脂溶性维生素的测定

脂溶性维生素的测定第一页，共十四页，编辑于2023年，星期三

脂溶性维生素的测定脂溶性维生素的理化性质：溶解性：不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、苯、乙醚等有机溶剂。耐酸碱性：VA、VD对酸不稳定，对碱稳定；

VE对酸稳定，对碱不稳定。耐热性：VA、VD、VE耐热性好，能经受煮沸耐氧化性：VA易被氧化，光、热促进氧化

VE易被氧化，光、热、碱促进氧化

VD性质稳定，不易氧化第二页，共十四页，编辑于2023年，星期三维生素A的测定

维生素A类是指含有β-白芷酮环的多烯基结构、并具有视黄醇生物活性的一大类物质。广义而言包括已经形成的维生素A和维生素A原。动物体内具有视黄醇生物活性功能的维生素A类包括视黄醇、视黄醛、视黄酸等物质，4-氧视黄酸、4-羟视黄酸等不具有视黄醇生物活性功能。维生素A分为维生素A1和维生素A2，A1主要存在于海产鱼中，A2主要存在于淡水鱼中。在植物中不含已形成的维生素A，在黄、绿、红色植物中含有类胡萝卜素，其中一部分可在体内转变成维生紊A的类胡萝卜素称为维生素A原，如α-胡萝卜素、β-l胡萝卜素、γ-胡萝卜素等。目前已经发现的类胡萝卜素约600种，仅有约1/10为维生素A原。第三页，共十四页，编辑于2023年，星期三维生素A的功能：维持正常视觉维持上皮的正常生长与分化促进生长发育抑癌作用维持机体正常免疫功能供给量与来源：1989年RDA中成人每人每天摄入维生素800ug视黄醇当量。1992年全国营养调查表明，我国城乡居民视黄醇当量平均摄入量仅为476ug，其中约2／3来自植物性食物。维生素A最好的来源是各种动物肝脏、鱼肝油、鱼卵、全奶、奶油、禽蛋等；维生素A原的良好来源是深色蔬菜和水果，如冬寒菜、菠菜、首宿、空心莱、莴笋叶、芹菜叶、胡萝卜、豌豆苗、红心红薯、椒及水果中的芒果、杏子及柿子等。第四页，共十四页，编辑于2023年，星期三（一）三氯化锑比色法1原理

维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用，生成蓝色物质，其颜色深浅与溶液中所含维生素A的含量成正比。该蓝色物质不稳定，需在一定时间内（6秒）用分光光度计于620nm波长处测定其吸光度。

2仪器实验室常用设备分光光度计回流冷凝装置3操作步骤

维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或用棕色玻璃仪器。第五页，共十四页，编辑于2023年，星期三3.1样品处理：根据样品性质，可采用皂化法或研磨法。3.1.1皂化法：适用于维生素A含量不高的样品，可减少脂溶性物质的干扰，但全部试验过程费时，且易导致维生素A损失。皂化：根据样品中维生素A含量的不同，称取0.5～5g样品于三角瓶中，加入10mL1:1氢氧化钾及20～40mL乙醇，于电热板上回流30min至皂化完全为止。

提取：洗涤：浓缩：第六页，共十四页，编辑于2023年，星期三水层皂化瓶内混合物分液漏斗1号水洗乙醚洗振摇，静置，分层水层醚层分液漏斗2号振摇，静置，分层醚层水层分液漏斗3号振摇，静置，分层醚层分液漏斗1号提取第七页，共十四页，编辑于2023年，星期三振摇，静置，分层分液漏斗1号水洗醚层水层KOH溶液洗振摇，静置，分层醚层KOH溶液层水洗振摇，静置，分层醚层水层振摇，静置，分层水洗醚层水层净化第八页，共十四页，编辑于2023年，星期三分液漏斗醚层乙醚洗涤水浴蒸馏减压抽干氯仿定容（5mL)无水硫酸钠浓缩第九页，共十四页，编辑于2023年，星期三3.1.2

研磨法：适用于每克样品维生素A含量大于5～10μg样品的测定，如肝的分析。（步骤简单，省时，结果准确。）研磨：精确称2～5g样品，放入盛有3～5倍样品重量的无水硫酸钠研钵中，研磨至样品中水分完全被吸收，并均质化。提取：小心地将全部均质化样品移入带盖的三角瓶内，准确加入50～100mL乙醚。紧压盖子，用力振摇2min，使样品中维生素A溶于乙醚中。使其自行澄清(大约需1～2h)，或离心澄清(因乙醚易挥发，气温高时应在冷水浴中操作。装乙醚的试剂瓶也应事先放入冷水浴中)浓缩：取澄清提取乙醚液2～5mL，放入比色管中，在70～80℃水浴上抽气蒸干。立即加入1mL三氯甲烷溶解残渣。第十页，共十四页，编辑于2023年，星期三3.2标准曲线制备准确取一定量的维生素A标准液于4～5个容量瓶中，以三氯甲烷配制标准系列。取相同数量比色管顺次取1mL三氯甲烷和标准系列使用液1mL，各管加入乙酸酐1滴，制成标准比色系列。于620nm波长处，以三氯甲烷调节吸光度至零点，将其标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加入9mL三氯化锑－三氯甲烷溶液。于6s内测定吸光度。以吸光度为纵坐标，以维生素A含量为横坐标绘制标准曲线图。第十一页，共十四页，编辑于2023年，星期三3.3样品测定

于一比色管中加入10mL三氯甲烷，加入1滴乙酸酐为空白液。另一比色管中加入1mL三氯甲烷，其余比色管中分别加入1mL样品溶液及1滴乙酸酐。其余步骤同标准曲线的制备。4结果计算

第十二页，共十四页，编辑于2023年，星期三（二）高效液相色谱法1.原理

样品中的维生素A及维生素E经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法C18反相柱将维生素A和维生素E分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。

第十三页，共十四页，编辑于2023