的要冻求，祖因此践，综零合来箭看，改乙腈析-水驰系统纸要优直于甲盖醇-寻水系丹统。并在分梨离含喜极性群差别昼较大点的多与组分伙样品僻时，木为了由使各棕组分架均有尘合适辣的k义值并浊分离冒良好丢，也驶需采更用梯笨度洗仓脱技萍术。它参考渗资料解：吃乙腈旺的毒贿性是舒甲醇坑的5郊倍，搬是乙兴醇的劳25兔倍。按价格贤是甲完醇的肠6~平7倍攻。眉反相骡色谱益中，棵如果堪要在议相同溉的时填间内享分离必同一殖组样旅品，添甲醇柏/水估作为仓冲洗推剂时枣其冲洒洗强茅度配蜡比与殿乙腈亩/水驻或四袄氢呋吐喃/思水的瑞冲洗田强度绝配比烈有如畏下关欠系：炭C众乙腈磁＝渔0.场32顿C贩2元甲醇汗＋即0.距57朗C臭甲醇数C斩四氢搅呋喃浓＝订0.势66鼓C努甲醇唯C为棉不同懒有机神溶剂璃与水滴混合雾的体煌积百借分含楚量。酱10艺0%修甲醇仍的冲脾洗强谈度相迟当于具89茎%的惑乙腈续/水往或6季6%义的四芦氢呋杀喃/峡水的控冲洗泄强度炉。抓C润．流毙动相愚的p足H值脾采用乐反相司色谱肝法分旺离弱俗酸（驶3≤份pK礼a≤枕7）四或弱遵碱（冶7≤腔pK寺a≤伟8）怨样品劫时，芬通过钳调节烦流动摘相的速pH支值，倚以抑轮制样与品组饼分的指解离悲，增籍加组护分在寺固定您相上稻的保晃留，窄并改消善峰占形的虑技术确称为忍反相燕离子尾抑制村技术尘。对虹于弱括酸，号流动烈相的榨pH庙值越境小，亮组分绑的k棍值越梯大，援当p蜻H值组远远犯小于坟弱酸点的p归Ka效值时押，弱尼酸主颈要以谷分子观形式悼存在艰；对健弱碱至，情扫况相麦反。救分析灶弱酸跌样品觉时，落通常半在流鹿动相蔽中加输入少症量弱宪酸，杠常用虽50芳mm赌ol泼/L由磷酸爽盐缓旋冲液境和1饺%醋调酸溶格液；牙分析掉弱碱兵样品神时，集通常胜在流厨动相止中加药入少情量弱升碱，广常用俗50关mm上ol臣/L游磷酸百盐缓缴冲液深和3把0m肯mo掌l/女L三筒乙胺丰溶液兵。抚注：鹅流动付相中适加入模有机转胺可蹲以减很弱碱由性溶闲质与掀残余悔硅醇夸基的网强相挂互作灰用，虽减轻叙或消迈除峰瑞拖尾和现象决。所悄以在尺这种铜情况寿下有美机胺机（如封三乙顽胺）吸又称扬为减废尾剂萌或除底尾剂愧。娃D千．流朋动相童的脱浑气部HP垒LC酒所用另流动锅相必啦须预尾先脱染气，圣否则漆容易勒在系让统内迫逸出品气泡词，影这响泵流的工叮作。河气泡辱还会返影响习柱的荒分离节效率尖，影趣响检付测器澡的灵熟敏度注、基券线稳跳定性纸，甚扮至使牲无法凭检测焰。（葱噪声恋增大互，基我线不蛇稳，灿突然惧跳动算）。顺此外寇，溶天解在湖流动劈相中嫂的氧遵还可投能与快样品冰、流而动相腐甚至咳固定酬相（政如烷率基胺娇）反呆应。闸溶解据气体笑还会罢引起过溶剂俊pH臣的变呜化，盾对分欠离或途分析错结果括带来年误差肺。泽溶解福氧能游与某守些溶渠剂（泽如甲拢醇、甩四氢稠呋喃忌）形今成有构紫外拾吸收腔的络贤合物茶，此岔络合砍物会脏提高迎背景叠吸收牛（特耕别是方在2匠60腰nm炎以下挂），译并导祥致检昼测灵兆敏度捐的轻吓微降兰低，乒但更斯重要丝的是狸，会骂在梯饥度淋稼洗时告造成叶基线高漂移斥或形缓成鬼效峰（渣假峰寇）。盐在荧误光检拼测中系，溶攻解氧饼在一书定条造件下劲还会货引起痰淬灭衬现象心，特邪别是采对芳掩香烃练、脂良肪醛砍、酮江等。纤在某富些情及况下业，荧陡光响扩应可除降低航达9诸5%挡。在返电化词学检搞测中果（特锁别是腐还原缘电化大学法持），蚕氧的厕影响磨更大嘱。沙除去竿流动敌相中先的溶指解氧秀将大汤大提塘高U路V检玉测器还的性猾能，轧也将僚改善鸟在一牧些荧屑光检奋测应授用中淘的灵园敏度偶。常阶用的宁脱气鸦方法怎有：贺加热睁煮沸圆、抽振真空线、超脆声、伤吹氦圣等。研对混悦合溶搬剂，贡若采著用抽属气或拦煮沸咬法，袭则需保要考财虑低攻沸点破溶剂鹊挥发败造成丸的组等成变县化。卵超声吼脱气吉比较渗好，舌10轻~2秆0分而钟的立超声怨处理画对许热多有给机溶选剂或化有机被溶剂惠/水砌混合径液的罚脱气栗是足嘱够了嚼（一购般5皆00肾ml埋溶液愤需超舱声2悄0~抓30撒mi曲n方鞭可）吉，此观法不森影响困溶剂执组成束。超辅声时况应注赌意避抵免溶缎剂瓶会与超瑞声槽猴底部火或壁折接触哀，以真免玻蝶璃瓶墨破裂束，容享器内胡液面誉不要耀高出亩水面堂太多术。种离线奉（系今统外尿）脱亭气法情不能菊维持知溶剂昏的脱析气状什态，派在你结停止钟脱气窃后，奔气体任立即莫开始还回到辩溶剂尿中。因在1惜~4主小时改内，宽溶剂河又将助被环筑境气瓶体所仙饱和与。撕在线纤（系碧统内再）脱晶气法啊无此即缺点作。最正常用缠的在寺线脱叛气法边为鼓筐泡，考即在锹色谱蠢操作诱前和虑进行浮时，春将惰忆性气士体喷劣入溶涌剂中费。严挤格来乱说，谋此方德法不惯能将精溶剂扩脱气牺，它主只是乐用一钻种低倾溶解煎度的绵惰性仙气体东（通嘴常是航氦）持将空稼气替始换出洒来。升此外流还有来在线终脱气雀机。碍一般道说来弟有机毫溶剂记中的喊气体极易脱迷除，谎而水遍溶液影中的秋气体煌较顽裤固。筋在溶紧液中段吹氦没是相蹄当有掉效的倘脱气软方法向，这春种连离续脱酸气法徐在电社化学陈检测蛾时经叫常使椒用。滔但氦饭气昂域贵，塔难于刮普及常。两E脖．流构动相云的滤斜过垒所有燥溶剂的使用伸前都给必须准经0悄.4意5&哈mi茅cr回o;嫁m（毯或0装.2幻2&惹mi圾cr助o;就m）河滤过的，以惰除去樱杂质揪微粒弄，色涨谱纯芦试剂花也不狡例外拼（除封非在榆标签候上标同明“灶已滤鲁过”坊）。烟用滤业膜过茂滤时辩，特奸别要野注意排分清识有机旁相（期脂溶央性）偏滤膜梁和水酿相（寺水溶挨性）畅滤膜器。有挂机相刻滤膜码一般灵用于爬过滤任有机怜溶剂饥，过芳滤水膏溶液吊时流旧速低耳或滤仆不动诵。水药相滤胡膜只高能用命于过畅滤水体溶液计，严骑禁用傲于有寒机溶庸剂，测否则般滤膜应会被黎溶解变！溶播有滤印膜的逐溶剂捞不得笑用于僻HP汉LC银。对铲于混枪合流查动相绳，可拾在混奶合前咳分别狮滤过值，如妻需混犬合后置滤过饺，首叛选有茫机相匪滤膜口。现己在已鸡有混炊合型他滤膜愚出售惨。飞F轻．流前动相功的贮胞存欺流动晚相一匹般贮脊存于腿玻璃火、聚穿四氟葛乙烯况或不远锈钢技容器聪内，桐不能台贮存赶在塑步料容喂器中皮。因骆许多前有机糖溶剂蔑如甲失醇、拖乙酸脾等可闪浸出诞塑料崇表面狭的增栽塑剂江，导悦致溶葛剂受枕污染胆。这撇种被英污染湾的溶烧剂如改用于羡HP驼LC溪系统闻，可吩能造瑞成柱绍效降叔低。踏贮存蛮容器啄一定济要盖饼严，赔防止露溶剂间挥发倚引起岸组成盼变化宣，也昆防止使氧和技二氧交化碳凑溶入威流动蛙相。考磷酸珠盐、北乙酸桥盐缓隙冲液侍很易油长霉孙，应福尽量念新鲜钓配制漂使用唤，不明要贮环存。坚如确垃需贮穷存，握可在弃冰箱颗内冷别藏，州并在拉3天蝇内使宰用，替用前啦应重皇新滤抽过。迈容器舍应定完期清江洗，扶特别购是盛兆水、减缓冲完液和邀混合挥溶液善的瓶祸子，狐以除画去底白部的止杂质洽沉淀着和可忌能生茫长的藏微生贯物。膊因甲不醇有苗防腐馒作用旷，所抹以盛夹甲醇软的瓶搬子无五此现家象。季G喜．卤切代有喝机溶有剂应屡特别火注意疾的问富题蚂卤代袖溶剂课可能栗含有刚微量预的酸咽性杂眼质，怨能与货HP堂LC缝系统土中的渐不锈宽钢反稼应。灵卤代教溶剂偿与水厘的混尤合物逐比较桃容易寨分解验，不扶能存诱放太熊久。哑卤代明溶剂域（如易CC腊l4献、C它HC饥l3价等）熟与各报种醚心类（己如乙广醚、热二异案丙醚桂、四软氢呋役喃等博）混钥合后坝，可费能会哈反应闻生成馋一些例对不校锈钢塔有较羡大腐姻蚀性依的产痕物，便这种袋混合代流动升相应汪尽量兵不采含用，蚀或新吸鲜配庄制。缓此外杀，卤盯代溶沉剂（卷如C刘H2齿Cl揭2）极与一根些反弃应性垮有机论溶剂挖（如您乙腈旁）混申合静臣置时候，还串会产述生结筝晶。饲总之灵，卤阻代溶怪剂最谜好新之鲜配肾制使桂用。填如果匀是和鼻干燥泪的饱籍和烷买烃混后合，嫁则不俊会产驰生类弓似问合题。设H喘．H向PL土C用狡水挎HP如LC祥应用举中要构求超除纯水缴，如缴检测归器基竞线的剥校正订和反抖相柱扁的洗剪脱。朵进行切HP邮LC敢、G肿C、爪电泳例和荧赖光分蹲析，萍或在黑涉及合组织挥培养洒时，活没有公有机青物污千染是较非常绢重要摧的。愧测高拉锰酸辨钾颜骆色保烫留时棵间的仔定性殃方法督反应伐慢，季对很晋低水耀平的齿有机号物（融对H轮PL俩C可狭能还生是太涉高了丝）不却够灵皆敏，裳特别造是不枕能定魄量。停总有炸机碳诊(T办OC辰)分播析仪闻（把孕有机投物氧穴化成锯CO姥2，要测游亮离的加CO酿2）犹常用仗于I孔类（督NC砖CL堤S）谦水中妙低浓浮度有暮机物蓝的测呢定。勒I类浸水标槽准：逗NC群CL托S牲AS疲TM推电阻济率，月MΩ臣·c凉m，残25如℃释，最宽小铺10否.0庄18冲.0扯硅酸偏盐，种mg职/L怕，最分大办0.逗05辅0.轿00苍3叹微粒舌，&佳mi唉cr棋o;经m滤渴器瑞0.巧22赞0.尺2需微生免物，坡CF陡U/仓ml养10惭分三仔档乱美国稍药典价24荷版（毕20盟00防年）棒要求葬TO柔C＜青0.锋5泥mg由/L版（用造标准逮蔗糖界溶液伤1.陷19吩m唤g/为L）裕，电骗导率压在室的温p倒H勺6时服≤2辜.4积&铁mi谜cr娃o;堆S/筋cm纠（即消≥森0.恳42圾M县Ω·单cm虎）。炭HP顶LC衔级水慈增加机吸收僵特性圾：在移1c辉m现池中智，用秋超纯赞水作副空白赏，在涨19输0n福m、井20稻0n被m和究25毫0~销40肠0n盖m的偿吸收晕度分跨别不殃得过素0.治01诵、0奥.0诵1和锻0.少05卸。增暮加不泻挥发粒物，应≤3滔pp钥m（忠中国霉药典娇纯水滋≤1告0p悄pm死）。斩二脉、L恋ab安Al态li库an式ce哲液矿相色立谱米系统骄组成泵愚进样效器呢色谱多柱（倦柱温嚼箱）驳检测纤器奋工作竖站壳柱后译衍生蛛装置调节流速调节流速开泵/关泵模式切换出口单向阀入口单向阀泵头旁通阀出口过滤器域Se肝ri翼es追Ⅲ询泵苍前视造图勒手动转进样县阀投AS族10令00适/3充00页0自孔动进卸样器链色谱负柱妈20缝1型成检测违器赔La念bA抄ll棚ia俘nc踩e均工作膛站界岗面圈三次、什La骆bA胜ll并ia宏nc汉e痛液相凯色谱奸系统裕常见蓝使用腥故障躺及维寺护眨1、亡泵的适使用途和维地护注毫意事贡项毯为了王延长韵泵的束使用晌寿命抓和维之持其乱输液汉的稳冒定性绞，必添须按盒照下匀列注五意事吹项进抢行操抽作：走①防陈止任而何固占体微漠粒进乳入泵忧体，尸因为母尘埃淋或其愚它任便何杂隙质微际粒都轿会磨巨损柱脚塞、障密封凳圈妻、缸乳体和狮单向柳阀，思因此夕应预饥先除结去流美动相顿中的拿任何叠固体饺微粒牌。流汇动相慌最好糖用尼微孔箭滤膜支（努0.炊2唱或够0.呢45汇um奉）旨过滤原。泵唐的入起口都矩应连礼接纸0.蛋2u仙m过文滤头灶（或园片）升。泵舞的滤萌头菠应经盒常清粥洗或宁更换邀。陵②流鞭动相棉不应袍含有笑任何豆腐蚀宋性物斥质，建含有竹缓冲士液的腾流动氧相不抱应保备留在耳泵内哗，尤佛其是障在停扎泵过例夜或波更长坝时间浙的情貌况下嗽。如情果将应含缓知冲液睛的流搞动相错留在京泵内果，由中于蒸迁发或俯泄漏猫，甚捧至只遭是由火于溶窗液的落静置王，就极可能基析出源盐的寒微细串晶体那，这揉些晶肚体将蚁和上订述固想体微距粒一同样损法坏密剂封环社和柱丢塞等奋。因竭此，妈必须壮泵入更纯水获将泵脉充分血清洗凉后，拐再换秃成适洽合于肺色谱叶柱保束存和刑有利帖于泵认维护拦的溶扮剂（滩对于舰反相改键合右硅胶互固定圣相，器可以楼是甲奸醇或喇甲醇察-水瞧）。辆③泵嗓工作侵时要渔留心患防止绸溶剂重瓶内串的流学动相夕被用尤完，战否则物空泵铺运转真也会绩磨损邀柱塞仪、缸潮体或就密封粱环，怕最终紧产生宴漏液胆。诞④输西液泵狼的工杏作压刷力决君不要恭超过缘规定纯的最帜高压赖力，望否则块会使碍高压你密封妨环变怨形，辫产生卵漏液带。胳⑤流获动相笛应该修先脱恳气，耻以免辩在泵院内产茧生气圈泡，偶影响伏流量维的稳篇定性芳，如快果有诚大量她气泡声，泵低就无徒法正文常工到作。烟如果净输液虎泵产柿生故委障，加须查贵明原丧因，异采取谈相应耗措施堂排除扇故障啊：海没有班流动快相流财出，慎又无方压力呼指示伸。原硬因可烛能是罚泵内躲有大令量气梁体，准这时帝可打致开乡排气隶阀，提用一匙个5饿0m稿l针浴筒在挺泵出混口处亚抽出轨气体配。另约一个闪可能欺原因爆是密捡封环谦磨损穴，需没更换脚。氏②压耕力和虹流量悦不稳盈。原句因可差能是执气泡条，需旧要排惹除；盾或者丹是单顺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