吸光光度法的灵敏度与准确度

吸光光度法的灵敏度与准确度1第一页，共三十五页，编辑于2023年，星期二例1邻二氮菲光度法测铁

(Fe)=1.0mg/L,b=2cm,A=0.38

计算和解：c(Fe)=1.0mg/L=1.0×10-3/55.85=1.8×10-5mol/L2第二页，共三十五页，编辑于2023年，星期二c=1.0mg/L=1.0×10-3g/1000mL=1.0×10-4g/100mL3第三页，共三十五页，编辑于2023年，星期二二.准确度—仪器测量误差光度计的读数误差一般为0.2～2％(ΔT),由于T与浓度c不是线性关系，故不同浓度时的ΔT引起的误差不同。100806040200T%

c1

c2

c3

T

T

T-透光率读数误差

cc1c1c2c2c3c3><4第四页，共三十五页，编辑于2023年，星期二1086420204060800.70.40.20.1AT%Er(36.8)0.434浓度测量的相对误差与T(或A)的关系实际工作中，应控制T在10～70％,

A在0.15～1.0之间(调c,b,)5第五页，共三十五页，编辑于2023年，星期二8.4显色反应与分析条件的选择：：：：助色团－NH2，－OH，－X（孤对电子）ne8.4.1显色剂与显色反应O生色团：－N＝N－，－N＝O，OC=S,－N（共轭双键）πe无机显色剂:SCN-

[Fe(SCN)]2+H2O2

[TiO·H2O2]2+有机显色剂:6第六页，共三十五页，编辑于2023年，星期二有机显色剂

CH3－C－C－CH3HO－NN－OH＝＝NNOHCOOHSO3HOO型：NNNOH

OHON型：PARNHNHNSNS型：双硫腙NN型：丁二酮肟邻二氮菲磺基水杨酸7第七页，共三十五页，编辑于2023年，星期二显色反应的选择*灵敏度高，一般ε>104*选择性好*显色剂在测定波长处无明显吸收。

对照性好,λmax>60nm.*反应生成的有色化合物组成恒定，稳定。*显色条件易于控制，重现性好。8第八页，共三十五页，编辑于2023年，星期二8.4.2显色条件的确定c(R)c(R)c(R)1.显色剂用量（c(M)、pH一定）Mo(SCN)32+浅红Mo(SCN)5橙红Mo(SCN)6-浅红Fe(SCN)n3-n9第九页，共三十五页，编辑于2023年，星期二2.显色反应酸度（c(M)、c(R)一定）pH1<pH<pH2pH10第十页，共三十五页，编辑于2023年，星期二邻二氮菲－亚铁反应完全度与pH的关系Fe2++3RH＋H＋A柠檬酸c(R)≈[R´]=10-4mol·L-1β3＝1021.3β3FeR311第十一页，共三十五页，编辑于2023年，星期二pH3～8为适宜的酸度范围12第十二页，共三十五页，编辑于2023年，星期二3.显色温度及显色时间另外，还有介质条件、有机溶剂、表面活性剂等T1(℃)T2(℃)t(min)A13第十三页，共三十五页，编辑于2023年，星期二8.4.3干扰及消除Co2＋,Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2(蓝)⑴NaFSCN－Co2+Fe2+,Sn4+(2)Sn2+Co(SCN)2SCN－测Co2＋(含Fe3+):(掩蔽法)1.化学法14第十四页，共三十五页，编辑于2023年，星期二Co2+,Zn2+,Ni2+,Fe2+

CoR,ZnRNiR,FeRCoR,Zn2+

,Ni2+

,Fe2+

钴试剂RH+测Co2＋:(生成络合物性质不同)如不能通过控制酸度和掩蔽的办法消除干扰，则需采取分离法。测Fe3＋:(控制pH)Fe3+,Cu2+FeSS（紫红）Cu2+pH2.5SS15第十五页，共三十五页，编辑于2023年，星期二2.物理法—选择适当的测定波长515655415500钍-偶氮砷III

钴-亚硝基红盐

AA络合物络合物试剂试剂16第十六页，共三十五页，编辑于2023年，星期二1.仅络合物有吸收，溶剂作参比。

如phen—Fe2+标准曲线2.待测液也有吸收，被测液作参比。

如测汽水中的Fe3.显色剂或其他试剂也有吸收，空白溶液作参比

例:邻二氮菲光度法测Li2CO3中的Fe，参比溶液为不含Li2CO3样品的所有试剂。4.干扰组分与显色剂有反应,又无法掩蔽消除时：1）掩蔽被测组分，再加入显色剂，作参比.2）加入等量干扰组分到空白溶液中,作参比.

--选择适当的参比溶液17第十七页，共三十五页，编辑于2023年，星期二8.5吸光光度法的应用1.单一组分测定1)金属离子:Fe-phen,Ni-丁二酮肟,Co-钴试剂2)磷的测定:DNA中含P～9.2%,RNA中含P～9.5%,可得核酸量.H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3=(NH4)3PO4·12MoO3+12NH4NO3+12H2O磷钼黄(小)磷钼(V)蓝(大)Sn2+18第十八页，共三十五页，编辑于2023年，星期二3)蛋白质测定—溴甲酚绿、考马司亮蓝等4)氨基酸测定—茚三酮(紫色化合物)5)水质检测:NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+----6)药物含量测定—比吸光系数定量；荷移光谱法测定.7)紫外吸收(UV):NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。19第十九页，共三十五页，编辑于2023年，星期二2.多组分的测定

xl1,eyl1,exl2,eyl2由x,y标液在1,2处分别测得在1处测组分x,在2处测组分yb)在1处测组分x;在2处测总吸收,扣除x吸收,可求yc)x,y组分不能直接测定

A1=exl1bcx+eyl1bcy(在1处测得A1)

A2=exl2bcx+eyl2bcy(在2处测得A2)20第二十页，共三十五页，编辑于2023年，星期二3.光度滴定NaOH滴定对硝基酚pKa=7.15 间硝基酚pKa=8.39pKa=1.24V1V2V(NaOH)/mL对硝基酚间硝基酚酸形均无色.碱形均黄色21第二十一页，共三十五页，编辑于2023年，星期二典型的光度滴定曲线依据滴定过程中溶液吸光度变化来确定终点的滴定分析方法。Vsp滴定剂吸收Vsp被滴物吸收Vsp滴定剂与待测物均吸收Vsp产物吸收22第二十二页，共三十五页，编辑于2023年，星期二4.络合物组成的测定(1)摩尔比法:固定cM,改变cR

1:13:1c(R)/c(M)A1.02.03,0

23第二十三页，共三十五页，编辑于2023年，星期二(2)等摩尔连续变化法:M:R=1:10.50.33cM/ccM/cM:R=1:224第二十四页，共三十五页，编辑于2023年，星期二表观形成常数的测定(设M、R均无吸收)0.5cM/cM:R=1:1A0Ac(M)=c(R)=cMmRn型?25第二十五页，共三十五页，编辑于2023年，星期二5.一元弱酸离解常数的测定p330HLH＋＋LKa＝[H+][L]/[HL]高酸度下，几乎全部以HL存在，可测得AHL＝εHL·c(HL)；低酸度下，几乎全部以L存在，可测得AL＝εL·c(HL).代入整理：[HL][L]或配制一系列c相同,pH不同的溶液,测A.26第二十六页，共三十五页，编辑于2023年，星期二MO吸收曲线Aa(HL)Ab(L)123456Ab654321Aa350400450500550600/nmA曲线pH11.10,1.3822.6533.0643.4853.9865.53,6.80由每份溶液的一对pH、A，可求得一个Ka,取平均值即可.27第二十七页，共三十五页，编辑于2023年，星期二MO离解常数的测定

作图法AHL3.32(pKa)123456ApH=pKapHAL0.60.40.20-0.2-0.4-0.63.04.0pH3.3428第二十八页，共三十五页，编辑于2023年，星期二6.双波长分光光度法消除干扰(不要求)在2，A2

=

Ax2+Ay2在1，A1=

Ax1+Ay1A=A2

-

A1

=

Ax2+Ay2

–(Ax1+Ay1)

=

Ax2–Ax1

=AxAy2

＝Ay1Ax=(x2－x1)bcx消除了y的干扰X被测Y干扰211Ay1AX1Ay2AX2A/nm´29第二十九页，共三十五页，编辑于2023年，星期二双波长分光光度法消除浑浊背景干扰12AA

1-A

2=△A

△A∝c例牛奶中微量Fe的测定30第三十页，共三十五页，编辑于2023年，星期二7.导数分光光度法(不要求)A~图混合物导数光谱0123431第三十一页，共三十五页，编辑于2023年，星期二常药降压片中氢氯噻嗪含量的测定1.氢氯噻嗪.2.硫酸双肼肽嗪3.盐酸可乐定4.常药降压片250290330412312A32第三十二页，共三十五页，编辑于2023年，星期二肝中茚满二酮类抗凝血杀鼠剂的固相萃取方法：肝匀浆用乙腈浸提，浸提液用6％的HClO4稀释，然后用GDX100大孔树脂萃取，用二氯甲烷5mL洗脱杀鼠剂，40℃挥干，剩余物用0.1mol·L-1NaOH4mL溶解后，紫外导数光谱测定。A0.0cdabDa.空白肝普通光谱b.2.5mg/L敌鼠溶液的普通光谱c.空白肝二阶导数光谱d.2.5mg/L敌鼠溶液的二阶导数光谱33第三十三页，共三十五页，编辑于2023年，星期二8.1了解分子对光的吸收与溶液颜色的关系.吸收曲线—定性分析的基础。定量分析的基础—朗