北中大中药鉴定学实验指导01基本实验-15注射用双黄连的鉴定

PAGEPAGE31.15注射用双黄连的鉴定内容提要本实验采用理化、显微和生物鉴定法，对注射用双黄连进行系统鉴定，以控制其产品和原材料的质量。通过实验掌握注射用双黄连鉴定特征，熟悉中药注射用粉针剂鉴定的一般方法和基本内容。原理根据供试品的化学成分和剂性特点，主要采用理化学鉴定的方法对其质量进行鉴定。仪器、材料与试剂(1)仪器与材料1)仪器聚酰胺薄膜（5cm×7.5cm），超声波提取器，三角瓶，365nm紫外光分析灯，滤纸，漏斗，铁台架，层析缸，微量进样器（5µL，20µL），硅胶G-CMC-Na薄层板，电吹风，高效液相色谱仪，容量瓶，显色剂喷雾器，分析天平，量筒，烧杯，玻璃珠，锥形瓶，试管，离心机，恒温箱，酸度计，pH试纸等。2)材料供试品：注射用双黄连(哈尔滨中药二厂生产)。对照品：黄芩苷，绿原酸，连翘标准药材。（2）试剂75%甲醇，醋酸，氯仿，10%硫酸乙醇溶液，冰醋酸，三乙胺，蒸馏水，兔血，生理氯化钠溶液，鞣酸试液，稀盐酸，3%氯化钙溶液。操作步骤（1）性状鉴定按照药典规定的取样方法，取供试品，主要观察和描述其内容物的形态、颜色、气味等特征。本品应为黄棕色无定形粉末或疏松固体状物，味苦、涩，有引湿性。（2）理化鉴定1）薄层色谱法黄芩和金银花的定性鉴别：取供试品60mg，加75%甲醇5mL，超声处理使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷、绿原酸对照品，分别用75%甲醇制成1mL含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各1µL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下观察。连翘的定性鉴别：取本品0.1g，加甲醇10mL，超声处理20min，放置，取上清液作为供试品溶液。另取连翘对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。吸取上述2种溶液各10µL，分别点于同一硅胶G-CMC-Na薄层板上，以氯仿-甲醇（5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷10%硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰。2）高效液相色谱法黄芩的含量测定：供试品每支含黄芩按黄芩苷（C21H18O11）计算，应为128~173mg。填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶。流动相：甲醇-水-冰醋酸（40∶60∶1）。检测波长：274nm。理论板数：按黄芩苷峰计算应不低于2000。取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成1mL含0.05mg的溶液，作为对照品溶液。取供试品10mg，精密称定，加50%甲醇适量，超声处理20min使溶解，制成每1mL约含0.2mg的溶液，作为供试品溶液。分别精密吸取对照溶液与供试品溶液各20µL，注入液相色谱仪，测定。金银花的含量测定：供试品每支含金银花以绿原酸（C16H18O9）计算，应为8.5~11.5mg。填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶。流动相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（15∶85∶1∶0.3）。检测波长：324nm。理论板数：按绿原酸峰计算应不低于6000。取绿原酸对照品适量，精密称定，加水制成1mL含0.02mg的溶液，作为对照品溶液。取本品60mg，精密称定，置50mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别精密吸取对照溶液与供试品溶液各20µL，注入液相色谱仪测定。（3）生物鉴定溶血与凝聚检测：取兔血数毫升，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10min，除去纤维蛋白原，使成脱纤血，加约10倍量的生理氯化钠溶液，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红血球再用生理氯化钠溶液洗涤2~3次，至上清液不显红色为止，将所得红细胞用生理氯化钠溶液配成2%的混悬液（表）。表溶血与凝聚试验各溶液的配制试管编号1234562%红血球混悬液/mL生理氯化钠溶液/mL供试品溶液/mL2.52.00.52.52.10.42.52.20.32.52.30.22.52.40.12.52.50.0取试管6支，按表中配比量依次加入2%红细胞混悬液和生理氯化钠溶液，混匀后，于37℃恒温箱中放置30min，分别加入不同量的药液（取本品600mg，用生理氯化钠溶液溶解并稀释成20mL；第6管为对照管），摇匀后，置37℃恒温箱中，开始每隔15min观察1次，1h后，每隔1h观察1次，共观察2h，按上法检查，以第3管为准，本品在2h内不得出现溶血和红细胞凝聚。（3）检查1）pH值测定取供试品加水制成每1mL含25mg的溶液，pH应为5.7~6.7。2）蛋白质检查取供试品0.6g，加水10mL使溶解，取2mL，置试管中，滴加鞣酸试液1~3滴，不得产生浑浊。3）草酸盐检查取供试品0.6g，加水10mL使溶解，用稀盐酸调节pH值至1~2，保温滤去沉淀，调节pH值至5~6，取2mL，加3%氯化钙溶液2~3滴，放置10min，不得出现混浊或沉淀。4）水分测定用减压干燥法测定，本品含水分不得过5.0%。（略）5）重金属测定取本品1.0g，按药典重金属检查法第二法检查，含重金属不得过百万分之十。（略）6）砷盐测定取本品0.40g，加2%硝酸镁乙醇溶液3mL，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500~600℃炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5mL与水21mL使溶解，按药典砷盐检查法一法检查，含砷量不得过百万分之五。（略）要点及难点解答（1）中成药的鉴定特征与原料药的特征相关。通过对原料药鉴定特征的分析并结合中成药的特点，确定其鉴定的内容和指标。（2）根据处方