糖化血红蛋白的标准化要点课件

三HbA1c的检测

目录HbA1c常规测定方法1HbA1c检测的标准化2HbA1c检测的规范化3

HbA1c的常规测定

41978年---第一台商品化仪器问世1988年---美国糖尿病协会（ADA）建议：HbA1c常规检测项目目前检测方法

原理

不同方法测定糖化血红蛋白不同的组分HbA1c、HbA1（A1a+A1b+A1c）或总糖化血红蛋白目前皆以HbA1c或等同于HbA1c来报告结果

电荷不同离子交换色谱法电泳结构不同免疫法亲和层析法、酶法HbA1c测定方法我国（室间质评）

国际（CAP能力验证）

2011年

2008年

2011年

1995年

免疫法

26%

36%

71%

11%

离子交换色谱法

53%

44%

28%

24%

亲和层析法

10%

9%

1%

54%

其它

11%

11%

电泳法

11%

从室间质评回报统计的在不同时间使用不同的GHB测定方法的实验室比例目录HbA1c常规测定方法1HbA1c检测的标准化2HbA1c检测的规范化3标准化目的:实现检验结果的可比性—是保证检验质量手段意义（益处）可以建立起普遍接受（可用）的参考区间可以合并分析、比较不同医学中心的研究资料,促进医学研究和研究成果的转化能够有效地应用询证医学和检验医学实践指南HbA1c标准化九十年代中晚期，美国糖尿病控制与并发症研究(DCCT)和英国大规模的前瞻性糖尿病研究(UKPDS)的研究结果显示：强化的血糖控制能显著降低糖尿病并发症的危险和进展，强调了HbA1c在糖尿病患者中血糖控制监测的作用。从那时起，大多数临床糖尿病组织都将HbA1c作为糖尿病治疗目标，糖化血红蛋白检测在世界范围内被广泛应用.

1993CAPSURVEY(mean±2SD)

1050%实验室报告HbA1c21%实验室报告HbA129%实验室报告GHB多数实验室结果与靶值偏倚很大，不具有可比性NGSP

（NationalGlycohemoglobin

StandardisationProgram：美国国家糖化血红蛋白标准化计划）11

美国临床化学协会（AACC）在1993年成立分委会进行GHB测定的标准化工作，使不同实验室（方法）的结果可溯源至DCCT的参考结果。标准化工作由美国国家糖化血红蛋白标准化计划（NGSP）指导委员会于1996年完成。目的：标准化糖化血红蛋白检测，使临床实验室的测定结果与DCCT具有可比性该体系在校准和规范商业化HbA1c检测领域发挥了极其重要的作用。NGSP对厂家方法的认证12NGSP要求：生产厂家有责任确保其生产的试剂、校准品、质控品、（色谱柱）所测结果与认证结果保持一致认证标准：逐步提高认证有效期：1年/docs/methods.pdfNGSP对实验室的认证由NGSP的二级参考实验室来对实验室进行认证工作得到认证的实验室所测结果是可靠的认证标准：逐步提高认证有效期：1年/docs/labs.pdf我国目前有近20家实验室得到认证CAPSURVEY(mean±2SD)142003年，90%实验室以HbA1c报告结果，室间CV<5%，

测定值与靶值的偏倚<0.8%HbA1cIFCC国际标准化151995年IFCC成立HbA1c标准化工作组，旨在建立具有高计量学水准的参考系统，用于HbA1c检测的标准化和校准，

实现HbA1c测定的全球可比性明确定义HbA1c葡萄糖与血红蛋白β链N末端缬氨酸残基稳定结合的化合物.建立一个特异测定HbA1c的参考方法高效液相色谱串联质谱或高效液相色谱串联毛细管电泳制备纯化的HbA1c和HbA0标准物质建立国际参考实验室网络完成了与指定比对方法的比较工作参考方法原理HbA0六肽HbA1c六肽谷氨酸内切酶参考方法流程17溶血液制备酶解HPLC串联毛细管电泳HPLC串联质谱IFCC结果与指定比对方法结果之间的关系HbA1c-NGSP=0.915HbA1c-IFCC+2.15(r2=0.998)

ClinChem.2004,50:166-174回归方程能够将IFCC的结果与DCCT所得出的有着重要临床意义的结果联系起来。IFCC结果与比对方法结果的关系

19IFCCHbA1c(mmol/mol)NGSPHbA1c

(%)JDSHbA1c

(%)SwedishHbA1c

(%)eAG

(mmol/l)4265.8<50岁5.0>50岁5.37.05376.66.138.66487.77.210.27598.78.311.886109.79.413.4971110.710.514.91081211.711.616.5小结临床试验确立了HbA1c和糖尿病并发症之间的相关性，将这些试验结果统一后，NGSP非常成功地降低由于不同实验方法和不同实验室所造成HbA1c的差异。IFCC的参考方法有利于将剂量溯源升级到更高等级的参考系统。已建立起这两种单位相互转换的等式。报告何种单位由各国自行决定。小结HbA1c是糖尿病血糖控制的金标准，是国际专家委员会、WHO和许多国家的糖尿病诊断标准，其测定结果应该标准化HbA1c的测定方法有多种，测定原理、组分各不相同，由于IFCC及NGSP的标准化工作，目前都以HbA1c或等同于HbA1c来报告结果国际上存在不同的标准化组织，不同组织的结果数值是不同的目录HbA1c检测的标准化2HbA1c常规测定方法1HbA1c检测的规范化3HbA1c标准化目标精密度：室间变异系数（CV）<5%只有控制室内（总）CV<3%，才可能实现室间CV<5%准确度：国际糖尿病专家委员会、ADA推荐：±0.5%HbA1c准确度建立在精密度基础上2009年美国99%溯源到DCCT/UKPDS

英国97%、加拿大100%室间CV<5%，测定值与靶值的Bias<0.3%

CAPSURVEY(mean±2SD)

252010年，99%实验室以HbA1c报告结果，室间CV<5%，

测定值与靶值的偏倚<0.8%HbA1c国内、外变异度对比26靶值：5.4最大值：6.3

最小值：4.6变异系数：3.5靶值：5.5最大值：7.2最小值：3.9变异系数：8.41所有仪器组

2

AbbottArchitectSystem/Aeroset组3

Bio-RadHPLC组4

TOSOHG7组

5

DrewDS5/Bio-RadDiastat组

6其它仪器组7

PrimusHPLC组

8

NycoCardReaderII组

9

ARKRAYHA-8160组

10

BeckmanSynchronSystems组11

OlypusAUSystems组12

RocheCOBAS,Roche/Hitachi组13惠中MQ-2000我国室间质评CAP能力验证我国201111样本结果(mean±2SD）靶值：6.6%

HbA1c组实验室数平均值中位数标准差变异系数（%）最大值最小值AbbottArchitectSystem/Aeroset组146.556.590.7311.157.745.20Bio-RadHPLC组1676.536.600.294.517.105.80TOSOHG7组696.716.700.426.318.105.00DrewDS5/Bio-RadDiastat组287.217.050.679.308.456.20其它仪器组586.496.570.6910.648.004.70PrimusHPLC组346.806.800.213.047.306.37NycoCardReaderII组246.406.400.8112.678.704.90ARKRAYHA-8160组326.786.800.253.677.206.10BeckmanSynchronSystems组86.816.710.639.217.605.76OlypusAUSystems组466.346.280.8413.198.444.58RocheCOBAS,Roche/Hitachi组796.636.670.537.987.905.40惠中MQ-200087.957.600.9311.709.306.702010-2011国内外变异度对比我国CAP56家三甲医院实验室，采用国际普遍使用的方法（HPLC法、免疫法）2010年EQA我国不同级别实验室变异度对比2010年我国参加国际比对平均值Bias（%HbA1c)CV（%）C16.530.32.52C28.000.222.82C310.490.263.18C46.450.062.52NGSP靶值16家三甲医院实验室，采用国际普遍使用的方法（HPLC法、免疫法）影响检测质量的因素方法选择使用方法种类多，有的方法没有进行标准化认证方法使用人员：能力参差不齐室内质控：少做、不做校准：不能定期、定时校准，不使用配套校准品试剂：色谱柱（适用时）：超限使用仪器：不能定期维护、保养HbA1c检测质量保证31宗旨：建立HbA1c检测的技术规范，提高HbA1c测定结果的可比性程度指南从方法的选择方法的规范使用测定结果质量的监测三个质量环节制定了系统的技术规范原则，以保证糖化血红蛋白测定结果质量方法的选择32应选用测定结果可溯源至IFCC参考系统的分析系统，例如：获得NGSP认证。NGSP认证的有效期为1年，查询网址：/docs/methods.pdf实验室应知晓所选分析系统可能存在的干扰因素不同分析系统干扰因素是不同的POCT（point-of-caretesting）方法的精准性不能满足临床需求，目前不应用于糖尿病的诊断方法性能33实验室准备采用一个新的分析系统（新仪器、新试剂）测定临床样品前，应对系统性能进行验证精密度：室内CV<3%目前许多测定方法的室内CV小于2%只有控制室内CV小于3%，才能实现室间CV小于5%，应控制室内CV小于3%精密度实验方法分别采用不少于2个水平的质控物或样品（高、低值），每天测定2次（2次时间间隔不少于2小时），每次重复测2个结果，测定20个工作日，以20个工作日的80个结果计算平均值、标准差及变异系数时间长度很重要，因为只有在相对较长的时间内，一些因素（不同批号试剂/校准物/色谱柱（适用时）、校准频率、不同操作人员、不同分析仪状况、不同环境条件等）对测定结果的影响才能体现，可以客观反映实际情况方法的规范化使用实验室应制定标准操作程序项目名称方法学原理样本（采血管/抗凝剂、储存）校准程序（校准日期间隔、校准方、校准方法）室内质控程序样品的测定程序试剂色谱柱（适用时）干扰因素参考区间（范围）维护程序

内部质量控制室内质控每个测定日的开始和结束均应做质控分析应同时测定至少2个不同水平（高、低值）的质控品冻干粉质控品在更换试剂或色谱柱时可能会有基质效应，程度取决于所用方法更换试剂、校准物、仪器设备的关键配件或质控值超出质控限，应再做质控样品采集、处理和储存检测样品不受饮食和采血时间的影响不同测定方法的样品稳定性是不同的一般情况下，全血样品在4℃储存，可以稳定1周在-70℃或更低温度可以长期储存，至少稳定