免疫细胞的分离及其表面标志检测技术

第三章免疫细胞的别离及其外表标志检测技术第一页，共四十一页。整理ppt第一节

免疫细胞的别离一、

外周血单个核细胞别离二、

淋巴细胞的别离三、

T细胞和B细胞的别离四、

T细胞亚群的别离第二页，共四十一页。整理ppt第二节淋巴细胞标志及亚群分类一、

Ｔ细胞外表标志及亚群二、B细胞外表标志三、

NK细胞外表标志第三节其他的免疫细胞第四节免疫细胞外表标志的检测及应用一、

免疫细胞外表标志的检测方法二、

淋巴细胞外表标志检测的临床意义思考题小结第三页，共四十一页。整理ppt第四页，共四十一页。整理ppt第一节免疫细胞的别离外周血单个核细胞别离淋巴细胞的别离T细胞和B细胞的别离T细胞亚群的别离第五页，共四十一页。整理ppt一、外周血单个核细胞别离外周血单个核细胞〔peripheralmononuclearcells,PMNC〕包括淋巴细胞和单核细胞〔monocyte〕。Ficoll别离液法主要用于别离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的别离法。第六页，共四十一页。整理ppt细胞别离根本原理不同细胞密度不同不同细胞外表生物学特性不同不同细胞外表分化抗原不同第七页，共四十一页。整理ppt不同细胞密度不同人的红细胞密度为1.093粒细胞密度为1.092单个核细胞〔淋巴细胞和单核细胞〕的密度为1.075-1.090第八页，共四十一页。整理ppt不同细胞密度不同第九页，共四十一页。整理ppt用1.077±0.001的分层液可将细胞别离第十页，共四十一页。整理ppt密度梯度离心(Ficoll)离心第十一页，共四十一页。整理ppt二、淋巴细胞别离贴壁粘附法吸附柱过滤法磁铁吸引法Percoll别离液法〔连续密度梯度离心〕〔去单核细胞〕第十二页，共四十一页。整理pptE花环沉降法尼龙毛柱别离法三、T细胞和B细胞的别离第十三页，共四十一页。整理ppt四、T细胞亚群的别离亲和板结合别离法磁性微球别离法荧光激活细胞别离仪别离法第十四页，共四十一页。整理ppt荧光激活细胞别离仪别离法第十五页，共四十一页。整理ppt第十六页，共四十一页。整理ppt磁珠大小可以选择第十七页，共四十一页。整理ppt大小免疫磁珠别离细胞的特点比较

比较项目大磁珠小磁珠对细胞的影响对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养。对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养。对流式细胞仪的影响阻塞流式细胞仪的喷嘴，影响散射光。可直接上流式细胞仪检测，不影响散射光。分离条件要求技术简单，分离可在试管中完成。需要很强的磁场来分离细胞。收率得率高。得率不高。纯度纯度低。纯度高。分离时间分离速度快。分离速度慢。分离成本成本低。需要很强的磁场来分离细胞，需要一次性的分离柱，不能在普通试管进行。第十八页，共四十一页。整理ppt

第十九页，共四十一页。整理ppt第二十页，共四十一页。整理ppt免疫磁珠法细胞分选过程第二十一页，共四十一页。整理ppt免疫磁珠细胞分选装置第二十二页，共四十一页。整理ppt全自动细胞分选系统第二十三页，共四十一页。整理ppt流式细胞分析仪第二十四页，共四十一页。整理ppt第二节淋巴细胞标志及亚群分类常用于鉴定和检测淋巴细胞外表标志是簇分化抗原〔Clusterofdifferentiation，CD〕。第二十五页，共四十一页。整理ppt细胞外表分化抗原〔CD抗原〕适用于T、B细胞的别离能看出CD抗原细胞亚群的别离未知CD抗原细胞亚群的别离〔阴性分选〕第二十六页，共四十一页。整理ppt一、T细胞外表标志及其亚群CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞〔helpTcell,Th〕CD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞〔cytotoxicTcell,TcorCTL〕CD4+CD25+调节性T细胞〔regulatoryTcell,TrorTreg〕第二十七页，共四十一页。整理ppt二、B细胞外表标志SmIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体，局部CD分子是B细胞的重要外表标志，其中以SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标。CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和B2细胞，B1细胞为CD19和CD5双阳性，而B2细胞仅为CD19阳性，B2细胞为通常所指的B细胞。第二十八页，共四十一页。整理ppt三、NK细胞外表标志人类NK细胞外表标志主要以CD16、CD56来认定，临床上将CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为NK细胞。第二十九页，共四十一页。整理pptT细胞及NK细胞第三十页，共四十一页。整理ppt第三节其他的免疫细胞抗原提呈类细胞外表标志第三十一页，共四十一页。整理ppt第四节免疫细胞外表标志的检测及应用免疫细胞外表标志的检测方法淋巴细胞外表标志检测的临床意义第三十二页，共四十一页。整理ppt一、免疫细胞外表标志的检测抗体致敏细胞花环法免疫细胞化学法免疫荧光法流式细胞分析法第三十三页，共四十一页。整理ppt二、淋巴细胞外表标志检测的临床意义淋巴细胞外表标志检测是评价免疫功能的重要指标。对CD4+和CD8+T细胞的测定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反响的监测。第三十四页，共四十一页。整理ppt临床常见疾病中的T淋巴细胞的变化

第三十五页，共四十一页。整理ppt思考题1.免疫细胞都包括哪些细胞？为什么要将其别离纯化？2.淋巴细胞有哪几类细胞？能用形态学的方法加以区别吗？3.将细胞别离的原理有哪些？各有什么特点？4.形态学相同的一类细胞为什么还要分亚群？5.T细胞和B细胞进一步区分亚群的依据是什么？第三十六页，共四十一页。整理ppt6.什么是细胞外表标志？其作用是什么？7.细胞外表标志的检测方法有哪些？8.利用细胞外表标志〔CD抗原〕别离细胞的方法有哪几种？9.T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞的主要生物标志是什么？10.淋巴细胞外表标志检测的临床意义是什么？第三十七页，共四十一页。整理ppt小结淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜下的形态根本是一样的，因此要对其进行进一步的分类和观察就不能采用形态学的方法，而要依靠对其外表标志的检测。常用于鉴定和检测计数淋巴细胞的外表标志是CD抗原。第三十八页，共四十一页。整理ppt进一步区分淋巴细胞亚群可使某一类淋巴细胞的功能趋向一致和单一。但目前看来，还很少有只通过一个CD抗原就能将某一类淋巴细胞亚群指示出来的CD抗原，CD抗原指示出来的淋巴细胞亚群多数都是相对特异。第三十九页，共四十一页。整理ppt根据T细胞的免疫效应功能和外表CD分子表达至少可以分为：辅助性T细胞、细胞毒性T细胞和调节性T细胞；SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标，以CD5和CD19为标志可将B细胞分为B1和B2两个亚群；目前多以CD3-、CD16+、CD56+作为NK细胞的典型标志。第四十页，共四十一页。整理ppt内容总结第三章免疫细胞的别离及其外表标志检测技术。一、

免疫细胞外表标志的检测方法。T细胞和B细胞